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应用AdEasy腺病毒载体系统构建鼠白细胞介素10基因重组腺病毒 总被引:3,自引:0,他引:3
目的:AdEasy系统可在原核细胞E.coli BJ5183中完成穿梭质粒与骨架质粒之间的高效同源重组,经抗生素培养板筛选重组体,然后转染293细胞获得重组病毒,极大简化了载体的构建过程.实验利用AdEasy腺病毒载体系统构建鼠白细胞介素10基因重组腺病毒.方法:实验于2006-08/2007-05在青岛大学医学院病毒学实验室完成.①实验材料:清洁级SD大鼠5只,实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准.腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV,骨架质粒pAdeasy-1,大肠杆菌BJ5183和DH10B,人胚肾293细胞均由青岛大学医学院微生物教研室罗兵教授惠赠.②实验方法:从脂多糖刺激培养的大鼠脾细胞中提取细胞总RNA,应用反转录多聚酶链反应技术扩增白细胞介素10 cDNA,定向亚克隆至pAdtrack-CMV中构建腺病毒穿梭质粒pAdtrack-CMV-IL-10,酶切线性化后转化到含腺病毒骨架质粒pAdEasy的BJ5183大肠杆菌中,获得重组腺病毒质粒pAd-IL-10,Lipofectamin包装转染293细胞,获得重组腺病毒vAd-IL-10,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达.将293细胞接种于96孔板中,每孔1×104个细胞,浓缩后的病毒贮存液按不同比例稀释加至培养板中,测定重组腺病毒滴度.用重组腺病毒vAd-IL-10感染293细胞3 d后,以TRIzol一步法提取细胞总RNA,所获RNA加入DNaseⅠ消化处理可能污染的DNA后,PCR产物行琼脂糖电泳检测白细胞介素10 mRNA的表达.结果:①重组腺病毒的包装及滴度测定:经限制性内切酶转染293细胞16 h后,荧光显微镜观察到细胞中有GFP荧光,可间接反映目的基因的表达.将病毒上清反复感染293细胞扩增重组腺病毒,通常传至第4~5代于接种病毒后24~48 h,几乎可观察到所有细胞出现荧光,此时收获病毒,重组病毒命名为vAd-IL-10.vAd-IL-10滴度为5.5×108 pfu/mL,vAd-GFP滴度为9.0×108 pfu/mL.②目的基因RT-PCR产物的鉴定:提取重组腺病毒感染293细胞总RNA,RT-PCR扩增后琼脂糖电泳显示特异性580 bp预计大小的片段,表明该重组腺病毒可在293细胞中有效转录.结论:利用AdEasy腺病毒载体系统成功构建了携带白细胞介素10基因的重组腺病毒载体,并制备出高滴度的重组腺病毒vAd-IL-10,可在293细胞中有效转录. 相似文献
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目的 总结儿童1型糖尿病酮症酸中毒(DKA)合并低磷血症的临床特点,探讨DKA治疗期间低磷血症的发生率及预后。方法 回顾性分析2016年1月至2020年6月于广州市妇女儿童医疗中心遗传与内分泌科住院治疗的133例合并DKA的1型糖尿病患儿临床资料,分析入院后4~24h血磷水平,并对影响儿童血磷变化的相关因素进行分析。结果 133例DKA患儿中男55例(41%),女78例(59%),年龄6月龄至15岁,平均年龄(6.7±3.9)岁,新发1型糖尿病占72%。75例(56%)患儿出现血磷降低,其中41例(31%)患儿血磷0.81~1.29 mmol/L,22例(16%)患儿血磷0.61~0.81mmol/L,10例(7.5%)患儿血磷0.38~0.61mmol/L,2例(1.5%)患儿血磷<0.38mmol/L。正常血磷组与低血磷组之间pH值、碳酸氢根(HCO3-)、碱剩余(BE-B)、血钾、血氯差异均有统计学意义。酸中毒、年龄≤5岁为影响儿童DKA时血磷降低严重程度的危险因素。75例低血磷患儿均未出现低磷血症相关临床症状,未补充磷酸盐治疗。34例血磷<0.81mmol/L的患儿... 相似文献
