结直肠癌组织中血浆激肽释放酶B1蛋白的表达变化及其临床意义

目的 观察结直肠癌组织中血浆激肽释放酶B1(KLKB1)蛋白的表达变化,并探讨其临床意义.方法 结直肠癌患者86例,均接受根治性手术治疗,术中留取癌组织及癌旁组织,采用免疫组织化学法检测结直肠癌组织及癌旁正常组织中KLKB1蛋白,分析KLKB1蛋白阳性表达与结直肠癌患者临床病理参数的关系及相关性.结果 结直肠癌组织及癌...     

大鼠原代肝星状细胞的分离方法研究

目的 探讨分离肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)的有效方法.方法 采用链霉蛋白酶E (pronase E)和胶原酶(collagenase)灌注消化大鼠肝脏,12%Nycodenz密度梯度离心方法分离大鼠原代肝星状细胞.结果 原代肝星状细胞的细胞得率4×107/只大鼠,纯度为95%~98%,存活率96%.结论 肝脏消化酶灌注结合Nycodenz密度梯度离心是一种稳定的分离培养肝星状细胞的方法.     

脂肪肝对阿德福韦酯治疗慢性乙型肝炎抗病毒疗效的影响分析

目的：探讨脂肪肝对慢性乙型肝炎（C HB ）抗病毒疗效的影响。方法选择2011年1月至2014年4月在该院门诊就诊的乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）阳性CHB患者204例为研究对象,按照是否合并脂肪肝分为2组,其中单纯CHB患者122例为对照组,CHB合并非酒精性脂肪肝（NAFID）患者82例为观察组。两组患者均给予阿德福韦酯（10 mg／d）口服抗病毒治疗24周,观察两组氨基转移酶复常率（生物化学应答）、HBeAg阴转率（血清学应答）及HBV‐DNA阴转率（病毒学应答）的差异。并将两组中治疗后获得病毒学应答的患者再次进行比较,观察在获得病毒学应答患者中,单纯CHB组和CHB合并NAFLD组氨基转移酶复常率、HBeAg阴转率的差异。结果 CHB合并 NAFLD组氨基转移酶在治疗24周复常率为58．5％,显著低于单纯CHB组（72．1％）,差异具有统计学意义;单纯CHB组 HBV‐DNA 在治疗24周阴转率（67．2％ vs ．51．2％）及 HBeAg 阴转率（52．5％ vs ．37．8％）均显著高于合并NAFLD组,差异具有统计学意义;在获得病毒学应答患者中,单纯CHB组氨基转移酶复常率为96．3％,显著高于CHB合并NAFLD组（66．7％）,差异具有统计学意义。而在获得病毒学应答患者中,HBeAg阴转率在单纯CHB组为78．0％,在CHB合并NAFLD组为73．8％,单纯CHB组略高于合并NAFLD组,但二者差异无统计学意义。结论脂肪肝对HBeAg阳性CHB患者应用阿德福韦酯抗病毒疗效有影响,而合并NAFLD是CHB抗病毒治疗时达病毒学应答和血清学应答而未达生物化学应答的重要原因。     

早期胃癌内镜特点及高危因素分析

目的探讨早期胃癌内镜下表现的高危因素,提高早期胃癌的内镜检出率。方法回顾性分析该院2016年12月-2018年6月行胃镜精查患者的临床病理资料,共245例患者247处病变。记录患者内镜诊断、病变大小、形态、颜色、是否附着黏液、病变部位、靛胭脂染色情况、窄带成像技术联合放大内镜(NBI-ME)下表现等,先用2检验分析早期胃癌的相关危险因素,再应用多因素Logistic回归模型分析早期胃癌内镜下表现的高危因素,并进行分层分析,同时探讨NBI-ME对早期胃癌的诊断敏感性和特异性。结果 2检验分析结果表明:萎缩性胃炎、病变位于胃窦部、病变形态为凹陷型、病变 1 cm、白光下存在边界、颜色发红、靛胭脂染色后不着色及存在边界、NBI-ME下观察可见边界、表面微结构不规则、微血管不规则均与早期胃癌有关;Logistic回归分析表明:靛胭脂染色后不着色(O^R=4.474,95%CI:1.576～12.701,P=0.005)、NBI-ME观察存在边界(O^R=7.608,95%CI:1.427～40.570,P=0.017)、NBI-ME观察微血管不规则(O^R=8.051,95%CI:1.509～42.949,P=0.015)为早期胃癌的独立危险因素。分层分析显示:NBI-ME观察微血管不规则联合靛胭脂染色不着色诊断早期胃癌的准确性为78.3%。NBI-ME诊断早期胃癌的敏感性为72.1%,特异性为78.9%。结论内镜下发现病变靛胭脂染色后不着色、NBI-ME观察到微血管不规则或NBI-ME观察到存在边界,提示为早期胃癌可能性较大。其中NBI-ME观察到微血管不规则联合靛胭脂染色不着色诊断早期胃癌的准确度较高。     

