Semaphorin 7A及其受体在A549细胞转移中的作用

目的 观察SEMA7A及其受体在A549细胞转移中的作用机制。方法 利用小干扰RNA技术检测SEMA7A及其受体Plexin C1相互作用对A549细胞转移及其相关信号通路的影响。结果 SEMA7A及其受体Plexin C1在A549细胞中表达明显高于正常肺泡上皮细胞;SEMA7A增加了肿瘤细胞转移关键因子CCR-7、MMP-2及MMP-9的表达,但当SEMA7A及其受体Plexin C1沉默表达后,CCR-7、MMP-2及MMP-9的表达出现下降,同时A549细胞转移受到明显抑制。结论 SEMA7A及其受体Plexin C1相互作用促进了A549细胞的转移。     

IκB-ζ高表达在调控脂多糖诱导细胞炎症反应中的作用

目的探讨IκB-ζ在调控脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导细胞炎症反应中的作用。方法利用免疫共沉淀技术筛选人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein enlothelial cells,HUVECs)中IκB-ζ的结合蛋白,采用蛋白质质谱分析方法鉴定IκB-ζ的互作蛋白;应用合成的NfκBiz质粒转染HUVECs并进行LPS干预,Western检测NfκB2(P100,P52)表达量,同时应用q PCR检测炎症因子,如白细胞介素-1(interleukin-1,IL-1)、IL-6及肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)表达。结果蛋白质质谱分析结果显示NfκB2与IκB-ζ结合互作;HUVECs细胞中IκB-ζ过表达并经LPS干预后NfκB2(P100,P52)蛋白表达明显下降。q PCR测试结果显示与LPS组相比IκB-ζ高表达组IL-1及TNF-α表达明显下调(P0.05),而IL-6表达明显上调(P0.05)。结论在LPS干预的HUVECs细胞中过表达IκB-ζ能够与NfκB2(P100,P52)蛋白亚基结合,并对细胞的炎症反应进行调节,降低IL-1及TNF-α的表达同时增加IL-6表达。     

地塞米松通过加强自噬和抑制凋亡减轻海水吸入型肺损伤

目的 探讨海水吸入型肺损伤中自噬过程,以及地塞米松对其干预作用.方法 40只大鼠完全随机分为正常对照组、1、3、6、12 h海水处理组,每组8只.采用气管内滴注海水（3ml/kg）的方法制作海水吸入型急性肺损伤大鼠模型,观察病理变化,检测肺组织湿干比,western blot检测beclin-1的表达变化.体外实验A549细胞分为正常对照组、12 h海水组、地塞米松＋12 h海水组、3-MA＋ 12 h海水组,采用western blot检测beclin-1和bax的表达变化.结果 海水吸入后,大鼠肺部严重损伤,水肿明显,beclin-1随损伤时间延长表达量增加,在海水处理后12 h达到高峰.体外实验中海水刺激增加了beclin-1和bax的表达,然而与海水组相比,地塞米松预处理增加了beclin-1的表达,同时使bax的表达下降.3-MA预处理则效果相反.结论 自噬参与了海水吸入型肺损伤的修复过程,地塞米松能够通过加强自噬并且抑制凋亡减轻肺损伤.     

1,25-二羟维生素D3调节NF-κB通路对减轻海水吸入型急性肺损伤的作用

目的 探讨海水吸入型肺损伤大鼠肺组织中核因子-κB（NF-κB）通路的变化以及1,25-二羟维生素D3对其干预作用.方法 32只大鼠完全随机分为空白对照组、海水处理组、VitD3预处理组和地塞米松处理组,每组8只.采用气管内滴注海水（3 ml/kg）的方法制作海水吸入型急性肺损伤大鼠模型,观察肺部病理变化,用ELISA法检测肺组织中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白介素-1β（IL-1β）的含量,Western blot检测磷酸化NF-κB的表达变化,免疫荧光观察A549细胞NF-κB核转移情况.结果 海水吸入4h后,大鼠肺部损伤明显,TNF-α和IL-1β的含量增高,NF-κB磷酸化以及核转移增多;1,25-二羟维生素D3预处理显著减轻了海水吸入导致的急性肺损伤,减少了炎症因子的释放,并且抑制了NF-κB磷酸化以及核转移.结论 NF-κB通路参与了海水吸入型肺损伤的发生发展,1,25-二.羟维生素D3能够通过抑制NF-κB信号通路减轻肺损伤.     

