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TaqMan荧光定量RT-PCR快速检测登革1、2型病毒 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 建立特异、灵敏、快速的荧光定量RT—PCR方法用于检测登革1、2型病毒核酸,并初步应用于登革热的临床标本检测。方法 根据GenBank登录的登革热毒株序列。应用生物学软件进行序列比对,分别在登革病毒1型的NS5基因和2型的C基因的保守区设计特异性引物和TaqMan探针。对荧光定量RT—PCR反应条件进行优化,验证该方法的特异性、灵敏度和稳定性。同时对疑似登革热病例血清标本进行检测。结果 该方法对登革1、2型病毒的检测有高度的特异性,与登革病毒的4个血清型之间以及流行性乙型脑炎病毒、肾综合征出血热病毒等均无交叉反应,检测的灵敏度均达0.1TCID50,可从疑似登革热病例血清标本中直接检测登革病毒核酸,从病毒核酸提取至完成检测仅需3h左右。结论 本研究建立的TaqMan荧光定量RT—PCR是一种快速检测登革1、2型病毒特异、敏感的方法,适用于临床早期诊断。 相似文献
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目的 分析1999-2010年浙江省乙型流感病毒主要抗原基因血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)的分子变异特征.方法 采集浙江省流感暴发疫情和哨点监测医院的流感样患者呼吸道标本,荧光定量RT-PCR快速检测和病毒分离,选取乙型流感病毒分离代表株进行HA和NA基因测序,采用生物信息学软件分析变异和进化.结果 共分析浙江省乙型流感病毒分离株34株,其中Victoria系20株,Yamagata系14株;1999-2010年间Victoria系毒株的HA1基因变异率4.5%,Yamagata系毒株为3.4%;2004年后分离的Victoria系毒株均为基因重配株,HA属于Victoria 系,而NA属于Yamagata系;2010年新型甲型HINI流感流行高峰过后,浙江省仍以乙型流感病毒流行为主,分离株与2009-2010年流感疫苗株B/Brisbane/60/2008接近,与往年乙型流感毒株相比HA和NA发生多个氨基酸位点变异.结论 1999-2010年浙江省乙型流感病毒流行株发生明显变异,基因重配和抗原漂移是病毒发生变异的主要机制.Abstract: Objective To Characterize the genetic diversity of hemagglutinin(HA)and neuraminidase(NA)of influenza B viruses isolated in Zhejiang province during 1999-2010.Methods Respiratory specimens were collected from patients with flu-like syndrome during the influenza outbreaks or from the hospitals which carrying out influenza surveillance project in Zhejiang province.Samples were detected by real-time RT-PCR and isolated for influenza virus.HA1 and NA genes of influenza B virus isolates were amplified and sequenced.Phylogenetic comparison and genetic diversity analysis were performed using the bioinformation software.Results A total of 34 influenza B viruses were evolved in this study including Victoria-like and Yamagata-like strains according to the results of the HI test.The mutation rate of Victoria-like HA1 gene was 4.5% and Yamagata-like HA1 gene was 3.4%,respectively.The Victoria-like influenza B isolates had appeared to be all re-assortants having a Victoria lincage HA and Yamagata lineage NA since 2004.The predominant type of influenza virus isolates in 2010 was also influenza B virus after the H1N1 flu pandemic in Zhejiang province.The isolated strains were antigenicaily and genetically similar to B/Brisbane/60/2008--the vaccine strain proposed for 2009-2010.Many difierences of HA1 and NA amino acids existed in the current isolates when compared to previous influenza B strains.Conclusion Significant diversity was generated among influcnza B virus isolated from 1999 to 2010 in Zhejiang province.Genetic re-assortment and antigenic drift seemed the main evolutionary mechanism on influenza B virus. 相似文献
