抗P-21激活的磷酸化蛋白激酶5多克隆抗体的制备及其在牙胚细胞研究中的应用

目的 克隆PAK5-N端基因并诱导其表达,进行多克隆抗体制备,为研究其在牙胚细胞中的生物学功能奠定基础。方法 根据人全长PAK5 cDNA序列．设计引物;利用PCR技术．以PAK5全长cDNA为模板扩增PAK5-N端基因,将扩增产物克隆至pGEX-4T-1载体中,经EcoRI／XhoI双酶切后进行重组质粒鉴定,DNA测序。以硫代半乳糖苷诱导其在大肠杆菌BL21中表达。利用GST融合蛋白纯化系统进行蛋白纯化,通过免疫家兔制备多克隆抗体,并在牙胚细胞中进行了初步研究。结果和结论 成功克隆了PAK5-N端基因．在E-coli中表达了PAK5-NT,并纯化了GST融合蛋白,制备了PAK5特异性抗体。Western blotting表明PAK5在牙胚细胞中过度表达,为其在口腔细胞中的生物学功能研究提供了依据。     

细胞分裂周期相关蛋白7通过增强细胞增殖和干性促进人乳腺癌进程

目的 探讨细胞分裂周期相关蛋白7（CDCA7）在人类乳腺癌中的相关功能及潜在的作用机制。方法 通过癌症和肿瘤基因图谱（TCGA）数据库分析检索出不同乳腺癌亚型差异表达基因,找到在基底型乳腺癌中高表达基因,在这些基因中找到CDCA7,通过临床患者的相关标本做免疫组织化学分析,确定其研究意义,进而建立CDCA7稳转细胞系,通过集落形成实验、成球实验及流式细胞术分析研究其在乳腺癌中的功能,最后通过Real-time PCR及Western blotting实验分析其在乳腺癌中的分子机制。 结果 数据库和免疫组织化学结果均显示,CDCA7在基底型乳腺癌细胞中表达高于其他亚型,高表达的CDCA7预示乳腺癌患者不良预后。在luminal细胞系中稳定地过表达CDCA7后,细胞表现出更强的增殖能力,进入分裂期的细胞明显增多,而凋亡细胞显著减少。同时流式细胞术分析表明,过表达CDCA7的细胞表现出了干细胞标记(CD133, 乙醛脱氢酶)上调。Real-time PCR 和Western blotting结果提示,CDCA7能够上调β-连环蛋白（β-catenin）表达,以此影响Wnt信号通路,并影响细胞增殖和干性。结论 CDCA7作为一个促瘤基因,能够通过依赖β-catenin以及Wnt信号通路的方式来诱导luminal乳腺癌细胞向basal-like亚型转化的能力。     

靶向抑制存活素基因对大肠癌细胞SW80侵袭和转移的实验研究

目的 构建靶向存活素(survivin)基因的短发夹干扰RNA(shRNA)表达载体,导入人大肠癌细胞SW480中,研究靶向抑制survivin基因对SW480细胞侵袭和转移的影响.方法 根据siRNA设计原则,在survivin序列中选取设计含19个核苷酸(19 nt)的靶序列,间以9个核苷酸的茎环序列,两端分别加上对应的酶切位点,形成shRNA的DNA模板并克隆到shRNA表达载体pRNAT-U6.1/Neo中,获得靶向抑制survivin基因的sihNA表达载体pRNAT-U6.1/Neo-survivin;采用Lipofectamine 2000TM转染试剂将干扰质粒pRNAT-U6.1/Neo-survivin导入到大肠癌细胞SW480中;用Western blotting从蛋白水平检测干扰效果;分别采用肿瘤侵袭粘附实验和明胶酶谱分析法检测pRNAT-U6.1/Neo-survivin对SW480细胞的侵袭和转移潜能的影响.结果 Survivin基因的蛋白表达均得到显著抑制;沉默SW480的survivin基因可以显著抑制SW480细胞的侵袭和转移潜能,而且survivin基因表达被抑制后,SW480细胞分泌基质金属蛋白酶明显减少.结论 Survivin基因可能在SW480的侵袭和转移潜能中起重要作用,沉默SW480的survivin基因可以显著抑制其侵袭、转移和基质金属蛋白酶分泌,因而survivin影响SW480的侵袭和转移可能与调控基质金属蛋白酶分泌密切相关.     

T_7噬菌体RNA聚合酶启动子控制人表皮生长因子在E．coli中的诱导性表达

Ｔ＿７噬菌体ＲＮＡ聚合酶启动子控制人表皮生长因子在Ｅ．ｃｏｌｉ中的诱导性表达王允玲，张宏权，周廷冲，王会信，柳川（军事医学科学院基础医学研究所）Ｔ＿７噬菌体ＲＮＡ聚合酶启动子是一个非常强的可诱导性启动子。通过用ＩＰＴＧ诱导整合于Ｅ．ｃｏｌｉＪＭ１０９...     

