醛固酮拮抗剂对肝纤维化大鼠NOX4蛋白表达的抑制作用

目的 探讨醛固酮拮抗剂对肝纤维化大鼠NOX4蛋白表达的抑制作用. 方法 体内实验:雄性Wistar大鼠24只,随机分为3组,每组8只.模型组:用四氯化碳(CCl4)油2.5 ml/kg皮下注射,3次/周;安体舒通组:CCl4油注射的同时予以安体舒通20 mg/kg灌胃,1次/d;对照组:用橄榄油皮下注射,于4周后处死实验动物取材.用HE染色观察肝组织形态结构;Masson染色进行METAVIR肝纤维化评分;免疫组织化学法检测NOX4蛋白的表达.体外实验:将大鼠HSC-T6细胞株与不同剂量的醛固酮(10-9、10-7、10-5 mol/L,观察剂量效应)作用不同时间(6、12、24h)以观察时间效应.给予醛固酮(Ald)1μmol/L、依普利酮1μmol/L预处理60min,再给予Ald刺激大鼠HSC-T6细胞,设立阴性对照组.Western blot方法检测NOX4蛋白的表达.采用Oneway ANOVA方差分析法,首先用Levene方法进行方差齐性检验,确定方差齐且整体比较组间差异有统计学意义后进一步做多重比较,多重比较采用LSD法. 结果 CCl4组纤维化程度较对照组明显增高(相对表达量为16.060±0.300比2.471±0.160),两组比较,差异有统计学意义.CCl4+Sp组纤维化程度较CCl4组低(相对表达量为5.761±0.152比16.060±0.300),两组比较,差异有统计学意义.免疫组织化学结果显示,与对照组相比,CCl4组NOX4蛋白表达明显增高(相对表达量为7.231±0.211比1.350±0.252),两组比较,差异有统计学意义.与CCl4组相比,CCl4+Sp组NOX4蛋白表达下降(相对表达量为4.270±0.242比7.231±0.211),两组比较,差异有统计学意义.Ald刺激HSC-T6细胞后NOX4蛋白表达增强,并呈时间、浓度依赖性,在10-5 mol/L浓度刺激24h达到峰值;与对照组相比,Ald组NOX4表达明显增加(相对表达量为0.710±0.011比0.316±0.015),两组比较,差异有统计学意义.与Ald组相比,Ald+依普利酮组NOX4的表达减少(相对表达量为0.615±0.014比0.710土0.011),两组比较,差异有统计学意义.结论 醛固酮拮抗剂通过抑制Ald诱导的氧化应激效应抑制肝纤维化大鼠NOX4蛋白的表达.