细粒棘球蚴特异性诊断抗原Eg-07279的制备及免疫原性研究

目的 筛选出包虫病特异性诊断抗原分子并验证其免疫原性。方法 对国家人类基因组南方研究中心公布的细粒棘球绦虫测序数据进行分析,利用生物信息学的方法筛选出六钩蚴中不表达且原头蚴中高表达的抗原分子Eg-07279,经重组克隆、表达后用亲和层析法纯化获得重组蛋白rEg-07279;重组蛋白免疫小鼠检测其特异性 IgG 水平并使用Western blot 验证其免疫原性。结果 筛选出的抗原分子Eg-07279经克隆、表达、纯化获得重组蛋白。利用该重组蛋白免疫小鼠,ELISA检测结果显示Eg-07279产生的特异性IgG水平(2.559 ± 0.125)明显高于空白组(0.319 0±0.01),差异有统计学意义(P<0.01);Western blot检测结果显示原头蚴继发感染组和重组蛋白免疫组血清均可识别该重组蛋白而空白对照组鼠血清不能识别。结论 获得细粒棘球蚴差异表达抗原Eg-07279并证实该重组蛋白具有较好的免疫原性,是较好的诊断抗原候选分子。     

浅谈处理放置IUD后出血的体会

阴道流血及月经异常是放置IUD后常见的副反应,也是停用IUD的常见原因,而阴道流血及月经异常往往也是妇产科一些疾病的常见症状,甚至是一些全身疾病的重要信号,如处理不当,不但贻误病情,还会给病人造成严重的后果,同时,也给计划生育工作的开展带来了被动.本人在20多年的工作中,处理了数以万计的放置IUD后出血病人,她们就诊时总认为阴道出血及月经异常与放置IUD有关,但有些情况并非如此.现将典型病例4例有关情况报告如下.     

红藤汤灌肠加药物封闭治疗慢性盆腔炎疗效观察

慢性盆腔炎是妇科常见病多发病,且顽固难愈,严重影响妇女身心健康和避孕措施的落实,笔者这几年辩证论治理论,运用中草药和现代药理,采用中药保留灌肠和药物封闭疗法治疗慢性盆腔炎症疗效满意。现报告如下。1资料与方法1.1一般资料2001年1月~2006年1月,在本站门诊接纳的慢性盆腔     

细粒棘球蚴重组蛋白P29(rEg.P29)诱导下差异表达microRNA的筛选及分析北大核心CSCD

目的对细粒棘球蚴重组蛋白P29(rEg.P29)诱导小鼠差异表达的microRNA进行筛选和分析,以期为rEg.P29免疫前后宿主免疫细胞的分化研究提供线索。方法将6-8周龄SPF级BALB/c小鼠随机分为2组,rEg.P29免疫组和对照组,每组12只。rEg.P29免疫组于小鼠腹部多点免疫重组蛋白100μl(含rEg.P2910μg),共免疫2次,第1次免疫2周后进行第2次免疫。提取第2周(第1次免疫后2周)、第6周(第1次免疫后4周)、第8周(第1次免疫后6周)各组小鼠外周血淋巴细胞,分离microRNA用于建库测序,利用生物信息学方法筛选rEg.P29诱导下差异表达的microRNA分子,并进行注释分析。结果测序所得数据经拼接组装比对,共获得成熟的microRNA序列342条,其中已知的microRNA序列206条,未知信息序列36条。在已知的microRNA分子中,差异表达共55个,其中上调31个,下调24个;在新发现的microRNA分子中,差异表达11个,其中上调5个,下调6个。靶基因预测结果显示,表达上调microRNA调控的靶基因有14279个,表达下调microRNA调控的靶基因13911个。GO富集注释结果显示,在上调分子中,生物学进程(BP)获得18条注释信息,其中16个microRNA调控的826个靶基因被注释到细胞分化(cell differentiation)条目下;在下调分子中,生物学进程(BP)获得21条注释信息,其中25个microRNA调控的712个靶基因被注释到细胞分化(cell differentiation)条目下。KEGG通路分析结果显示,无论是表达上调还是下调的分子,其靶基因的代谢通路均显著富集到Th1 and Th2 cell differentiation、Th17 cell differentiation、B cell receptor signaling pathway等与细胞分化相关的信号通路以及与肿瘤相关的信号通路上。结论在rEg.P29诱导下小鼠免疫细胞存在差异表达的microRNA分子,这些分子可能与免疫细胞的分化相关。     

细粒棘球蚴重组蛋白GST诱导小鼠脾细胞增殖及对细胞因子水平的影响

目的探讨细粒棘球蚴重组蛋白GST(rEg.GST)诱导小鼠产生免疫保护力的机制。方法将rEg.GST与弗氏佐剂混合免疫小鼠,腹腔注射原头蚴制备包虫感染模型,分离脾淋巴细胞,用rEg.GST和刀豆蛋白A(ConA)诱导后,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测小鼠脾淋巴细胞的增殖情况;酶联免疫吸附法(ELISA)检测培养上清液中白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-4(IL-4)、γ-干扰素(IFN-γ)和白细胞介素-10(IL-10)的表达水平。结果重组蛋白免疫组在rEg.GST及Con A刺激状态下脾淋巴细胞增殖水平均高于佐剂组(P=0.003 0;P0.001)和PBS组(P=0.001 4;P=0.006 1)。与PBS组比较,rEg.GST组在免疫后、感染后的IL-2、IFN-γ、与IL-4的水平均增高(P=0.007 7;P=0.041 9;P=0.014 8);rEg.GST组免疫后与免疫前相比,IL-2、IFN-γ、IL-4与IL-10水平均增高(P=0.001 7;P=0.023 1;P=0.003 1;P=0.021 2);感染后与免疫后相比,IL-4与IL-10水平升高,IL-2水平则呈下降趋势(P=0.009 4;P=0.039 3;P=0.0179)。结论 rEg.GST能够促进脾淋巴细胞的增殖并同时活化辅助性T细胞1型(Th1)与2型(Th2)细胞。     

