AcrAB外排泵ramA对肺炎克雷伯菌耐喹诺酮类药物的影响

目的 探讨AcrAB外排泵调控基因ramA对肺炎克雷伯菌耐喹诺酮类药物的影响。方法 用喹诺酮类药敏纸片扩散法、MIC及其逆转实验和有机溶剂耐受实验测定细菌耐药表型,用PCR扩增外排泵结构基因acrA、acrB、tolC及调控基因acrR,ramA,marA,用半定量PCR 检测调控基因的转录水平。结果 泵的结构基因和调控基因均存在43株KP菌中。仅喹诺酮类耐药株与敏感株ramA转录水平存在统计学差异(P<0.05)。和对照组相比,高表达ramA的 AC-1株,其泵结构基因的转录水平增高,耐药表型也有明显改变,用泵抑制剂后,其喹诺酮类的MIC恢复对照水平。结论 ramA是KP菌耐喹诺酮类抗生素的一个重要因素。抑制ramA的表达,有助于治疗多重耐药肺炎克雷伯菌的感染。     

eha基因调控迟缓爱德华菌抵抗巨噬细胞氧化杀菌作用

目的 迟缓爱德华菌(E.tarda)能够在巨噬细胞内生存和繁殖,必须抵抗细胞产生活性氧的杀菌作用。eha基因是该菌一个重要的转录调控基因,本研究探讨eha基因调控E.tarda抵抗巨噬细胞氧化杀菌的机制。方法 光镜观察野生株和缺失株分别感染RAW264.7巨噬细胞的过程,及菌落计数法测定细菌胞内存活数目;测定细菌在不同H₂O₂浓度中的存活率;流式法检测细菌感染巨噬细胞后产生活性氧的细胞比率;qRT-PCR测定细菌超氧化物歧化酶基因sodC和过氧化氢酶基因katB的转录水平。结果 eha基因的缺失,使E.tarda在巨噬细胞内的繁殖速率明显下降(P<0.05),使该菌在不同H₂O₂浓度中的存活率显著降低(P<0.05),使该菌感染细胞组产生活性氧的细胞比率升高;qRT-PCR结果显示,eha基因的缺失使得该菌的超氧化物歧化酶基因sodC和过氧化氢酶基因katB转录水平下降。结论 eha基因通过调控E.tarda菌分解H₂O₂相关基因的表达,从而影响该菌分解巨噬细胞中活性氧的能力和在胞内外的存活率。因此,eha 基因调控了E.tarda菌抵抗巨噬细胞内氧化杀菌作用,有助于该菌在巨噬细胞内生存和繁殖。     

分子生物学技术在诺如病毒检测中的应用

诺如病毒(norovirus,NOV)是引起人类非细菌性胃肠炎的主要病原之一。该病毒感染剂量低、抵抗力强、传播速度快,极易造成大规模群体感染事件,灵敏、快速、准确地鉴定NOV显得至关重要。目前核酸扩增法、高通量测序、基因芯片以及生物传感器等分子生物学技术已广泛应用于NOV的临床诊断和流行病学分析,然而这些技术在NOV实际检测中具有不同的适用范围和优缺点。该文就分子生物学检测NOV技术的进展进行综述,以便为临床实验室选择合适的检测方法提供参考。