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优化构建UreB/HpaA双价幽门螺杆菌减毒活菌疫苗的免疫保护作用 总被引:11,自引:0,他引:11
目的 以减毒鼠伤寒沙门菌为载体,通过在UreB和HpaA间引入由3个甘氨酸残基组成的三肽柔韧接头,构建成UreB/HpaA双价抗幽门螺杆菌(Hp)活疫苗,并对照相应单价疫苗和空白载体研究其对C57BL/6小鼠的免疫保护效果。方法 用序列重叠延伸聚合酶链反应扩增带3个甘氨酸残基柔韧接头的融合基因UreB/HpaA,进一步以减毒鼠伤寒沙门菌SL3261为载体构建UreB/HpaA双价活疫苗,观察其在小鼠体内的稳定性。用双价活疫苗株免疫Ⅱ级C57BL/6小鼠1次,对照单价活疫苗和空白载体观察其在体内诱导的特异抗体反应和对小鼠的免疫保护作用。结果 测序结果显示,3个甘氨酸残基的编码序列GGTGGAGGC已成功地插入UreB/HpaA融合基因中。双价疫苗灌喂小鼠后,至少能在脾脏和回肠末段存留10d。双价疫苗在小鼠体内诱导血清特异性IgGl和IgG2a水平明显升高。UreB/HpaA双价疫苗的免疫保护率为77.3%(17/22),而UreB疫苗和HpaA疫苗的免疫保护率分别为50.0%(12/24)和43.5%(10/23)。结论 引入柔韧接头,优化构建表达UreB和HpaA的双价抗Hp活疫苗。UreB/HpaA双价活疫苗对Ⅱ级C57BL/6小鼠有更好的免疫保护作用。 相似文献
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表达幽门螺杆菌hpaA基因的减毒鼠伤寒沙门氏菌对小鼠的免疫保护作用 总被引:3,自引:1,他引:3
目的 克隆幽门螺杆菌 (H pylori)全长hpaA基因 ,构建表达HpaA蛋白的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌 ,并研究其对小鼠的免疫保护作用。方法 用PCR扩增全长hpaA基因 ,经适当的酶切 -连接反应将其连入原核表达质粒 pTrc99A ,并进行了基因测序。重组质粒经鉴定后再导入减毒鼠伤寒沙门氏菌SL32 6 1,提取重组菌质粒 ,PCR和酶切鉴定 ,筛选阳性克隆。用SDS -PAGE电泳和Westernblot进行HpaA表达分析和鉴定 ,用薄层扫描分析HpaA含量。重组菌 3× 10 8CFU/ 0 4ml/只免疫C5 7BL/ 6小鼠 ,4周后H pyloriSS110 5CFU/只攻击小鼠 ,再 5周后处死小鼠 ,取腺胃做快速尿素酶试验和Giemsa染色 ,以明确H pylori定植情况 ,对照观察免疫保护效果。 结果 经PCR和酶切证实 ,构建了含 783bphpaA基因的重组原核表达质粒 pTrc99A -hpaA ,并将后者成功转化了减毒鼠伤寒沙门氏菌。重组菌能表达约 30kDaHpaA蛋白 ,重组HpaA量约占全菌体蛋白量的 38 9% ,Westernblot证实其有免疫反应性。重组菌对小鼠免疫保护率为 4 3 4 8% (10 / 2 3) ,与空白对照组比统计差异显著 (P =0 0 1)。结论 构建了表达H pyloriHpaA的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌 ,该菌株对C5 7BL/ 6小鼠有免疫保护作用。 相似文献
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【目的】探讨幽门螺杆菌及其空泡毒素基因 (vacA)亚型、细胞毒素相关基因 (cagA)与胃上皮HLA DR抗原表达间的关系。【方法】①自 39例幽门螺杆菌阳性患者中分离培养出 39株幽门螺杆菌菌株 ,采用PCR方法鉴定 39株菌株的ca gA及vacA亚型 ;②采用HLA DR小鼠抗人单克隆抗体 ,对上述已行cagA及vacA亚型鉴定的幽门螺杆菌阳性患者及 2 2例阴性患者的胃窦活检标本行免疫组化染色。【结果】①幽门螺杆菌阳性患者胃上皮HLA DR表达较阴性患者更显著 ;②幽门螺杆菌定植密度与胃上皮HLA DR抗原表达程度间存在正相关 ;③感染cagA 菌株患者较感染cagA-株者胃上皮HLA DR抗原表达更明显 ;④本研究中vacAs1a/m2亚型占 90 % ,故未对不同vacA亚型与胃上皮HLA DR表达间的关系进行统计分析。【结论】①幽门螺杆菌感染可诱导胃上皮HLA DR抗原异常表达 ;②cagA 菌株可能通过胃上皮HLA Ⅱ类分子介导而与宿主发生更为密切的相互作用 ,从而较cagA-菌株引起更为显著的胃上皮损伤。 相似文献
