嘌呤霉素肾病大鼠肾小球中nephrin、Podocin和α-actinin与蛋白尿的关系

目的动态观察肾小球足细胞及裂孔隔膜分子nephrin,podocin和α-actinin在嘌呤霉素(puromycinaminonucleoside,PAN)大鼠肾病模型肾组织中表达的时相变化,探讨这些分子间及这些分子与蛋白尿发生的关系。方法用间接免疫荧光染色及实时定量PCR方法,检测PAN注射后12h、1d、36h、2d、5d、10d、15d及20d大鼠肾小球中nephrin,podocin和α-actinin分子分布和表达。结果(1)PAN注射后1d、2d及5d时,尿蛋白量无明显改变;10d时尿蛋白量明显增加(P=0.02);20d时恢复至对照组水平。(2)对照组大鼠肾小球中nephrin和podocin沿肾小球毛细血管袢呈连续线状分布,α-actinin沿肾小球毛细血管袢呈点线状分布。PAN注射1d后,nephrin和podocin的分布即发生改变,表现为断续、非线性分布。nephrin和podocin的分布改变随着尿蛋白的增多而加重,尿蛋白恢复时也逐渐恢复。20d时,α-actinin沿肾小球毛细血管袢呈连续线性分布。(3)免疫荧光定量分析结果表明,在PAN注射后36h(P=0.04)、2d(P=0.03)及5d(P=0.04)时,肾小球中podocin的免疫荧光染色强度明显下降,于第10d降至最低(P=0.006);自15d时逐渐恢复(P=0.007),20d后podocin的免疫荧光强度恢复至对照组水平。nephrin的免疫荧光染色强度在PAN注射第5天后出现下降(P=0.002),持续下降至第10天(P=     

医院含有中成药的门诊处方点评分析

目的探讨新疆医科大学第一附属医院含中成药处方点评存在的问题,从而提高处方质量,促进中成药合理使用。方法对新疆医科大学第一附属医院2012年1月至2013年7月的317798张含有中成药的门诊处方,统计处方量存前10位的科室,并随机每月抽取1000张进行分析。统计2011年1月至2012年12月销售金额在前10化的中成药。结果含有中成药的门诊处方存在重复给药[19．4％（37／191）],用法、用量不适宜[28．8％（55／191）],诊断书写不全[18．3％（35／191）]等问题,共计不合格处方191张,处方合格率为99．0％（18809／19000）。中成药使用量以儿科门急诊、方便门诊最多,分别为76279张（24．0％）、40434张（12．7％）。金水宝胶囊、灯盏生脉胶囊销售金额位居前2名,分别销售了470．8万元、425．0万元。结论陕师和药师应加强中医药专业知识的学习,提高中成药合理使用水平。     

氯沙坦对幼龄肾硬化大鼠的保护作用及其机制探讨

目的观察血管紧张素Ⅱ受体-1拮抗体(AT1RA)——氯沙坦对幼龄肾硬化大鼠的保护作用,并探讨其减轻细胞外基质(ECM)积聚的机制。方法17只SD幼龄大鼠(1月龄,体重100g左右)随机分为3组:对照组(5只)、模型组(6只)和治疗组(6只)。对后两组大鼠行单侧肾切除,1周后加阿霉素(5mg/kg)注射,诱导肾硬化模型。术后治疗组予氯沙坦5mg/(kg·d)共12周。观察各组大鼠尿蛋白、血生化指标变化及肾组织的病理改变,并用免疫组化方法检测转化生长因子-β1(TGF-β1)在肾小球的蛋白表达。结果氯沙坦于实验的第9、12周显示出较好的降尿蛋白作用,治疗组尿蛋白与同期模型组相比分别为2.41mg/24h,1.97mg/24h,2.96mg/24h,3.54mg/24h比17.28mg/24h,7.39mg/24h,14.20mg/24h,0.55mg/24h(P均<0.01)。实验结束时,氯沙坦形态学上显示有减轻肾小球系膜增生和硬化的作用,治疗组与模型组相比,系膜增生率和硬化指数分别为3.45%、3.36%比35.40%、40.28%和0.25%、0.13%比1.86%、2.61%(P均<0.05);其且下调了TGF-β1在肾小球内的蛋白表达,两组TGF-β1的光密度值(A值)之比为(0.143±0.023)比(0.221±0.036)(P<0.01)。结论在此单侧肾切除阿霉素肾病幼鼠肾硬化模型上,氯沙坦显示了降尿蛋白及减轻肾小球系膜增生和硬化的作用;并提示AT1RA对此肾组织学改变的保护作用可能与下调TGF-β1在肾内的表达以抑制细胞外基质积聚有关。     