Vasohibin-1在食管癌中的表达及意义

目的分析Vasohibin-1、VEGF-A在食管癌中的表达水平及意义,为治疗食管癌提供新的方向和靶点。方法选取2017年3月-2018年2月期间在我院接受治疗的64例食管癌患者作为本次试验的研究对象,食管癌组织和癌旁组织均为手术切除标本,且经过本院病理科确诊,分别采用免疫组织化学法和实时定量PCR法检测肿瘤组织及癌旁正常组织中Vasohibin-1及VEGF-A、MVD的表达情况,研究其在食管癌中的表达意义。结果食管癌组织中Vasohibin-1及VEGF-A的mRNA表达水平显著高于癌旁组织中Vasohibin-1及VEGF-A的mRNA表达(P0.05);食管癌组织中Vasohibin-1及VEGF-A的阳性表达率显著高于其在癌旁组织中的表达(P0.05);食管癌组织MVD显著高于癌旁组织(P0.05);VEGF-A的表达与肿瘤的TNM分期、远处转移、分化程度相关(P0.05),与年龄、性别和肿瘤大小无关(P0.05)。结论 Vasohibin-1与食管癌的发生、发展有关。     

吉非替尼联合苦参碱对人结肠癌细胞的抑制作用

目的:检测吉非替尼联合苦参碱对人结肠癌细胞系的增殖、凋亡和迁移能力的影响及其相关机制。方法:在人结肠癌细胞系HCT116、SW480和SW620中采取单用苦参碱(MA)、单用吉非替尼(GEF)及联合苦参碱和吉非替尼处理(GEF+MA),用CCK8法检测人结肠癌细胞系的增殖能力;通过克隆形成实验检测人结肠癌细胞系的克隆形成能力;通过划痕实验检测人结肠癌细胞系的迁移能力;通过流式细胞术检测细胞的周期变化及细胞凋亡率的变化;采用Western blot检测人结肠癌细胞系中Caspase-3、Bax、Vemintin、SNAIL、Cyclin D1、P-AMPK、AMPK、P-mTOR和mTOR的蛋白表达水平变化。结果:吉非替尼或苦参碱可以在一定程度上抑制人结肠癌细胞系的增殖能力、克隆形成能力及迁移能力(P0.05),但相对于单一用药组,联合用药可以更显著抑制人结肠癌细胞系的增殖能力、克隆形成能力及迁移能力(P0.05);吉非替尼或者苦参碱均可以诱导结肠癌细胞系发生G_0/G_1期阻滞,但联合用药组的细胞周期阻滞(G_0/G_1期阻滞)趋势更明显;吉非替尼或苦参碱可以诱导人结肠癌细胞系发生凋亡(P0.05),但相对于单一用药组,联合用药能更显著提高人结肠癌细胞系的凋亡比例(P0.05);相对于空白对照组,单一用药后HCT116细胞的Vemintin、SNAIL、Cyclin D1及P-mTOR的蛋白表达量显著降低,而Caspase-3、Bax及P-AMPK的蛋白表达量显著升高(P0.05),但联合用药组其蛋白表达水平变化则更为显著(P0.05)。结论:吉非替尼或苦参碱在一定程度上能抑制人结肠癌细胞系的增殖、迁移能力起到抑癌作用,联合用药的抑癌作用更佳。吉非替尼联合苦参碱可能通过激活AMPK信号通路而发挥抑癌作用。     

miR-9-5p通过靶向FOXO1基因调控食管癌细胞增殖、侵袭和迁移

目的 探讨miR-9-5p通过靶向叉头框转录因子O1(FOXO1)对食管癌Eca-109细胞体外增殖、侵袭和迁移能力的调控作用。方法 在食管癌Eca-109细胞中分别转染miR-9-5p inhibitor和NC-inhibitor,分别设置为anti-miR-9-5p组和NC组,并设置未转染的细胞为Blank组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测各组细胞中miR-9-5p的表达水平,噻唑蓝(MTT)法、Transwell实验分别检测细胞增殖、侵袭和迁移能力。通过生物信息学在线软件预测miR-9-5p与FOXO1互补结合位点,双荧光素酶报告基因实验验证二者靶向关系。采用qRT-PCR和蛋白免疫印迹法(Western blotting)分析miR-9-5p对FOXO1的调控作用。结果 anti-miR-9-5p组Eca-109细胞中miR-9-5p的表达水平、OD值、侵袭和迁移细胞数均显著低于NC组和Blank组(P0.05)。miR-9-5p与FOXO1存在互补结合位点,双荧光素酶报告基因实验分析结果显示,miR-9-5p和FOXO1能够靶向结合。anti-miR-9-5p组Eca-109细胞中FOXO1 mRNA和蛋白表达水平明显高于NC组和Blank组(P0.05)。NC组和Blank组细胞中以上指标均无明显改变(P0.05)。结论 干扰miR-9-5p的表达可通过靶向FOXO1基因抑制食管癌Eca-109细胞的体外增殖、侵袭和迁移能力。     

