树突细胞外泌体通过mTOR-SREBP途径引起心肌梗死后血脂异常

目的：作为重要炎症细胞的树突细胞（DCs）参与动脉粥样硬化。 DCs分泌的外泌体（DEXs）最近引起了人们的广泛关注，但对其在心肌梗死（MI）后血脂异常的作用研究较少。 SREBP是一种重要的转录因子，通过mTOR-SREBP信号传导参与脂质生成。我们假设DEXs通过mTOR-SREBP途径改变脂质代谢，影响MI后血脂谱的变化。方法：用正常心肌细胞（Control-DEX组）或梗死心肌细胞（MI-DEX组）的上清液刺激小鼠的DCs。用两组分泌的DEXs处理肝细胞，用酶标记测定仪测定脂质的合成和分泌。进一步通过蛋白质印迹和RT-PCR检测mTOR-SREBP途径的表达。结果：MI-DEX干预肝细胞后，胆固醇和LDL-c水平显着升高，mTOR-SREBP表达增加。使用SREBP抑制剂后，胆固醇的合成和分泌功能随着mTOR-SREBP表达的降低而下降。结论：DEXs可能通过干扰肝细胞中的mTOR-SREBP途径在MI的血脂异常中发挥重要作用。     

一个扩张型心肌病伴房室传导阻滞家系SCN5A基因的突变研究

目的研究一个扩张型心肌病伴房室传导阻滞家系中心脏钠离子通道基因（voltagegated sodium channel type V,SCN5A）的遗传突变或多态位点。方法应用聚合酶链反应结合DNA直接测序技术对该家系的23位直系成员进行SCN5A基因编码区全部28个外显子的检测;对于新发现的变异位点筛查133名无血缘关系的正常人作为对照。结果在该家系中共检测到4个遗传变异,分别为c．87G〉A（A29A）,C．731T〉C（1244T）,C．3578G〉A（R1193Q）和c．5457T〉C（D1819D．）。其中c．731T〉C（1244T）为新发现的遗传变异,位于第7外显子,碱基的变异导致氨基酸第244位由苏氨酸代替异亮氨酸。家系中有4名成员携带1244T,但是133名健康对照者中未发现该变异。结论在一个扩张型心肌病伴房室传导阻滞家系中发现了SCN5A基因的新遗传变异。     

树突状细胞分泌的外泌体对心肌梗死后肝细胞血脂代谢的影响

目的:探讨树突状细胞(DCs)所分泌的外泌体(DEXs)对心肌梗死(MI)后肝细胞血脂谱的影响及可能的作用机制。方法:用正常心肌细胞或梗死心肌细胞的上清液刺激小鼠DCs,将DCs分泌的DEXs分别命名为Control-DEX和MI-DEX。用两组DEXs处理肝细胞,酶标测量仪测定肝细胞中脂质的合成和分泌情况。进一步通过蛋白质印迹和实时荧光定量PCR检测肝细胞哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)-甾醇调节元件结合蛋白(SREBP)通路相关分子的表达。结果:MI-DEX干预肝细胞后,胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平显著升高,mTOR-SREBP通路相关分子表达量增加(P0.05)。使用SREBP抑制剂后,胆固醇的合成和分泌功能随着mTOR-SREBP表达量的降低而下降(P0.05)。结论:MI-DEX可通过干扰肝细胞中的mTOR-SREBP途径,在MI后肝细胞的血脂代谢中发挥重要作用。     

PC4基因RNAi慢病毒载体的构建及有效靶序列鉴定

目的：筛选慢病毒介导PC4 RNA干扰的有效靶序列。方法：通过数据库设计3条PC4干扰候选靶序列,将靶序列构建到慢病毒载体中,转入HEK-293T细胞后,感染H9C2心肌细胞。通过实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法鉴定靶序列干扰PC4的效果。结果：成功构建shPC4慢病毒载体,获得高效感染心肌细胞的慢病毒;感染心肌细胞后实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹显示,shPC4-1具有较高的干扰效果（P<0.05）。结论：成功筛选出高效的PC4 RNAi靶序列。