大鼠胚胎脑组织神经干细胞的培养和鉴定

目的探讨从不同胎龄的大鼠脑组织中分离,培养神经干细胞(NSC)并对其鉴定,了解生物特性。方法通过采用机械分离和消化分离相结合的方法分离不同胎龄大鼠脑NSC。在无血清DMEM/F12(含20ng/m lbFGF,20ng/m lEGF及B27辅助培养液)中培养、传代和鉴定。诱导分化后采用SABC法对分化的细胞进行神经元特异烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)检测作细胞鉴定。结果从不同胎龄的胎鼠脑组织中成功培养出神经干细胞,胎龄为12.5天的胎鼠提取的神经干细胞集落最多,在上述条件下培养及传代的细胞不断分裂增殖,形成悬浮生长的呈巢素蛋白(nestin)阳性的神经球;用血清诱导分化为大量表达NSE阳性的神经元和GFAP阳性的星形胶质细胞。结论胎龄为12.5天胎鼠大脑皮质培养出的神经干细胞数量最多,可分化为神经元、神经胶质细胞及少突胶质细胞。     

提高胚胎大鼠神经干细胞数量的实验方法

目的：通过培养了解神经干细胞的生物学特性，着重从胎龄选择、优化分离和换液方法上提高神经干细胞的增殖能力和生长数量。方法：实验于2004-04／2005-09在锦州医学院中心实验室完成。①雌性SD大鼠35只，每日做阴道细胞涂片，排卵期雌雄合笼，以出现精栓计为受孕第0．5天。分别于孕10．5，11．5，12．5，13．5，14．5，16．5，18．5d取出大鼠胚胎体，每时间点各5只。②通过采用机械分离和酶消化分离相结合的方法分离培养不同胎龄大鼠脑神经干细胞。③换液首次采用分瓶法以后采用低速离心半量换液。④采用免疫细胞化学技术分别检测神经干细胞特征性标志巢蛋白表达和用血清诱导分化为大量神经元微管组合蛋白2和神经胶质纤维酸性蛋白表达。结果：①胎龄为12．5d的胎鼠提取的神经干细胞集落最多，其次为13．5d。②在上述条件下培养及传代的细胞不断分裂增殖，形成悬浮生长的呈巢蛋白阳性的神经球。③用血清诱导分化为大量表达微管组合蛋白2阳性的神经元和胶质纤维酸性蛋白阳性的神经胶质细胞。结论：考虑到生长因子在孕13-15d能够很好地发挥作用，故选择胎龄为13．5d胎鼠作为实验材料较为合适。通过采用机械分离和消化分离相结合的方法分离和原液首次采用分瓶法显著提高了神经干细胞的培养数量，培养出的细胞具有自我更新能力和增殖能力，可分化为神经元、神经胶质细胞及少突胶质细胞。     

大鼠骨髓基质干细胞在成骨诱导剂条件下的成骨能力

目的:观察在有成骨诱导剂存在的条件下,大鼠骨髓基质干细胞向成骨细胞转化的能力。方法:实验于2005-07/12在锦州医学院中心实验室完成。选取清洁级2月龄SD大鼠6只,无菌条件下取双侧股骨,制备单细胞悬液。采用贴壁培养与传代结合方法分离纯化大鼠骨髓基质干细胞,将2代细胞置于含有1×10-7mol/L地塞米松、10mol/Lβ-甘油磷酸钠、50mg/L抗坏血酸成骨诱导剂的培养基中,培养21～30d。应用倒置显微镜观察骨髓基质干细胞与诱导后细胞形态,描绘生长曲线,流式细胞仪检测细胞周期,并用碱性磷酸酶染色和VON-KOSSA法检测成骨能力。结果:6只大鼠均进入结果分析。①骨髓基质干细胞形态学观察结果:在成骨诱导剂里细胞增殖变缓慢,呈长梭形、成纤维细胞样或不规则形。②细胞生长曲线:1～2d为潜伏期,细胞增殖不明显;3d后细胞增殖明显加快,进入对数生长期;6d后增殖变慢为平台期。经计算细胞群体倍增时间为38h。③细胞增殖周期检测结果:G0/G1期为(82.12±4.60)%,S期为(14.35±2.32)%,G2/M期为(0.87±0.30)%。④成骨能力检测结果:细胞碱性磷酸酶染色阳性率为86%,VON-KOSSA染色提示有钙结节形成。结论:大鼠骨髓基质干细胞在有成骨诱导剂存在的情况下成骨能力较高。     