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本文对大剂量静脉注射免疫球蛋白(IVIG)治疗新生儿ABO溶血病(ABOHDN)进行了观察。治疗组21例在光疗、白蛋白治疗的基础上,给予IVIG治疗,首次1g/kg,以后每次400mg/kg,每日1次,共用2~4次。结果治疗组无1例换血,全部治愈,而对照组2例发生核黄疸,其中1例死亡,在黄疸消失时间及住院天数方面,两组有显著性差异(P<001)。提示IVIG可明显减少溶血,降低胆红素浓度,减少核黄疸的发生,对重症病例可起到替代换血的作用 相似文献
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大剂量丙种球蛋白替代换血治愈新生儿Rh(抗D)不合溶血病一例 总被引:3,自引:0,他引:3
病例摘要 男,22小时,因皮肤发黄8小时入院。患儿系第2胎第2产,孕39+2周臀位助产分娩。生后无窒息,全身无苍白及水肿。Apgar评分1~5分钟均为10分,出生体重为2900克。于生后14小时发现面部发黄,迅速遍及全身。查体:全身皮肤及巩膜黄染。呼吸平稳,头颅、心肺正常,腹软,肝肋下及剑下均为1cm,质软,边锐,脾未触及。四肢肌张力不高,拥抱及觅食反射存在。入院查体:血型母血Rh阴性、B型。子为Rh阳性,B型,患儿直接抗人球蛋白试验、抗体释放试验及游离抗体试验均为阳性。母、子抗D抗体效价均在1… 相似文献
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新生儿高胆红素血症的脑电图变化及分析 总被引:7,自引:0,他引:7
为探讨新生儿高胆红素血症的脑电图变化 ,自 1996年以来 ,我们对 46例高胆红素血症患儿进行了脑电图监测 ,现将结果报道如下。临床资料 :1996年 7月至 1997年11月我院新生儿室及NICU收治的高胆红素血症患儿共 46例 (称高胆组 ) ,其中男 2 7例 ,女 19例 ,日龄≤ 3天 2 2例 ,4~ 7天 2 4例 ,胎龄 38~ 42周 ,体重 2 5 0 0~ 40 0 0g。血清总胆红素水平在 2 16~388μmol/L ,其中≤ 342 μmol/L33例 ,>342 μmol/L13例。所有病例均无胆红素脑病症状 ,除外窒息、颅脑疾病、低血糖、红细胞增多症、代谢性疾病及先天畸形。黄疸原… 相似文献
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目的研究新发1型糖尿病酮症酸中毒(diabetic ketoacidosis,DKA)的临床特点并进行相关因素分析。方法回顾性分析2017年10月至2018年10月广东省广州市妇女儿童医疗中心遗传与内分泌科收治的81例儿童新发1型糖尿病患儿的临床资料,按照有无DKA进行分组,比较两组间年龄、性别、前驱感染史、糖尿病家族史、误诊或漏诊率、C肽水平、糖化血红蛋白等的差异,DKA组根据酸中毒程度分为轻度、中度、重度3个亚组,比较三组DKA患儿的实验室特点。结果 81例1型糖尿病患儿中有48例(59.2%)以DKA起病(DKA组),男25例,女23例;非DKA组33例,男18例,女15例。DKA组中轻、中、重度DKA者分别占18.8%、37.5%和43.7%。DKA组与非DKA组患儿的误诊或漏诊率分别为47.9%、18.2%,差别有显著性(P<0.05)。DKA组有19例(39.5%)患儿有前驱感染史,非DKA组有7例(21.1%)。与非DKA患儿比较,DKA组随机血糖更高,pH、HCO3-及C肽水平更低,差异均有显著性(P<0.05)。结论本院1型糖尿病患儿发病时DKA的发生率高,且以重度为主。有前驱感染症状,年龄<3岁,C肽水平低,存在漏诊、误诊是DKA重症的危险因素。 相似文献
