应用熏烟联合脂多糖方法建立慢性阻塞性肺疾病相关肺动脉高压小鼠模型

目的建立一种慢性阻塞性肺疾病相关肺动脉高压（COPD—PAH）小鼠模型。方法模型组小鼠第1天和第14天鼻内滴注脂多糖（LPS）,其余时间每天熏烟4h,上下午各2h,10支香烟／h,6d／周,持续熏烟3个月。对照组小鼠不做任何干预。建模期间监测小鼠体质量变化。建模结束后,检测以下指标：肺功能和右心压力;小鼠支气管肺泡灌洗液中炎症细胞总数和细胞类型;用EI,ISA方法检测肺组织中细胞因子KC和黏蛋白MucSac的水平。并观察气道和肺组织病理改变。结果与对照组相比,模型组小鼠体质量和动态肺顺应性显著降低,吸气阻力、右心室平均压和右心室重量／体质量比等显著增加。模型小鼠支气管肺泡灌洗液中自细胞总数升高,以巨噬细胞为主,并伴随中性粒细胞明显增加。肺组织KC和Muc5ac蛋白均较对照组明显增多。肺组织切片PAS染色显示模型组杯状细胞增生。此外,在模型组小鼠肺切片中观察到炎症浸润,气管壁和肺小血管壁平滑肌增厚,气管基底层下胶原沉积,提示气管和肺血管重塑的发生。结论用这种熏烟结合气道内滴注LPS的方法可以在短期内建立COPD-PAH小鼠模型。     

钙池操纵性钙内流在非小细胞肺癌中的作用

目的探讨钙池操纵性钙通道（store-operated calcium channel,SOCC）介导的钙池操纵性钙内流（storeoperated calcium entry,SOCE）在非小细胞肺癌中的作用。方法应用实时定量PCR方法和Western blot方法检测非小细胞肺癌组织和A549肺腺癌细胞中SOCC的mRNA和蛋白表达。应用Fura-2Am荧光素方法检测A549细胞的SOCE;经过不同浓度SOCE抑制剂处理A549细胞后,应用WST-1比色法和Transwell方法检测A549细胞的增殖和侵袭能力改变。结果在非小细胞肺癌组织和A549细胞中有STIM1、ORAI1～3的mRNA和STIM1、ORAI1的蛋白表达,分化差的肿瘤组织比分化好的高表达ORAI1 mRNA（P=0.028）;A549细胞中存在SOCE,并且SOCE抑制剂SKF-96365或Ni Cl2可抑制A549细胞的增殖和侵袭。结论非小细胞肺癌组织中表达STIM1和ORAI1～3。A549肺腺癌细胞存在SOCE,并且由SOCC介导的SOCE在肺癌细胞生长和转移过程中起着重要的作用。     

大鼠肺动脉和主动脉成纤维细胞的原代培养及生物学行为研究

目的 建立大鼠肺动脉和主动脉外膜成纤维细胞的体外分离、培养及鉴定的方法,并对其细胞形态和成纤维细胞转化成肌成纤维细胞的特征进行观察.方法 通过精分肺动脉和主动脉,剥取外膜,用10％的胎牛血清低糖DMEM培养基诱导细胞爬出生长.倒置显微镜下观察成纤维细胞形态,并对细胞进行免疫荧光鉴定.通过对α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的观察确定传代细胞是否转化为肌成纤维细胞.结果 成纤维细胞能够迅速从剥取的外膜中爬出生长,波形蛋白细胞免疫荧光染色为阳性.主动脉成纤维细胞和肺动脉成纤维细胞形态差别大,前者为铺路石状,后者呈细长梭形.2种成纤维细胞经传代皆能转化为肌成纤维细胞,免疫荧光染色可见α-SMA大量表达,前者包围着细胞核呈条索状非定向分布,后者平行于细胞长轴呈细丝状表达.结论 该方法所获得的成纤维细胞纯度高,可在体外稳定培养.本研究首次发现了肺动脉和主动脉成纤维细胞形态学及生物行为上的差别,为细胞水平研究主动脉和肺动脉血管重塑,胶原沉积等相同或不同的病理机制提供了充足可靠的靶细胞模型.     

