重组人生长激素对败血症大鼠氧化损伤和抗氧化损伤的影响

目的观察重组人生长激素(rhGH)对败血症大鼠氧化损伤和抗氧化损伤的影响。方法采用ipE.coli复制大鼠败血症模型。42只♀SD大鼠随机分为正常对照组(C组)、败血症组(S组)及rhGH治疗组(T组),S组、T组依观察时点再分为S1d、S3d和T1d、T3d两个亚组。观测3组的血浆硫代巴比妥酸反应物(TBARS)水平及超氧化物歧化酶(SOD)活力。结果S组大鼠血浆TBARS水平在各时点均明显高于C组和T组;T组各时点与C组无明显差异;S组大鼠血浆SOD活力在各时点均明显低于C组;T1d组与C组相比虽无显著差异,但却明显高于S1d组,T3d组明显高于C组及S3d组。结论rhGH能明显提高机体的抗氧化损伤能力。     

大鼠血管平滑肌细胞体外培养的表型转换及其鉴定

目的探讨体外传代培养对血管平滑肌细胞表型转换的影响,确认体外培养的血管平滑肌细胞不同表型的最佳指标。方法选择以未经培养传代的血管平滑肌细胞和体外培养的第4代血管平滑肌细胞作对比研究,采用免疫组织化学法检测血管平滑肌细胞α肌动蛋白,逆转录聚合酶链反应检测血管平滑肌细胞肌动蛋白22α、基质γ-羧基谷氨酸蛋白和骨桥蛋白各目的基因mRNA相对表达水平,透射电镜观察血管平滑肌细胞的形态学特征,确定其表型转换特征及各表型指标的区分效能。结果电镜观察显示,未经培养传代的血管平滑肌细胞胞质中肌丝分布丰富、均匀,并可见到收缩表型血管平滑肌细胞的典型结构—密斑,内质网、高尔基复合体等细胞器相对较少;而体外培养至第4代时血管平滑肌细胞胞质中肌丝明显减少,内质网、高尔基复合体明显增多。原代血管平滑肌细胞α肌动蛋白免疫组织化学染色强且广泛,而体外培养至第4代时α肌动蛋白染色明显变浅、稀疏。第4代血管平滑肌细胞的骨桥蛋白mRNA表达量较原代血管平滑肌细胞显著增高(P<0.01),肌动蛋白22α mRNA在血管平滑肌细胞中的表达量较原始血管平滑肌细胞降低,但差异不大,基质γ-羧基谷氨酸蛋白mRNA表达量较未经培养传代的血管平滑肌细胞升高(P<0.05)。结论血管平滑肌细胞体外培养至第4代,即可从典型的收缩表型转化为合成表型,提示血管平滑肌细胞是一种很容易去分化的细胞。电镜形态观察α肌动蛋白和骨桥蛋白在两型血管平滑肌细胞中的差异,可作为血管平滑肌细胞表型区分的有效标志。而肌动蛋白22α和基质γ-羧基谷氨酸蛋白的表达在两型血管平滑肌细胞中虽有一定的差异,但重叠较大。     

半胱氨酸对人血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响

目的观察半胱氨酸（Cys）对人血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖和凋亡的影响。方法采用组织贴块法体外培养人VSMCs,用不同浓度的Cys培养液孵育细胞24h,用MTT法检测VSMCs增殖,流式细胞术检测VSMCs凋亡,RT-PCR法检测bax mRNA的表达。结果体外培养的人VSMCs在终浓度为100、200、500和1000μmol/LCys的培养液中孵育24h后的吸光度（A）值均高于对照组（P〈0.05）,表明Cys可诱导人VSMCs增殖;但同时,VSMCs凋亡细胞数明显高于对照组（P〈0.05）,bax的表达增强,表明Cys亦诱导了人VSMCs凋亡。结论浓度较高时半胱氨酸可同时诱导VSMCs增殖和凋亡。     

sKDR真核克隆表达及其对血管内皮细胞增殖的影响

研究获取可溶性血管内皮生长因子受体2(sKDR)基因构建sKDR的真核表达载体,观察sKDR对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖的影响.方法提取HUVECs总RNA,利用RT - PCR方法扩增KDR胞外免疫球蛋白1-3区基因片段,将其插入真核表达质粒pcDNA3.1中,测序鉴定基因序列正确后,用脂质体法将重组质粒p...     