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目的 为了对2004年浙江省报告的输入性疑似登革热病例查明病因,从分子水平分析流行毒株的生物学特征,追踪传染源,为疾病的预防控制提供实验室依据。方法 对疑似患者血清标本采用ELISA、IFA和荧光RT—PCR方法分别检测登革病毒IgM、IgG抗体和病毒核酸,并用C6/36和BHK-21细胞分离登革病毒。采用RT—PCR方法扩增病毒E基因和NS1基因后分别进行序列测定,并与不同国家和地区的登革热毒株进行同源性和进化树分析。结果 从患者血清中检测到登革病毒IgM、IgG抗体和登革2型病毒核酸,并分离到登革2型病毒;浙江省登革2型病毒分离株(ZJ/01/04)与登革2型国际标准株Jamaica、国内Fujian/10/99株和Saudi/92株在E基因上氨基酸的同源性分别为97.1%、99.2%和99.6%,而与登革1、3、4型毒株相同区域氨基酸同源性分别为68.7%、66.9%和63.6%。基因进化树显示ZJ/OI/04分离株与Saudi/92株亲缘关系最近,在进化树的同一分支上。结论 从病原学、血清学和分子生物学特征上均证实该输入病例是由登革2型病毒引起,该毒株最有可能来源于沙特阿拉伯。 相似文献
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目的 建立适用甲3型流行性感冒(流感)病毒核酸检测的环介导逆转录等温扩增(RT-LAMP)方法,为基层实验室流感快速诊断服务.方法 对甲3型流感病毒设计两对环介导特异性引物与一个环引物,采用环介导RT-LAMP技术对甲3型流感病毒核酸进行等温扩增,并对反应体系进行优化.结果 采用RT-LAMP技术检测甲3型流感病毒核酸,敏感度可达0.01TCID50/反应,与荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的敏感度相一致,且对H1和H5亚型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒、麻疹病毒、风疹病毒、流行性腮腺炎病毒、副流感病毒与腺病毒无交叉反应,具有良好的特异性.采用该方法检测58份临床样本,病毒分离的阳性率为37.9%,而荧光定量RT-PCR与RT-LAMP的阳性率分别为53.45%和51.72%,敏感度明显高于通常的细胞病毒分离.结论 甲3型流感病毒环介导RT-LAMP检测方法,不仅快速特异、敏感性强,而且简便价廉,适于基层实验室使用. 相似文献
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目的建立水产品中副溶血性弧菌的交叉引物恒温扩增(CPA)检测技术。方法用加热煮沸法提取菌株和增菌液中的DNA,在对副溶血性弧菌基因序列进行分析、对比基础上,选择特异性强且高度保守的目的基因序列,设计合成交叉恒温扩增引物。对CPA技术反应条件优化,建立副溶血性弧菌的的快速检测方法,检测方法的敏感性和特异性,并和荧光定量PCR方法进行比较。同时利用该法对采集的水产品中的副溶血性弧菌进行监测。结果该法60℃、40 min即可完成反应,敏感性和特异性高,最低检测限为14 CFU/mL,与荧光定量PCR法类似。结论建立的副溶血性弧菌交叉引物恒温扩增检测法,不需要昂贵的PCR仪,仅需1台水浴锅或金属浴即可完成细菌DNA的扩增,密闭的核酸检测试纸条使结果判定直观、客观,且可有效避免气溶胶污染,方法的敏感性和特异性高,可用于副溶血性弧菌的现场快速检测。 相似文献
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目的对杭州市2004—2010年卫生资源配置的公平性进行评价,为卫生资源的优化配置提供依据。方法对2004—2010年杭州市卫生资源相关数据,从人口分布和地理分布层面,以卫生机构、医生、床位为主要因素,采用洛伦茨曲线和基尼系数,分析卫生资源配置的公平性。结果 2004—2010年杭州市卫生资源量总体呈缓慢增加,卫生资源主要集中在杭州市区,杭州市内各区卫生资源存在差异。杭州市卫生资源按人口分布的基尼系数在0.2以下,达到最佳公平状态;但按地理分布的基尼系数已达0.6,处于警戒或高度不公平状态。结论杭州市卫生资源配置总体分布不平衡,卫生资源按人口配置的公平性高于按地理分布的公平性,卫生机构配置的公平性最优,医生配置公平性次之,床位数配置公平性较差。 相似文献
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目的研究建立双重荧光定量PCR技术快速检测产毒型O1群霍乱弧菌,并首次应用于外环境样本的检测中。方法从GenBank上下载O1群霍乱弧菌O抗原编码基因rfbO1和毒力基因CT序列,在rfbO1和CT保守区域设计特异性引物和探针,建立优化单一和双重荧光PCR反应体系,评价所建双重PCR反应体系的特异性、敏感性和稳定性,并应用于外环境样本的监测检验中。结果该方法对O1群霍乱弧菌检测具有高度特异性,对rfbO1和CT基因序列检出限达到1.0×102cfu/mL,构建的体系定量标准曲线相关系数分别为0.999和0.998,具有较好的稳定性,并首次从352件外环境样本中检测出了5株产毒型O1群霍乱弧菌。结论本研究建立的双重荧光定量PCR方法特异、灵敏、快速,可应用于外环境样本中产毒型O1群霍乱弧菌的大范围筛查。 相似文献
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目的 从基因层面探讨18年来我国及欧美国家甲3亚型流感流行株与当时WHO疫苗推荐株之间的差异。方法 收集1988—2005年间我国以及欧美国家的甲3亚型流感流行株与疫苗株的血凝素重链(HA1)区域的氨基酸序列,用BioEdit生物软件进行比较,分析其与当时疫苗推荐株在HA1以及HA1抗原决定簇区域的氨基酸差异。结果 在HA1区以及HA1区抗原决定簇位点,我国甲3亚型流感流行株与当年疫苗株之间的差异,均大于它与下一轮疫苗株之间的差异,且已达到十分显著的程度(P〈0.01)。而欧美国家甲3亚型流感流行株与当年疫苗株之间的差异,虽然稍大于它与下一轮疫苗株之间的差异,但尚不显著(P〉0.05)。此外,使用多年的疫苗株,无论在我国还是欧美,随着疫苗使用年数的增加,流行株与疫苗株之间的差异不断增大。结论 WHO推荐的甲3亚型疫苗株与我国甲3亚型流行株之间,从基因层面进行分析,存在明显的滞后现象。 相似文献