儿童原发膜性肾病肾小球C1q或IgA沉积的意义探讨

目的探讨儿童原发膜性肾病(PMN)肾小球C1q或IgA沉积与临床和病理表现的关系。方法回顾性总结并分析2012年12月至2020年12月北京大学第一医院儿科诊断的33例PMN患儿临床及病理表现[肾组织磷脂酶A2受体(PLA2R)抗原、IgG亚型检测]、血清抗PLA2R抗体及治疗反应等资料。分别根据PLA2R检测结果、肾脏病理表现、是否有C1q沉积、是否有IgA沉积分别分为PLA2R相关组和非PLA2R相关组、典型PMN组和不典型PMN组、C1q沉积组和无C1q沉积组、IgA沉积组和无IgA沉积组。组间比较采用t检验、Mann-WhitneyU检验或Fisher确切概率法。结果 33例PMN患儿中男20例、女13例, 起病年龄11(8, 13)岁, 临床表现为肾病水平蛋白尿者32例。病程4.6(2.1, 11.6)个月时行肾活检, 28例(85%)在肾活检前接受糖皮质激素和(或)免疫抑制剂治疗。PLA2R相关组20例(61%), 非PLA2R相关组13例(39%)。与非PLA2R相关组相比, PLA2R相关组发病年龄偏大[12(10, 13)比7(3, 12)岁, Z=-2.52, P=...     

估算的尿蛋白在儿童肾小球疾病中的适用性

目的评价不同公式估算尿蛋白反映儿童肾小球疾病24 h尿蛋白定量的可靠性。方法横断面研究, 收集2001年1月至2021年12月就诊于北京大学第一医院儿科的443例肾小球疾病患儿实测24 h尿肌酐和通过6个相关公式计算得出的估算24 h尿肌酐、实测24 h尿蛋白定量、实测尿蛋白肌酐比(UPCR)、尿沉渣镜检结果, 用实测24 h尿肌酐或估算24 h尿肌酐乘实测UPCR计算得到估算尿蛋白。采用Spearman相关分析、Bland-Altman分析法及线性回归分析比较估算尿蛋白和实测UPCR与24 h尿蛋白定量间的相关性、一致性和准确性, 并分析尿蛋白水平和尿红细胞数目对于二者关系的影响。结果 443例患儿中男221例、女222例, 年龄(11±4)岁, 其中肾病综合征216例、IgA肾病78例、Alport综合征47例、系统性红斑狼疮42例、紫癜性肾炎58例以及孤立性蛋白尿2例。Spearman相关分析提示实测UPCR与24 h尿蛋白定量具有相关性(r=0.90, P<0.05), 应用实测24 h 尿肌酐得到的估算尿蛋白和24 h尿蛋白定量相关性得到改善(r=0.94, P<...     

肾组织石蜡切片Ⅳ型胶原α链免疫组织化学染色法诊断Alport综合征

Alport综合征(Alport syndrome,As)的诊断问题日益受到关注.采用抗不同α(Ⅳ)的单克隆抗体,对肾及皮肤活检组织进行冰冻切片免疫荧光染色对Alport综合征的诊断具有重要价值[1],但冰冻切片难以长期保存,异地标本难以运送,相对于此石蜡切片有其优势.     

肾病综合征伴继发性红细胞增多症15例报告

为探讨原性发肾病综合征（ＮＳ）伴继发性红细胞增多症（ＰＣ）的发生情况及其可能促成因素，对２２２例ＮＳ患儿进行了回顾性研究，发现１５例（６．７％）伴有持续性高血红蛋白血症（Ｈｂ≥１６０ｇ／Ｌ）的患儿符合继发性ＰＣ诊断，年龄５～１２岁；男１２例，女３例。对激素治疗反应：３例敏感，１２例耐药。３例激素治疗前已有ＰＣ；７例ＰＣ随激素治疗开始出现，并随激素减量而消失；其余５例住院时肾病很重，已接受大剂量激素治疗，随着肾病缓解，激素减量，Ｈｂ亦正常。回顾性分析提示ＰＣ可发生于ＮＳ患者，与肾病状态及激素的应用有关。     

podocin基因敲低对小鼠足细胞nephrin和α-actinin表达与分布的影响

目的 研究足细胞分子podocin、nephrin和α-actinin之间的相互作用和联系。方法 将针对podocin分子设计的特异RNA干扰(RNAi)质粒导人体外培养的小鼠足细胞系(MPC5)；应用免疫荧光染色及双标记在共聚焦显微镜下观察nephrin、podocin和α-actinin的分布方式；半定量RT-PCR和免疫蛋白印迹检测podocin、nephrin，α-actinin-4及内参照GAPDH／β-actin在mRNA水平和蛋白水平的表达量。结果 (1)干扰组podocin的荧光强度显著低于对照组，其mRNA和蛋白的表达量分别下降了65％和89％。免疫双标记显示podocin的分布发生了明显变化：对照组podocin不但分布在胞核的周围，而且在胞浆呈放射性沿着细胞骨架分布，以及主要在胞膜上呈连续性的线状分布；干扰组podocin呈点状分布在胞核周围。(2)干扰组nephrin的荧光强度亦明显减低，其mRNA及蛋白的表达量分别减少了70％和78％。免疫双标记显示nephrin的分布也发生了显著变化：干扰组nephfin亦呈点状分布在胞核周围；在对照组，nephrin和podocin的分布方式相同。(3)干扰组和对照组α-actinin的分布及在mRNA和蛋白水平上的表达量无明显差异，呈细丝状均匀分布于胞质内，亦呈放射性分布于足细胞伸出的突起中。结论 通过RNAi成功地使MPC5的podocin表达下调。Podocin和nephrin分子关系紧密，可能存在着直接的分子间反应；podocin与α-actinin无直接的作用和联系。     

