液相芯片技术检测儿童急性呼吸道感染病原体的研究

目的探讨液相芯片技术快速检测呼吸道病原体的可行性,为重大传染病原体核酸快速应急检测平台的建立提供实验依据。方法采用xTAG~?Respiratory Viral Panel Fast v2试剂盒对74例咽拭子临床标本进行检测,结果与实时荧光定量PCR(RT-PCR)进行比较。结果 74例咽拭子临床标本经液相芯片技术与RT-PCR检测,阳性率分别为77.0%和68.9%,差异有统计学意义(P0.05);其中呼吸道合胞病毒、鼻病毒、肠道病毒、甲型H1N1流感病毒、腺病毒及人博卡病毒检出率差异均有统计学意义(P0.05)。结论液相芯片技术可以较准确地鉴定呼吸道病原体和检测混合感染的临床标本,具有快速、高通量等优势,可应用于呼吸道病原体的快速应急检测。     

广州市番禺区2007—2020年男男性行为人群艾滋病流行特征分析

目的:了解2007—2020年广州市番禺区男男性行为人群艾滋病（AIDS）疫情流行特征,为制定防控策略提供参考。方法:从“全国艾滋病综合防治管理信息系统”中筛选出男男性行为感染病例,采用描述性流行病学分析方法对该人群2007—2020年流行状况进行统计分析。结果:广州市番禺区2007年报告首例男男性行为感染病例,截至2...     

个性化护理干预对男同性恋HIV/AIDS患者服药依从性和自我管理能力与生存质量的影响

目的:探讨个性化护理干预对男同性恋艾滋病病毒（HIV）感染者/艾滋病（AIDS）患者治疗依从性、自我管理能力与生活质量的作用效果,为制定HIV/AIDS患者随访关怀策略提供参考。方法:2019年9月至2020年12月,按照随机化原则在广州市番禺区登记在册且处于可随访状态的本地户籍及现住址均在当地的艾滋病患者中,选取经男...     

液相芯片技术与实时荧光定量PCR在检测儿童感染性腹泻病原体的比较

目的研究液相芯片检测儿童感染性腹泻病原体的效率,为感染性腹泻病的临床快速诊断提供依据。方法收集96例婴幼儿及儿童腹泻患者粪便样本,运用Luminex液相芯片进行检测,并与实时荧光定量PCR检测结果比较。结果液相芯片技术共检测出7种病原体,阳性检出率为65.63%(63/96),其中沙门氏菌的检出率最高,为50.00%(48/96);单病原感染的阳性率为39.58%(38/96),混合感染的阳性率为26.04%(25/96)。与实时荧光定量PCR相比,液相芯片检测腹泻病原体的敏感度和特异度分别为100.00%和71.74%,阴性预测值和阳性预测值分别为100.00%和79.37%(P<0.05)。结论与实时荧光定量PCR相比,液相芯片技术具有高通量、快速、可靠等特点,有利于感染性腹泻病原体的临床检测。     

利用CRISPR/Cas9系统构建4T1细胞CXCR4基因敲除稳定细胞株

目的 利用CRISPR/Cas9系统敲除4T1细胞中的CXCR4基因,构建稳定敲除CXCR4基因的4T1细胞株。 方法 根据CRISPR/Cas9靶点设计原则,在美国国立生物技术信息中心（NCBI）上找到CXCR4基因序列的外显子区域,设计两条sgRNA,用LentiCRISPRv2作为载体构建LentiCRISPRv2-sgRNA重组质粒并转化至感受态的Stbl3菌体中,挑取单克隆测序验证并扩大培养提质粒后转染至293T细胞中包装成慢病毒。 收集病毒并感染4T1细胞,通过嘌呤霉素筛选并用有限稀释法分离培养出单克隆细胞。 提取筛选出的单克隆细胞基因组DNA并对敲除位点附近的DNA片段进行PCR扩增并测序;用Real-time PCR检测细胞株CXCR4基因mRNA表达情况;用免疫印迹法检测CXCR4蛋白质的表达情况。 结果 LentiCRISPRv2-sgRNA重组质粒构建成功;经过基因组DNA片段PCR扩增测序得1株缺失27 bp的稳定敲除CXCR4基因的细胞株;细胞株CXCR4mRNA的表达量低且几乎无CXCR4蛋白质的表达。 结论 通过CRISPR/Cas9系统获得靶向敲除CXCR4基因的重组质粒,并筛选出稳定敲除CXCR4基因的细胞株。     

表达载脂蛋白L1稳定细胞系的构建北大核心CSCD

目的利用Cumate系统实现APOL1基因在293T细胞内的可诱导稳定表达。方法通过查询NCBI数据库,设计APOL1基因编码区全长引物,克隆至Cumate慢病毒质粒。嘌呤霉素筛选包装慢病毒感染的293T细胞,阳性细胞扩大培养后用不同浓度的Cumate诱导表达,利用Real-time PCR和Western blot验证APOL1的表达情况。结果构建的293T细胞系可被Cumate诱导表达APOL1,且不同浓度的Cumate对细胞表达载脂蛋白L1有不同的影响。Real-time PCR和Western blot均证明在诱导48 h后,随着诱导剂浓度的增加,APOL1表达增多,在Cumate为50μg/ml时APOL1达到最高值。结论成功构建了可诱导表达APOL1基因的293T细胞系,为研究APOL1在EV71感染人体细胞过程中的作用机制提供了稳定的实验材料。