西安市3所三级甲等医院医护人员院内突发事件应对能力及影响因素分析

目的：了解西安市医护人员对院内突发事件应对救护能力及影响因素,为医院开展针对性的院内应急事件教育和指导提供依据。方法 采用一般情况调查表,突发事件应对能力问卷,对西安市3 所三级甲等医院的240名医护人员进行调查。结果 医护人员院内应急事件相关知识掌握情况较为一般,总分及格率为75.8%。测试总分在性别、工作性质、工作年限和工作医院性质方面的差异无统计学意义（P>0.05）,在学历层次、科室类别、应急事件经历和院内应急事件教育经历方面差异有统计学意义（P<0.05）。结论 我国目前医院院内应急事件教育体系不够完善,医护人员院内应急事件应对知识和技能水平有待提高,医院可以开展多种形式的教育和培训,以提高医护人员处理院内应急事件的能力。     

一种改良大鼠骨髓间充质干细胞培养方法

目的建立大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)的分离、改良培养、纯化方法,并进行细胞形态学观察、表面标志物鉴定及多向分化能力检测。方法通过改良全骨髓贴壁法对4周龄SD雄性大鼠脱颈处死,无菌条件下分离出骨髓进行原代培养、消化传代培养及纯化。对BMSCs进行形态学观察,收获第四代BMSCs进行流式细胞仪检测其细胞表面标记物CD90、CD29、CD34、CD45的表达率及向成脂方向诱导分化。结果 BMSCs的原代培养形态学观察可见骨髓细胞接种于培养皿后,细胞呈圆型,大小不一,悬浮于培养液中。24 h后部分细胞开始贴壁,呈圆形、梭形或多角形。通过换液去除未贴壁的杂质细胞,可见短梭形、星形细胞分散贴壁生长,四五天可见放射状排列的细胞集落,伸出长短不一、粗细不均的突起,梭形细胞为主,胞浆丰富,胞核大、核仁清晰。7~8 d细胞呈集落生长,融合80%~90%,呈漩涡状,同向排列,9~10 d细胞排列紧密,逐渐融合成片。传代培养可见消化传代后,传代细胞24 h完全贴壁生长。细胞形态均一,呈梭形生长,细胞生长旺盛。四至五天可传代1次。可稳定连续传代7代以上,细胞形态及生长速度未见明显变化。BMSCs表面标记物的表达通过流式细胞仪检测结果显示,培养的第4代大鼠BMSCs均一表达CD90,CD29,阳性率分别为96.9%,96.6%;而CD34,CD45,呈阴性,阳性率分别为0.395%,7.56%。BMSCs加入成脂诱导剂后18 d,诱导而成的脂肪细胞累积脂质,脂滴变大,合并呈串珠状,经油红O染色呈鲜红色。结论与传统全骨髓贴壁法相比,改良后的全骨髓贴壁法操作步骤简单,降低离心对细胞的损害,减少了污染机会,节省经费,且分离的BMSCs细胞活性高,可大量分离、纯化、扩增,所获细胞具有间充质干细胞的一般生物学特性,经诱导培养后具有多向分化潜能。可为组织器官缺损性疾病、恶性肿瘤等的治疗和组织工程提供充足的种子细胞来源,具有重要的现实意义。     

乙酰化白藜芦醇对脂多糖诱导急性肺损伤中微循环修复作用机制探究

目的观察脂多糖(LPS)诱导急性肺损伤大鼠肺组织中微循环的变化,探讨乙酰化白藜芦醇对其干预作用及机制。方法 32只SD大鼠随机分为空白对照组、LPS处理组、乙酰化白藜芦醇预处理组和白藜芦醇预处理组,每组8只。采用气管内滴注LPS(5 mg/kg)的方法制作急性肺损伤动物模型,观察病理变化、肺组织湿/干重比值,用伊文思蓝法检测肺微血管通透性,用酶联免疫吸附试验法检测肺组织中肿瘤坏死因子α和白细胞介素1β的含量,用蛋白质印迹法检测细胞骨架重构相关蛋白FAK、cofilin的表达变化,免疫荧光观察肺微血管内皮细胞单层细胞间隙改变情况。结果 LPS干预4 h后,大鼠肺部损伤明显,肿瘤坏死因子α和白细胞介素1β的含量增高,肺湿/干重比值及通透性明显增加,FAK-cofilin通路明显激活,肺微血管内皮单层细胞间隙明显增加;乙酰化白藜芦醇预处理显著减轻了LPS导致的急性肺损伤,减少了炎症因子的释放,并且抑制了FAK-cofilin通路的激活及肺微血管内皮单层细胞间隙的增加。结论肺微循环的改变参与了LPS诱导肺损伤的发生发展,乙酰化白藜芦醇能够通过抑制FAK-cofilin通路减轻肺损伤。