慢病毒介导的RNA干扰沉默PIM2表达对结肠癌HT29细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响

目的探讨沉默PIM2表达对结肠癌HT29细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响。方法采用实时荧光定量PCR和Western blotting方法检测人正常结肠上皮NCM460细胞和结肠癌HT29细胞中PIM2 mRNA和蛋白表达。以含PIM2 shRNA慢病毒载体感染HT29细胞,采用实时荧光定量PCR和Western blotting方法检测感染效果,CCK-8法、Transwell实验和流式细胞仪分别检测细胞的增殖、侵袭、迁移和凋亡能力。结果与NCM460细胞相比,HT29细胞中PIM2 mRNA和蛋白表达明显升高(P0.05)。PIM2 shRNA慢病毒感染使HT29细胞中PIM2 mRNA和蛋白表达显著降低,显著抑制SGC7901细胞的增殖、侵袭和迁移并促进细胞凋亡(P0.05)。结论 PIM2在结肠癌HT29细胞中高表达,干扰其表达可抑制HT29细胞增殖、侵袭和迁移,并促进细胞凋亡。     

血管生成抑制蛋白1与肿瘤血管及内镜下的表现关系分析

目的:探讨血管生成抑制蛋白1（VASH1）在食管癌肿瘤血管中的表达与内镜下表现的关系。方法:选取存档石蜡包埋食管癌组织标本120例和正常食管组织标本50例,免疫组织化学SP法检测其VASH1的表达,分析VASH1在食管癌组织和正常食管组织中的形态差异,分析不同IPCL分型VASH1表达情况,以及不同肿瘤分化状态下VASH1表达与MVD的关系。结果:VASH1、血管内皮生长因子（VEGF）在食管癌组织中的阳性表达率分别为54.17%（65/120）、59.17%（71/120）,在正常组织中的阳性表达率分别为8.0%（4/50）、16.0%（8/50）,VASH1、VEGF在食管癌组织中的阳性表达率高于正常组织（P<0.01）;食管癌组织中,VEGF与VASH1表达呈显著正相关关系,影响食管癌预后效果的独立危险因素有浸润深度、淋巴结转移、VASH1及VEGF表达水平等（P<0.05~P<0.01）;上皮乳头内毛细血管襻Ⅴ型病人占比最高为54.79%,Ⅳ型为56.82%,差异无统计学意义（P>0.05）;VASH1阴性、低表达、高表达病人的MVD值差异有统计学意义（P<0.01）,随着VASH1表达增加,病人MVD值增高,VASH1表达与血管形成呈正相关关系（P<0.01）。结论:VASH1可能与食管癌的发展、肿瘤细胞生成密切相关,且对预测食管癌的预后具有一定的意义。     

微小RNA-144对人结肠癌细胞株增殖、侵袭迁移影响及其与同源盒基因A10结合力

目的 观察微小RNA-144(miR-144)对人结肠癌细胞株增殖、迁移、侵袭的影响及其与同源盒基因A10(homeobox gene A10,HOXA10)的结合力。方法 (1)人结肠癌细胞株HCT116、SW480、CL-11和永生化正常人结肠上皮细胞株FHC中miR-144及HOXA10 mRNA检测：采用实时荧光定量PCR法检测HCT116、SW480、CL-11及FHC中miR-144与HOXA10 mRNA，观察人结肠癌细胞和人结肠上皮细胞miR-144、HOXA10 mRNA表达变化，选择miR-144相对表达量最低HCT116细胞为后续研究对象。(2)miR-144对人结肠癌细胞株增殖、侵袭及迁移的影响观察：取对数生长期HCT116细胞分为3组，1组细胞顺序转染miR-144模拟物（miR-144 mimics）和HOXA10过表达质粒pcDNA3.1-HOXA10,2组细胞转染miR-144 mimics,3组细胞转染空白质粒。转染24 h时测算各组细胞增殖活性、观察各组细胞的侵袭及迁移情况、检测各组细胞miR-144及HOXA10蛋白。(3)HCT116细胞中miR...