动物源性粪肠球菌Ebp菌毛亚单位蛋白多抗的制备及其对生物被膜形成的影响

目的 研究制备动物源粪肠球菌Ebp菌毛亚单位蛋白多克隆抗体及其可能的免疫学作用。方法 运用生物信息学软件对粪肠球菌菌毛EbpA、EbpB和EbpC蛋白的抗原表位进行预测,发现6个抗原表位,将其构建重组质粒,表达、纯化,免疫新西兰大白兔后获得了6个菌毛亚单位多克隆抗体,再进行抗体特异性和生物膜阻断分析。结果 6个菌毛亚单位重组蛋白与预测的分子量相符,均对新西兰大白兔具有免疫原性,EbpA1、EbpA2、EbpA3、EbpB1、EbpC1和EbpC2亚单位蛋白多克隆抗体效价经双向免疫琼脂扩散实验检测分别达到1∶16、1∶8、1∶32、1∶32、1∶64和1∶64。经WB检测和生物膜阻断试验,6个多克隆抗体均具有抗原特异性和野生菌株生物膜阻断作用,而且以EbpA1、EbpC1和EbpA3的生物膜阻断作用最强。结论 粪肠球菌EbpA1、EbpC1和 EbpA3亚单位蛋白可能为粪肠球菌免疫预防和治疗奠定基础。     

羊口疮病毒SYBR Green I qPCR方法建立及VIR基因的遗传演化分析

目的 为快速、高效、准确地检出羊口疮病毒(ORFV),并进一步明确皖北地区羊群ORFV流行毒株的遗传变异情况。方法 本研究基于ORFV F1L基因建立SYBR Green I实时荧光定量PCR(qPCR)方法，对皖北地区羊场开展ORFV检测，并从阳性病料中PCR扩增ORFV的完整VIR基因，直接测序后进行遗传演化分析。结果 所建立ORFV SYBR Green I qPCR方法的线性关系良好，R²=0.994;扩增效率高，E%=95.62%;检测速度快，理论反应时间约15 min;灵敏度较高，检测下限为10 copies/μL,是普通PCR法的100倍；重复性良好，组内和组间变异系数分别为0.44%～1.14%和2.82%～3.16%。用该qPCR方法对采集自皖北地区的168份羊临床样本进行检测，其ORFV阳性率为37.5%(63/168)。PCR扩增阳性样本中ORFV的完整VIR基因并直接测序，共获得52条全长VIR基因序列，其中21条来源于山羊，31条来源于绵羊。52条VIR基因间核苷酸序列及氨基酸序列的一致性分别为95.8%～100.0%和93.5%～100...