熏烟对小鼠肺内Muc1表达的影响及机制

目的 观察熏烟对小鼠肺组织中Muc1表达的影响,并初步探讨其表达水平的改变与烟雾刺激的关系.方法 C57雄性小鼠随机分为熏烟组(8只)和对照组(8只),熏烟处理或正常饲养相同时间后处死小鼠,对支气管肺泡灌洗液(BALF)进行细胞计数、染色和分类,同时测定BALF中肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;通过酶联免疫吸附测定法及蛋白质免疫印迹法对BALF及肺组织中Muc1蛋白水平进行检测.同时对香烟烟雾提取物刺激肺上皮来源的A549细胞后MUC1的表达水平进行了验证.结果 与对照组比较,熏烟组小鼠肺组织中出现明显炎症细胞浸润,BALF中的细胞总数、中性粒细胞数、巨噬细胞数均增高.同时,熏烟组小鼠的肺组织及BALF中的Muc1表达水平以及BALF中TNF-α的水平均高于对照组(P＜0.05或P＜0.01).此外,香烟烟雾提取物刺激A549细胞后,可诱导黏蛋白MUC1表达上升.结论 熏烟可以导致小鼠肺组织炎症反应并伴随Muc1的表达水平升高和TNF-α 分泌的增加,MUC1表达水平的增加可能与香烟烟雾直接作用于肺上皮细胞有关.     

桥粒斑蛋白在肺动脉高压中对血管肺动脉平滑肌的功能研究

目的探究桥粒斑蛋白(DSP)在肺动脉高压(PH)大鼠模型与人肺动脉平滑肌细胞(hPASMCs)的表达变化及其在PH发生、发展中的作用。方法 24只SPF级别雄性SD大鼠运用随机数字表法随机分为正常对照(NC)组、野百合碱(MCT)组、低氧(HYP)组及低氧联合Sugen5416(SuHx)组, 检测各组大鼠右心室收缩压(RVSP)及右心室肥厚指数(RVHI), 观察各组大鼠血管增厚程度;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测各组大鼠中肺组织中DSP的表达情况。体外培养hPASMCs, 分别用转化生长因子β1(TGF-β1)或HYP处理细胞24、48、72 h, Western blot检测各组细胞中DSP表达情况。采用小分子siRNA DSP干扰序列及阴性对照序列分别转染hPASMCs, 分为DSP干扰(siDSP)组及阴性对照(siNT)组。2组均进行TGF-β1、CoCl2或HYP处理48 h, Western blot检测增殖分化及凋亡相关蛋白[p-p38、增殖相关蛋白(PCNA)、抗凋亡蛋白(Bcl2)、促凋亡蛋白(Bax)]的表达情况, 划痕实验检测细胞的迁移能力变...     

大鼠肺血管内皮细胞的原代培养及生物学行为比较研究

目的:建立大鼠肺动脉内皮细胞(PAEC)、肺静脉内皮细胞(PVEC)以及肺微血管内皮细胞(PMVEC)的体外分离和培养方法,分析3种肺血管内皮细胞的生物学特征及功能。方法:本研究为实验研究。精分1只雄性SD大鼠肺动脉、肺静脉,肺组织取边缘剪碎,各样本分别用混合酶液消化,以血小板-内皮细胞黏附分子(PECAM-1/CD3...     

瞬时受体电位阳离子通道蛋白6合成肽的设计与合成

目的 预测瞬时受体电位阳离子通道蛋白6(TRPC6)的抗原表位特性,筛选合适的TRPC6氨基酸序列合成多肽,用于制备抗TRPC6合成肽单克隆抗体.方法 根据TRPC6氨基酸序列,采用IEDB分析及蛋白质软件(Lasergene710 WinInstall)分析,预测TRPC6表面性、抗原性、亲水性及可能的二级结构性质,...     

小型动物肺脏灌流固定装置的研制和应用

目的 建立控制简便、稳定且可规范化操作的适合小型实验动物肺脏灌注固定装置.方法 该装置包括用于放置动物肺脏的工作台、用于盛放固定液的灌流容器、灌流管、带刻度的支撑杆和用于固定灌流容器的固定夹等,能有效实施小动物肺脏的灌注固定.应用该肺脏灌流固定装置分别对大鼠及小鼠肺脏进行灌注固定,石蜡包埋后进行切片,HE染色,与常规直接固定方法进行比较.结果 该小型动物肺脏灌流固定装置可快速、便捷、标准化地对小鼠、大鼠肺脏进行固定,并且灌注固定的肺脏石蜡包埋切片后HE染色,肺脏组织、小血管及气管组织结构清晰,背景干净.结论 研制的小型动物肺脏灌流固定装置应用方便,调节灵活,结构简单,成本低,易操作,能对小型动物肺脏有效进行固定,经灌注固定肺组织切片明显优于直接固定法.