非酒精性脂肪性肝病大鼠肝脏纤溶酶原激活物及其抑制物mRNA表达

目的探讨非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠肝脏组织型纤溶酶原激活物(t-PA)及纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)基因表达及其意义.方法高脂饮食建立SD大鼠NAFLD模型,分批于造模第8、12、16、24周处死,同期设普通饮食喂养大鼠作对照.通过H-E染色和苦味酸VG染色观察肝组织学改变,应用RT-PCR对肝脏t-PA和PAI-1 mRNA的表达进行相对定量分析.结果模型组大鼠于实验8、12、24周分别形成单纯性脂肪肝、脂肪性肝炎以及脂肪性肝炎并肝纤维化.与对照组相比,模型组大鼠肝脏PAI-1 mRNA表达随造模时间延长而增强,于实验24周达高峰(1.02±0.11比0.51±0.09,P<0.01),并与其肝脂肪变及肝组织学损伤程度呈正相关(r分别为0.492和0.372, P分别<0.01和<0.05).肝脏t-PA mRNA表达随造模时间延长而逐渐减少,于实验24周降至最低(0.89±0.11比1.62±0.10,P<0.01),但其仅与肝组织学损伤程度总积分呈负相关(r=-0.368, P<0.05).结论高脂饮食大鼠肝脏PAI-1及t-PA基因表达改变可能参与NAFLD的发病.     

骨桥蛋白与CD44 v6 在乳头状甲状腺癌中的表达及意义

目的: 研究骨桥蛋白( osteopontin,OPN) 与CD44 v6 在乳头状甲状腺癌中的表达情况,探讨其与乳头
状甲状腺癌发生、发展的关系。方法: 采用免疫组化( S－P 法) 检测癌组织和相癌旁结节性甲状腺肿组织中骨桥
蛋白与CD44 v6 的表达。结果: ( 1) OPN 与CD44 v6 在乳头状甲状腺癌组织中的表达明显高于癌旁结节性甲状
腺肿组织,差异具有显著性统计学意义( P＜0．05) ; ( 2) OPN 和CD44 v6 的表达与病人性别、年龄无关,差异无统
计学意义( P＞0．05) ,OPN 和CD44 v6 的表达与微钙化、淋巴结转移、临床TNM 分期相关,差异具有显著性统计学
意义( P＜0．05) ; ( 3) OPN 和CD44 v6 在乳头状甲状腺癌中的表达存在正相关( P＜0．01,r = 0．559) 。结论: ( 1) OPN
和CD44 v6 可能参与乳头状甲状腺癌的发生; ( 2) OPN 和CD44 v6 与乳头状甲状腺癌的恶性程度及局部浸润有
关; ( 3) 乳头状甲状腺癌组织中OPN 和CD44 v6 的表达存在显著相关性,表明OPN 和CD44 v6 共同参与了乳头
状甲状腺癌的发生、发展。     

Toll样受体及内毒素信号传导研究进展

1997年以来 ,《Ｎａｔｕｒｅ》(《自然》杂志 )发表人类Ｔｏｌｌ蛋白[1]和《Ｓｃｉｅｎｃｅ》(《科学》杂志 )发表Ｔｏｌｌ样受体 (Ｔｏｌｌ ｌｉｋｅｒｅｃｅｐｔｏｒ ,ＴＬＲ)及其生物学作用后[2 ] ,ＴＬＲ研究开始成为热点。研究揭示了ＴＬＲ是内毒素信号传导链中致病的关键环节。本文着重介绍ＴＬＲ4及其在内毒素信号传导中的作用 ,简略介绍与ＬＰＳ致病的其它相关分子 ,并对未来研究阻断内毒素致病的方法和途径提出设想。一、脂多糖 (ＬＰＳ)与血液中相关结合蛋白目前认为 ,革兰阴性细菌进行活体繁殖或崩解时可以释放内毒素或ＬＰＳ ,…     