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广东地区幽门螺杆菌空泡毒素基因亚型及其与胃肠疾病的关系 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:1)调查广东地区患感染幽门螺杆菌(Hp)的空泡毒素基因(vacA)亚型的流行情况;2)探讨不同的vacA亚型与协相关胃肠疾病问的关系。方法:自广东地区不同疾病患胃黏膜中分离得到191株Hp,抽提各株菌的总DNA,采用特定引物对各株菌vacA基因中间序列(m)及信号序列(s)进行PCR检测。结果:1)广东地区患感染Hp vacA基因亚型有sla/m2、sla/mlb、slb/m2、slb/mlb、s2/m2及sla/mlb—m2六种组合、各亚型所占比例分别为88.0%(168/191)、7.3%(14/191)、3.1%(6/191)、0.5%(1/191)、0.5%(1/191)及0.5%(1/191);2)vacA亚型在不同Hp相关胃肠疾病中的检出率无显性差异。结论:1)广东地区Hp vacA基因亚型以sla/m2占绝大部份;2)不能单纯以vacA亚型作为预测感染Hp后的疾病转归。 相似文献
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背景:餐后不适综合征(PDS)是临床常见的功能性胃肠病,胃肠动力障碍为其重要病理生理机制之一。莫沙必利是一种胃肠促动力药.已用于胃肠动力障碍的治疗。目的:观察莫沙必利分散片治疗PDS的近期疗效。方法:60例符合罗马mPDS诊断标准的患者随机分成M组(接受铝碳酸镁1000mg加莫沙必利分散片5mg tid治疗)和P组(接受铝碳酸镁1000mg加安慰剂tid治疗)。疗程均为2周。于治疗前后行患者总体PDS症状评分并检测胃排空功能。结果:两组治疗后总体PDS症状评分较治疗前均显著降低(P〈0.001),其中M组评分又显著低于P组(P〈0.01)。M组治疗有效率为83.3%,显著高于P组(40.0%)(P〈0.001)。两组治疗前胃3h排空钡条数无明显差异,均显著少于正常对照组(P〈0.001)。M组治疗后胃排空钡条数较治疗前和P组治疗后显著增多(P〈0.001),P组治疗后与治疗前相比则无明显差异。结论:莫沙必利分散片能明显改善PDS患者的胃排空功能,对缓解餐后饱胀和早饱症状近期疗效满意。 相似文献
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目的:分析广东地区细胞毒素相关基因(cagA)在幽门螺杆菌(H.pylori)中的分布情况及其与患者性别、年龄的关系;探讨H.pylori cagA在不同胃肠疾病发生中的作用及其与胃粘膜慢性炎症程度及H.pylori定植密度的关系。方法:采用改良Skirrow培养基分离培养得到191株H.pylori,用特定引物对各株细菌的cagA 3′端行聚合酶链反应(PCR)扩增鉴定;对其中83例患者再各取胃窦粘膜2块,经HE及Giemsa染色后观察胃粘膜慢性炎症程度及H.pylori定植密度。结果:广东地区H.pylori cagA阳性者占85.3%(163/191);H.pylori cagA阳性率与患者的性别、年龄无关;消化性溃疡及胃癌患者的H.pylori cagA阳性率显著高于慢性胃炎患者;cagA阳性H.pylori菌株在胃粘膜表面的定植密度较cagA阴性菌株更高,引起的胃粘膜慢性炎症也更为严重;H.pylori的定植密度与其引起的慢性炎症程度呈正相关。结论:广东地区cagA阳性H.pylori感染者占绝大多数;cagA阳性菌株较cagA阴性菌株具有更强的致病力,可能引起更为严重的胃肠道损害。 相似文献
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幽门螺杆菌感染与年龄段及家庭成员感染的关系 总被引:5,自引:0,他引:5
胃炎、消化性溃疡、原发性粘膜相关性淋巴样组织(musoca associated lymphoid tissue,MALT)淋巴瘤和胃癌均与幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)感染存在相关,而且H.pylori感染是儿童消化性溃疡的主要原因。H.pylori感染流行病学特点和危险因素已得到广泛研究,有报道发现,儿童时期H.pylori感染存在不同种族差异。 相似文献
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目的探讨十二指肠胃反流(DGR)的非溃疡性消化不良患者胃窦部胃电图异常的特点.
方法研究对象为非溃疡性消化不良患者56例,男30例,女26例,年龄44.3±12.6岁,具有腹痛、腹胀、上腹部烧灼感、恶心、呕吐、早饱及食欲下降等症状;健康人对照组,30例,男16例,女14例,年龄41.4±12.3岁.用便携式胆红素监测仪(Bili-tec 2000)行24h胃内胆红素监测及床边体表胃电图检查,比较病理性DGR患者与生理性DGR患者之间、患者与健康人之间的胃窦部胃电图特点. 相似文献