细粒棘球绦虫重组亲肌肉抗原ZW-15免疫小鼠LncRNA 031520表达的研究北大核心CSCD

目的探讨长链非编码RNA031520(LncRNA 031520)分子在细粒棘球绦虫重组亲肌肉抗原ZW-15诱导小鼠免疫保护的表达分析。方法36只雌性BALB/c小鼠分为PBS对照组、弗氏佐剂组和ZW-15免疫组,12只/组。PBS对照组、弗氏佐剂组分别皮下多点注射PBS溶液和完全/不完全弗氏佐剂100μl/只,ZW-15免疫组注射重组抗原100μl/只(10μg/只)。弗氏佐剂组和ZW-15免疫组初次免疫使用完全弗氏佐剂,加强免疫使用不完全弗氏佐剂。共免疫3次,初次免疫后的2次加强免疫间隔时间为两周。免疫小鼠经麻醉取血,分离血清。采用ELISA法检测特异IgG、IgG1、IgG2a、IgG2b抗体水平。无菌取脾脏,分离淋巴细胞采用流式细胞术分选CD4^(+)T淋巴细胞、CD8^(+)T淋巴细胞及B淋巴细胞群;利用qRT-PCR检测CD4^(+)T淋巴细胞、CD8^(+)T淋巴细胞、B淋巴细胞及总淋巴细胞中LncRNA 031520及内参GAPDH的表达;利用流式细胞术检测脾脏CD4^(+)T淋巴细胞中IFN-γ、IL-4的表达。使用SPSS 17.0统计软件和Graphpad Prism 8.0绘图软件对实验数据进行统计分析。结果小鼠经亲肌肉重组抗原ZW-15免疫后血清特异IgG、IgG1、IgG2a及IgG2b抗体水平均升高,且均显著高于PBS组、弗氏佐剂对照组,差异均有统计学意义(P<0.001)。LncRNA 031520在ZW-15免疫组CD4^(+)T淋巴细胞、总淋巴细胞中相对表达量显著高于PBS对照组和弗氏佐剂对照组(P<0.01),在ZW-15免疫组B淋巴细胞及CD8^(+)T淋巴细胞中相对表达量与PBS对照组及弗氏佐剂对照组相比差异均无统计学意义(均P>0.05)。免疫组小鼠脾脏淋巴细胞Th1亚群标志分子IFN-γ表达量为(19.07±3.44)%,显著高于PBS对照组(8.03±2.67)%和弗氏佐剂对照组(9.37±1.25)%(P<0.05),Th2亚群标志分子IL-4表达量为(0.79±0.02)%,显著高于PBS对照组(0.44±0.13)%和弗氏佐剂对照组(0.50±0.15)%(P<0.05)。结论LncRNA 031520在细粒棘球绦虫重组亲肌肉抗原ZW-15免疫小鼠淋巴细胞中表达上调,可能在亲肌肉抗原抵御细粒棘球蚴感染中发挥免疫保护作用。     

细粒棘球绦虫原头节抗原Eg-01883的B细胞表位预测、筛选及其血清学诊断价值北大核心CSCD

目的应用计算机软件分析细粒棘球绦虫原头节特异性抗原分子Eg-01883,预测其可能形成的B细胞表位,并探讨其B细胞表位的免疫反应性及诊断价值。方法使用在线软件SOPMA及DNAStar分析Eg-01883的二级结构,采用SWISS-Model预测该蛋白的三级结构。应用在线软件ABCPred和IEDB结合其亲水性、柔韧性、表面可及性、抗原性等二级结构和三级结构对其B细胞表位进行分析预测、并人工合成表位肽段;以完整蛋白rEg-01883免疫小鼠产生的抗血清为一抗,采用间接ELISA方法筛选免疫反应性较强的表位,然后再以感染细粒棘球绦虫的小鼠血清为一抗,ELISA检测其免疫反应性,评价其诊断价值。结果初步筛选出7条抗原指数较高的Eg-01883表位,B细胞表位区域位于1-15、19-34、155-169、180-196、216-232、236-248、271-287位氨基酸。合成上述表位,纯度为99.99%。使用完整蛋白免疫血清筛选出2条反应原性较强的优势表位19-34和180-196,细粒棘球蚴感染小鼠血清能识别这两条B细胞表位,A450值结果分别为0.8218±0.0406和0.6398±0.0447,与对照组A_(450)值0.3312±0.0267和0.2961±0.0284比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论成功筛选到两个潜在的B细胞表位诊断抗原肽,对进一步开发细粒棘球绦虫早期诊断抗原和研究优势表位疫苗具有重要意义。     

B超在监测雷佛奴尔羊膜腔注射中的价值

<正> 雷佛奴尔羊膜腔内注射是最常用的终止中期妊娠手术,手术成功的关键是首先要将药液准确无误地注入到羊膜腔内,为了提高手术成功率,我站自1995年至1998年,对300例引产对象采用B超监测胎位、羊水最大深度及距体表距离,配合雷佛奴尔羊膜腔注射,手术成功率达99.7％,取得了满意的效果。现介绍加