可诱导型真核表达载体的构建及其表达效率的测定

目的：利用ＭＴ－Ⅱ启动子的Ｚｎ＾２＋诱导表达特性,构建含多克隆位点的可诱导型真核表达载体ｐＭＤＮＡ３－ｎｅｏ,并用荧光素酶报告基因（ｌｕｃ）检测其表达效率。方法：用分子克隆方法构建载体,并将ｌｕｃ基因克隆到其多克隆位点内,转染胃癌细胞ＳＧＣ７９０１,Ｇ４１８筛选出稳定克隆,分别在不同浓度ＺｎＳＯ４级不同诱导时间下进行诱导表达和测定,并检测不同单细胞株的表达效率。     

人c-myc反义真核表达载体的构建及其对BT325细胞c-Myc蛋白表达的抑制作用

目的：构建人c-myc第三外显子及3’非翻译区反义真核表达载体,用脂质体介导法转染人胶质瘤BT325细胞,以期降低其c-Myc表达水平．方法：采用基因重组方法构建真核表达载体;用G418筛选抗性细胞克隆;用免疫细胞化学ABC法检测细胞蛋白质的表达;用MTT法测定顺铂作用下,未转染及转染组细胞的存活率．结果：c-myc反义真核表达载体在BT325细胞中稳定表达,转染细胞c-Myc表达水平显著降低;c-Myc表达减弱细胞对顺铂诱导凋亡的敏感性．结论：抑制c-mycDNA第三外显子及其3’端非翻译区反义表达载体能够显著抑制。c-myc基因的表达;c-Myc在化疗药物诱导肿瘤细胞凋亡的过程中有重要作用．     

bcl-2核酶对SMMC7721细胞端粒酶活性的影响作用

目的 观察bcl-2核酶对SMMC-7721细胞的作用,探讨bcl-2表达水平的改变对细胞端粒酶活性的影响。方法 经脂质体介导的方法将PMTr-neo（下向bcl-2核酶真核表达载体）导入SMMC7721细胞中,细胞克隆转移扩大培养后,采用TUNEL,TRAP-PCR-ELISA,免疫组化技术结合图像分析技术检测SMMC7721/PMTr-neo细胞凋亡=细胞端粒酶活性及P16,P12的改变。结果 较对照组SMMC7721/PMTr-neo细胞Bcl-2表达水平显著下降,伴有显著细胞凋亡现象;同时端粒酶活性下降,P16,P21表达水平显著增加。结论 bcl-2核酶可促进SMMC7721细胞发生凋亡,并降低细胞端粒酶活性,提示Bcl-2表达水平的改变对细胞端粒酶活性有一定的影响。     

紫杉醇对人粘液表皮样癌细胞系的细胞毒研究

目的：研究紫杉醇为人粘液表皮样癌细胞系MEC－1的细胞毒作用,为临床应用选择最佳给药方案提供依据。方法：应用细胞计数法研究不同药物浓度及不同作用时间细胞毒作用的特点。结果：紫杉醇对MEC1的最大抑制率为50－90％,当药物浓度为10nmol/L时抑制率已接近最大,增加药物浓度10－100倍并不能增加抑制效应。但延长药物暴露时间大于12h能明显增强抑制效应,即使作用72h时,10－1000nmol/L的抑制率分别为64％,56％,44％和49％,结论：紫杉醇对人粘液表皮样癌细胞系MEC－1有明显的细胞毒作用,能明显抑制其,但抑制作用并不完全,此细胞毒作用的时间依赖性明显大于剂量依赖性,提示临床应用应以延长药物作用时间为目的,以期最大程度上发挥紫杉醇的抗肿瘤效应。     

两种细胞凋亡检测方法的比较

0引言近年来随着细胞凋亡分子机制研究的深人，人们认识到凋亡的意义不只局限于能使肿瘤细胞减少．‘它对于研究肿瘤的发生机制也有着重要的意义[1]．我们将比较两种最常用于群体细胞凋亡的检测方法．l材料和方法1．l材料HL－60细胞山本校病理教研室白庆咸博士提供，etoposide100mg（5ml）购自西安光华制药厂；RP－MI1640培养基为Gibco产品．1．2方法l．2．l凋亡模型的建立培养细胞至16X1O6，分为4组，即加人etoposide90g／mL。作用0，l.0，2．5，3．5h4组，其中0．5h．～3.5h组先加人etoposi作用0．5h，再1000r／minX3min离心去除etop…     