通过基因敲低探讨多个足细胞分子作用及分子间反应

目的 研究足细胞裂孔隔膜(SD)复合体分子nephrin&#65380;podocin和CD2AP,以及足细胞骨架蛋白α-辅肌动蛋白(actinin)-4的作用及分子间反应&#65377;方法 针对nephrin&#65380; podocin&#65380;CD2AP和α-actinin-4 mRNA序列分别设计并构建2个特异RNA干扰质粒-psiRNA-hH1GFPzeo,分别导入小鼠足细胞系MPC5以 “敲低”其表达&#65377;免疫荧光染色观察其分布方式&#65377;半定量RT-PCR和免疫蛋白印迹检测其mRNA和蛋白表达&#65377; 结果 (1) podocin敲低组(siPod966和siPod54):未检测到podocin及nephrin mRNA,其蛋白分别下降了92%&#65380;79%及82%&#65380;67%&#65377;而CD2AP mRNA和蛋白分别增加了62%&#65380;42%及71%&#65380;46%&#65377;α-actinin-4无变化&#65377;(2)nephrin敲低组(siNep492):未检测到nephrin mRNA和蛋白&#65377;而CD2AP mRNA和蛋白分别增加了35%&#65380;48%&#65377;Podocin和α-actinin-4无变化&#65377;(3)CD2AP敲低组(siCda744和siCda21):未检测到CD2AP mRNA,其蛋白分别下降了92%和83%&#65377;Nephrin mRNA和蛋白分别下降了60%&#65380;48%及76%&#65380;72%;而podocin mRNA和蛋白分别增加了38%&#65380;22%及56%&#65380;44%&#65377;Α-actinin-4无变化&#65377;(4)α-actinin-4敲低组(siAct1790和siAct319):α-actinin-4和nephrin 的mRNA分别下降了69%&#65380;58%及64%&#65380;49%;蛋白分别下降了81%和55%以及71%&#65380;64%&#65377;而podocin以及CD2AP mRNA分别增加了50%&#65380;34%及45%&#65380;28%;蛋白分别增加了64%&#65380;46%及65%&#65380;42%&#65377;(5)敲低nephrin&#65380;podocin和CD2AP后,这些表达量降低的分子的分布发生了明显改变,即以核周为主;而相应分子敲低后引起的podocin和CD2AP表达增加,其分布亦主要以核周染色增强为主&#65377;α-actinin-4即使表达降低,分布亦无变化,仍呈细丝状分布于胞质及足细胞伸出的突起中&#65377;结论 (1)在SD复合体分子中,nephrin可能具有相对独立的作用&#65377;(2) α-actinin-4对nephrin&#65380;podocin和CD2AP有直接或间接的作用&#65377;(3)足细胞分子间的作用和联系不总是“一致的”,可能是“单向的”&#65380;也可能是“双向的”&#65377;(4)nephrin&#65380;podocin&#65380;CD2AP和α-actinin-4在足细胞的分布有赖于其表达量的正常及正常的分子间反应&#65377;     

儿童肾病综合征并发血栓8例分析

目的探讨儿童肾病综合征（NS）并发血栓的种类和特点。方法回顾性分析北京大学第一医院儿科1996年7月至2011年5月NS并发血栓患儿的临床资料,对血栓发生年龄、部位、症状、血清学指标和短期预后进行总结。结果 8例NS并发血栓患儿进入分析,其中男7例,女1例,发生血栓的平均年龄为10.6岁。患儿以头痛、呕吐、抽搐、腹痛、血便、肉眼血尿、咯血或胸闷等症状就诊。静脉血栓6例（75%）,见于门静脉、肠系膜上静脉、肺栓塞、肾静脉、下腔静脉、颅内静脉,其中肺栓塞3例,肾静脉血栓2例,颅内静脉血栓2例;动脉血栓2例,左胫前动脉和颈内动脉血栓各1例。3例颅内血栓通过头颅MR I和MRV或MRA确诊,其余部位血栓分别通过血管超声、肺灌注显像和CT检查确诊。7例患儿血清白蛋白〈20 g.L-1,8例患儿血浆纤维蛋白原〉4 g.L-1,7例患儿血D-二聚体增高。8例患儿确诊后均予以肝素、尿激酶、华法林或双嘧达莫等抗凝及溶栓治疗,2例患儿经内科治疗无效分别行截肢和肠切除术。近期随访血栓或相关症状消失或改善。结论 NS患儿肺栓塞发生情况可能并不少于肾静脉血栓。对于10岁左右男性,伴显著低白蛋白血症、高纤维蛋白原血症和血D-二聚体增高者可能更需警惕血栓,应尽早行影像学检查。