生物信息学分析IGF-2R在乳腺癌中的作用机制

目的 确定IGF-2R基因对乳腺癌的调控作用,挖掘参与乳腺癌发生发展潜在的基因及通路。方法利用“GEOquery”“idmap2.0”“Limma”“Clusterprolifer”等R包筛选乳腺肿瘤组织与正常组织的差异表达基因,并进行GO和KEGG分析。采用STRING、GEPIA和UALACN数据库绘制蛋白互作网络,分析IGF-2R基因与乳腺癌Hub基因的相关性,以及IGF2R表达水平与乳腺癌患者基本情况的相关性。结果 筛选得到128个上调差异表达基因,256个下调差异表达基因;IGF-2R基因与核心基因ASPM、RRM2相关性显著;IGF-2R基因表达水平在乳腺癌组织中显著降低,差异有统计学意义（P <0.05）;IGF-2R表达水平与患者年龄（20～80岁）、临床分期（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）、绝经情况和淋巴结转移密切相关,差异有统计学意义（P <0.05）。IGF-2R基因的表达水平仅在Luminal型（LuminalA型、Luminal B-HER2阴性型）乳腺癌中显著降低,差异有统计学意义（P <0.05）。结论 IGF-2R通过与ASPM和RRM2正相关参与乳腺癌...     

神经干细胞移植修复大鼠脊髓半切伤的研究

目的：观察神经干细胞移植修复脊髓半切伤的疗效并探讨移植最佳时机。方法：制备大鼠T13-L1脊髓半切伤模型，取胎龄13、5d胎鼠大脑组织，体外分离、培养、诱导神经干细胞，并采用免疫细胞化学技术分别检测NSC（neural stemcell）特征性标志Nestin（巢蛋白）表达和用血清诱导分化为大量神经元NSE（neuron specific enolas）和神经胶质细胞GFAP（glial fibrillary acidic protein）表达。用明胶海绵吸附BrdU（5-溴脱氧尿嘧啶）标记好的神经干细胞悬液移植到脊髓半横断处，移植时间选择损伤后立即移植、损伤后第9、14d。观察移植后的大鼠行为的变化，通过CBS（combine behavioral score）评分和爬网格实验评价大鼠的运动功能恢复情况，并进行免疫组化鉴定，光学显微镜观察移植神经干细胞的存活和迁移。结果：在上述条件下培养及传代的细胞不断分裂增殖，形成悬浮生长的呈Nestin阳性的神经球；用血清诱导分化为大量表达NSE阳性的神经元和GFAP阳性的神经胶质细胞。与对照组相比，神经干细胞移植组明显修复了损伤结构，改善了下肢的功能，尤其是第9d移植组。结论：神经干细胞移植促进了脊髓损伤后神经结构和功能的恢复，是治疗脊髓半切伤一种有效方案，考虑综合因素移植干细胞的最佳时机应选损伤后9d左右。     

临床医学硕士研究生分类招生制度改革与实践

对内蒙古地区高等医学院校2017～2019年的临床医学研究生分类录取人数情况进行统计回顾,并对实践教学现状情况进行调研,分析问题的根源,结合当前我国医学院校的特点,深入挖掘直接影响医学院校临床医学人才选拔工作质量的重要核心性因素.随着我国医学院校对于研究生人才培养和教育工作的深化和改革,对于临床医学科学学位和专业学位硕士研究生的招生,科学完善的临床医学硕士研究生分类招生改革制度对于针对性地选拔出更多优秀的科研型技术人才及专业型技术人才意义重大.     

B超诊断骶尾部脊索瘤1例

患者女，４７岁。因双下肢疼痛，行走困难一年，加重一月来诊。查体未见异常体征。临床怀疑腰骶椎间盘突出。Ｂ超所见，直肠局部前突，其后方显示一６．５ｃｍ×５．４ｃｍ×５．８ｃｍ不匀质实质性稍低回声团，边缘清楚，与骶尾骨关系密切，内部可见散在强回声团，伴声影...