Bcl-2核酶对SMMC7721细胞的促凋亡机制

目的 观察Bel-2核酶对SMMC-7721细胞的作用,探讨bcl-2抑制细胞凋亡的机制。方法 经脂质体介导的方法将PMTr-neo(正向Bcl-2核酶真核表达载体)导入SMMC 7721细胞中．细胞克隆转移扩大培养后,采用TUNEL,TRAP结合ELISA流式细胞仪,免疫组化技术检测SMMC 7721／PMTr-neo细胞增殖及细胞凋亡。结果 较对照组SMMC 7721／PMTr-neo细胞bcl-2表达水平显著下降,伴有显著细胞凋亡现象及端粒酶活性下降,结论 Bcl-2核酶可促进SMMC 7721细胞发生凋亡,并降低细胞端粒酶活性,为反义技术在肝癌治疗中应用提供理论依据。     

提高非放射性标记核酸分子杂交敏感性的研讨

提高非放射性标记核酸分子杂交敏感性的研讨王伯云，彭玮丹，吴人亮，李玉松（西安第四军医大学病理学教研室，西安７１００３２）非同位素标记核酸探针应用于分子杂交技术，已受到重视，正在生物学和医学领域推广，在临床检测中已用于一些疾病的诊断，称多基因诊断。分子...     

紫杉醇诱导食管癌细胞的细胞周期阻断与细胞凋亡

目的研究紫杉醇对食管癌细胞的细胞周期阻断及诱导凋亡的作用。方法应用形态学观察、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术等方法对紫杉醇诱导的食管癌细胞系Eca109进行了检测和观察。结果紫杉醇可将食管癌细胞阻断于G0／G1期及G2／M期并诱导其凋亡，凋亡细胞具有典型的凋亡形态特征，流式细胞仪检测有凋亡峰出现，琼脂糖凝胶电泳显示3nmol·L-1紫杉醇作用72h便可见明显的DNA梯带。100nmol·L-1和1000nmol·L-1浓度的紫杉醇作用于细胞，在形态变化与细胞周期变化上有很大差别。紫杉醇作用短时间（＜2h）去除后再培养比持续性作用更早促使细胞凋亡。结论紫杉醇不仅可以阻断食管癌细胞的分裂，而且对于间期细胞也有很大作用。细胞周期阻断并不直接诱导细胞凋亡，甚至可能抑制细胞凋亡的进程。食管癌细胞中存在多条凋亡途径。     

Bcl-2核酶诱导SMMC7721细胞凋亡与p16,p21蛋白表达的关系研究

目的　观察bcl 2核酶对人肝癌细胞株SMMC 772 1细胞的作用 ,并检测 p16和 p2 1的表达情况。探讨bcl 2核酶在肝癌治疗中的意义。方法　经脂质体介导的方法 ,将PMTr neo (正向bcl 2核酶真核表达载体 )导入SMMC772 1细胞中。细胞克隆转移扩大培养后 ,采用TUNEL法、免疫组化技术结合图像分析 ,在检测SMMC772 1/PMTr neo细胞凋亡的同时 ,检测 p16 ,p2 1的表达。结果　与对照组相比较 ,在bcl 2核酶诱发SMMC772 1细胞发生凋亡的同时 ,p16和 p2 1基因的表达水平显著增高。结论　bcl 2核酶通过封闭bcl 2的表达可促进SMMC772 1细胞凋亡 ,同时伴发 p2 1和 p16表达水平的增高     

Bcl—2核酶诱导SMMC7721细胞凋亡与p16,p21蛋白表达 …

目的 观察ｂｃｌ－２核酶对人肝癌细胞株ＳＭＭＣ－７７２１细胞的作用,并检测ｐ１６、ｐ２１的表达情况。探讨ｂｃｌ－２核酶在肝癌治疗中的意义。方法 经脂质体介导的方法,将ＰＭＴｒ－ｎｅｏ（正向ｂｃｌ－２核酶真核表达载体）导入ＳＭＭＣ７７２１细胞中。细胞克隆转移扩大培养后,彩用ＴＵＮＥＬ法、免疫组化技术结合图像分析,在检测ＳＭＭＣ７２７１／ＰＭＴｒ－ｎｅｏ细胞凋亡的同时,检测ｐ１６,ｐ２１的表达。结果