人转化生长因子β1在COS-7细胞中的表达

转化生长因子β1(TGFβ1)是一种多功能的细胞生长因子,它几乎参与了体内所有的病理和生理过程,同时还在创伤愈合、肿瘤抑制、免疫调节、神经营养等多方面具有广泛的应用前景。TGFβ1的研究具有十分重要的理论和应用意义。我们在完成了对TGFβ1cDNA的克隆和鉴定之后,对其在哺乳动物细胞COS-7中的表达做了进一步的研究。     

转录因子HOXA5在乳腺癌细胞中的下游信号通路

目的 探究转录因子HOXA5在乳腺癌进展中的作用。方法 构建过表达HOXA5的稳定转染BT549和SUM159细胞系, 在稳转BT549细胞系中利用Transwell检测细胞的转移能力;Western blotting检测上皮-间质转化（EMT）相关蛋白表达水平的变化;平板克隆实验检测细胞的增殖能力;转录组测序技术（RNA-seq）进一步分析HOXA5的调控基因,利用软件Cluster 3.0,Tree View和DAVID生物信息数据库（DAVID Bioinformatics Resources）以及Enrichr分析京都基因与基因组百科全书（KEGG）信号通路,绘制热图（heatmap）。 结果 BT549细胞系中,稳定转染HOXA5后的实验组细胞迁移能力显著降低(P<0.001),且上皮标志物 E-cadherin蛋白表达水平显著上调,间质标志物 N-cadherin, Twist1、Slug蛋白表达水平显著下调;平板克隆结果表明,实验组形成的克隆数目明显减少(P<0.05),克隆大小明显降低。 结论 HOXA5通过促进细胞由间质向上皮转化,抑制乳腺癌细胞迁移,并且抑制细胞增殖;HOXA5通过调节糖脂代谢途径调节癌细胞增殖,并且还通过调节细胞运动和黏附相关的基因抑制肿瘤细胞的迁移,通过肿瘤坏死因子（TNF）信号通路发挥抗肿瘤作用。总之,转录因子HOXA5对乳腺癌的发展和恶化起着显著的抑制作用。     

紧密连接蛋白claudin-1基因的克隆和大肠癌细胞表达载体的构建

目的 研究claudin-1在大肠癌中的作用,构建包含claudin-1基因编码区域的重组质粒.方法 从人类大肠癌细胞株SW620用Trizol提取总RNA,经逆转录聚合酶链式反应获得DNA,限制性内切酶进行酶切、T4连接酶进行连接:将PCR产物插入绿色荧光蛋白pEGFP-C1载体,然后转染进人人类大肠癌细胞株SW480.结果 重组质粒经限制性内切酶酶切鉴定和DNA序列分析,显示序列正确,在SW480中主要为膜表达.结论 成功构建了claudin-1/pEGFP-C1重组质粒,并能在人类大肠癌细胞中表达.     

子宫动脉上行支结扎术治疗剖宫产术中大出血16例

目的探讨子宫动脉上行支结扎术治疗剖宫产术中大出血的临床疗效以及在阿尔及利亚患者中的应用。方法对2007-2008年4月阿尔及利亚赛义达省妇产科医院16例剖宫产术中大出血患者采用子宫动脉上行支结扎术治疗。对其治疗效果及并发症进行观察及随访。结果16例患者均在术后7—9d痊愈出院,无晚期产后出血及并发症产生。结论子宫动脉上行支结扎术是救治剖宫产术中大出血的安全、简便、有效的措施,既保留了子宫功能,又不影响月经周期。     

运用FQ RT-PCR和Western blot检测Claudin-1在人类大肠癌细胞株的表达

目的:探讨密连接蛋白Claudin-1与人类大肠癌进展的关系.方法:采用实时荧光定量RT-PCR(FQ RT-PCR)和Western blot,检测Claudin-1在3株不同分期人类大肠癌细胞株中的表达.结果:Claudin-1在大肠癌Dukes'type C期细胞株SW620强表达,Dukes'type B期细胞株SW480次之,Dukes'type A 期细胞株SW1116最弱.结论:Claudin-1在人类大肠癌细胞株中有表达,其表达量与大肠癌分期有关.     

整合素相互作用蛋白Kindlin家族的生物学功能研究进展

整合素相互作用蛋白Kindlin是一种新型的黏着斑蛋白,是进化上高度保守的含有FERM结构域的蛋白家族,目前已知有3个家族成员Kindlin-1、Kindlin-2和Kindlin-3。近年来研究表明,Kindlin家族不仅与整合素活化和多种遗传性疾病有关,而且作为重要的信号分子参与了肿瘤的发生发展过程。我们将从Kindlin的结构特征、组织分布及生物学功能的研究进展作一综述。