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婴幼儿肺炎68例支原体检测及其临床分析 总被引:3,自引:0,他引:3
对象与方法 :2 0 0 3年 1月 17日至 2 0 0 3年 3月 2 0日在我院住院的婴幼儿肺炎 6 8例 ,其中男 38例 ,女 30例 ;年龄1~ 6个月 15例 ,~ 1岁 18例 ,~ 3岁 35例。对病程小于7d的患儿待其病程超过 7d后再抽血查支原体IgM抗体(MP IgM) ,其余病例均于入院第 2天或第 3天抽静脉血查MP IgM。特异性MP IgM测定采用间接血凝集法 ,以支原体抗体滴度≥ 1∶32为阳性。结果 :6 8例患儿中MP IgM阳性 (诊断为支原体肺炎 )2 7例 ,阳性率为 39 7% (2 7/ 6 8) ,其中 1~ 6个月组阳性 4例 ,阳性率为 2 6 7% (4/ 15 ) ,~ 1岁组阳性 4例 ,阳性率为2 … 相似文献
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目的:AdEasy系统可在原核细胞E.coli BJ5183中完成穿梭质粒与骨架质粒之间的高效同源重组,经抗生素培养板筛选重组体,然后转染293细胞获得重组病毒,极大简化了载体的构建过程。实验利用AdEasy腺病毒载体系统构建鼠白细胞介素10基因重组腺病毒。
方法:实验于2006-08/2007-05在青岛大学医学院病毒学实验室完成。①实验材料:清洁级SD大鼠5只,实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准。腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV,骨架质粒pAdeasy-1,大肠杆菌BJ5183和DH10B,人胚肾293细胞均由青岛大学医学院微生物教研室罗兵教授惠赠。②实验方法:从脂多糖刺激培养的大鼠脾细胞中提取细胞总RNA,应用反转录多聚酶链反应技术扩增白细胞介素10 cDNA,定向亚克隆至pAdtrack-CMV中构建腺病毒穿梭质粒pAdtrack-CMV-IL-10,酶切线性化后转化到含腺病毒骨架质粒pAdEasy的BJ5183大肠杆菌中,获得重组腺病毒质粒pAd-IL-10,Lipofectamin包装转染293细胞,获得重组腺病毒vAd-IL-10,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达。将293细胞接种于96孔板中,每孔1×104个细胞,浓缩后的病毒贮存液按不同比例稀释加至培养板中,测定重组腺病毒滴度。用重组腺病毒vAd-IL-10感染293细胞3 d后,以TRIzol一步法提取细胞总RNA,所获RNA加入DNaseⅠ消化处理可能污染的DNA后,PCR产物行琼脂糖电泳检测白细胞介素10 mRNA的表达。
结果:①重组腺病毒的包装及滴度测定:经限制性内切酶转染293细胞16 h后,荧光显微镜观察到细胞中有GFP荧光,可间接反映目的基因的表达。将病毒上清反复感染293细胞扩增重组腺病毒,通常传至第4~5代于接种病毒后24~48 h,几乎可观察到所有细胞出现荧光,此时收获病毒,重组病毒命名为vAd-IL-10。vAd-IL-10滴度为5.5×108 pfu/mL,vAd-GFP滴度为9.0×108 pfu/mL。②目的基因RT-PCR产物的鉴定:提取重组腺病毒感染293细胞总RNA,RT-PCR扩增后琼脂糖电泳显示特异性580 bp预计大小的片段,表明该重组腺病毒可在293细胞中有效转录。
结论:利用AdEasy腺病毒载体系统成功构建了携带白细胞介素10基因的重组腺病毒载体,并制备出高滴度的重组腺病毒vAd-IL-10,可在293细胞中有效转录。 相似文献