重组人生长激素对败血症大鼠炎症调控网络的影响

目的 观察重组人生长激素(rhGH)对败血症大鼠炎症调控网络的影响.方法 采用ip E.coli的方法复制大鼠败血症模型.42只♀ SD大鼠随机分为正常对照组(C组)、败血症组(S组)及rhGH治疗组(T组).S、T组又依观察时点再分为1d、3 d两个亚组.观测血浆肿瘤坏死因子α(TNFα)、白细胞介素-10(IL-10)、一氧化氮(NO)水平及诱生型一氧化氮合酶(iNOS)的表达情况.结果 S1d组及T1d组血浆TNFα浓度均明显高于C组水平;S3d组血浆TNFα浓度接近C组水平,T3d组血浆TNFα浓度明显低于C组水平.S组血浆IL-10水平在各时点均显著低于C、T组水平,T组血浆IL-10水平在各时点与C组相比均无明显差异.S组血浆NO浓度及iNOS活力明显高于C组水平及T组水平,T组血浆NO浓度及iNOS活力仅于1 d时,明显高于C组水平.结论 rhGH在减少败血症大鼠血浆TNFα、NO等促炎介质生成与释放的同时,也能有效地维持IL-10的抗炎介质水平,提示rhGH治疗可能有助于维持败血症时炎症调控网络的平衡.     

婴儿双歧杆菌介导的sKDR原核克隆表达及其对血管内皮细胞增殖的影响

目的 构建婴儿双歧杆菌介导的sKDR基因肿瘤靶向性转运系统并观察其对血管内皮细胞增殖的影响.方法 PCR扩增sKDR基因,提取与纯化pET32a质粒.EcoRⅠ和XhoⅠ对sKDR基因和pET32a质粒分别进行双酶切,用T4 DNA连接酶将目的 基因片段和载体连接.电穿孔法将连接反应物转染婴儿双歧杆菌.厌氧培养重组质粒转化菌,并将其处理液加入由VEGF诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)培养基中培养24 h,MTT比色法测定细胞存活率.结果 PCR、酶切鉴定及核酸测序结果表明,获得了含pET32a-sKDR重组质粒的婴儿双歧杆菌;RT-PCR及SDS-PAGE电泳结果证实sKDR在基因及蛋白水平成功表达.与空质粒对照组相比,重组质粒转化菌处理液可明显抑制HUVECs增殖(P<0.01).结论 成功构建了婴儿双歧杆菌介导的sKDR基因转运系统,体外实验证实其可明显抑制血管内皮细胞的增殖.     

重组人生长激素对败血症休克大鼠微循环功能障碍的影响

目的观察重组人生长激素(rhGH)对败血症休克大鼠微循环功能障碍的影响。方法ipE.coli复制大鼠败血症休克模型。采用微循环观测系统及激光多普勒观测正常对照组(C组)、败血症休克组(S组)及rhGH治疗组(T组)第1、3天的肠道微循环、耳廓血流量等指标的变化情况。结果S组大鼠肠道微循环血流明显减慢甚至淤滞,血管明显扩张,血管数、管袢数及功能血管数明显减少,尤以第1天时最为明显;T组大鼠肠道微循环血液流速、血管数及功能血管数均明显高于S组,与C组比较无显著性差异。S组大鼠耳廓血流量在各时点均显著低于C组、T组水平,但T组与C组比较无明显差异。结论rhGH可明显改善败血症休克大鼠的微循环功能障碍。     

阿片类药物防滥用技术研究进展

近10年来,阿片类药物滥用成为美国一个愈发严重的公共卫生问题和社会问题.为了减少药物滥用,美国FDA鼓励药企开发了多种阿片类药物的防滥用制剂.防滥用技术根据机制不同可分为物理屏障、化学屏障、拮抗药、厌恶剂和前药.虽然防滥用制剂能在一定程度上抵御粉碎或提取活性药物成分,但每种机制都分别存在一些局限与不足.本文分别对各类防...     

半胱氨酸对人血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察半胱氨酸(Cys)对人血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖和凋亡的影响.方法 采用组织贴块法体外培养人VSMCs,用不同浓度的Cys培养液孵育细胞24h,用MTT法检测VSMCs增殖,流式细胞术检测VSMCs凋亡.RT-PCR法检测bax mRNA的表达.结果 体外培养的人VSMCs在终浓度为100、200、500和10001μmol/L Cys的培养液中孵育24h后的吸光度(A)值均高于对照组(P<0.05),表明Cys可诱导人VSMCs增殖;但同时.VSMCs凋亡细胞数明显高于对照组(P<0.05),bax的表达增强,表明Cys亦诱导了人VSMCs凋亡.结论 浓度较高时半胱氨酸可同时诱导VSMCs增殖和凋亡.