外泌体应用于创伤性脑损伤诊断及治疗的研究进展

创伤性脑损伤（TBI）是常见的致残和死亡原因,已经成为世界性的公共卫生问题。当前对于TBI的诊断主要依赖于完整的病史、体格检查和影像学检查,传统的实验室检测很少发挥作用。外泌体作为细胞分泌的囊泡,含有大量亲代细胞的信息物质,是细胞间通讯的重要组成部分。得益于其穿过血脑屏障（BBB）的能力,外泌体用于TBI的诊断具有非常大的潜力。当前用于TBI的主要治疗方式包括外科手术、康复训练和有限的自发功能恢复,尚无明确有效药物治疗方案。越来越多的研究证明,外泌体能够调节TBI后炎症,促进神经、血管再生和维持血脑屏障完整性,从而改善TBI预后。该文旨在对外泌体应用于TBI诊断及治疗的最新研究进展进行综述。     

RIPK3过表达对mTOR及其相关基因转录的调控作用

目的探索受体相互作用蛋白激酶3(receptor-interacting protein kinase 3,RIPK3)的下游信号通路。方法向实验组SH-SY5Y细胞内转染pCMV6-RIPK3质粒上调细胞内RIPK3的表达水平,对照组细胞转染相应的空载质粒。通过Western blot检测细胞内RIPK3的表达水平。3-(4,5-二甲基噻唑)[3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl),MTT]实验获得2组细胞增殖曲线确定外源性RIPK3在细胞内具有的生物学活性。通过RNAseq检测2组细胞基因转录差异,并在生物通路分析(ingenuity pathway analysis,IPA)数据库中进行数据分析,获得RIPK3的下游信号通路及其中的关键分子哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)。采用微滴式数字化PCR(droplet digital PCR,ddPCR)对mTOR转录水平的差异进行验证。结果质粒DNA整合到细胞基因组内,Western blot提示外源性RIPK3在实验组细胞内稳定表达,MTT结果证明其在细胞内能够抑制细胞增殖。RNAseq及IPA分析结果提示过表达RIPK3能够导致mTOR转录水平发生上调,并对其下游的基因,包括固醇反应结合蛋白(sterol-response binding proteins,SREBPs)、p70核糖体S6蛋白激酶(p70ribosomal S6protein kinases,S6K)、真核生物起始因子4E结合蛋白(eukaryotic initiation factor 4E-binding proteins,4E-BPs)和ULK(unc-51-like kinase)激酶复合体的转录具有明显的调节作用。ddPCR实验结果中mTOR表达改变趋势与RNAseq基本一致。结论 RIPK3能够调控mTOR及其下游信号通路中SREBPs、S6K、4E-BPs和ULK基因转录水平,进而在神经系统生长发育和疾病进展中发挥重要作用。     

SH-SY5Y 细胞中过表达 RIPK3对 ZFP36基因转录的影响

摘要： 目的 探讨 SH-SY5Y 细胞中受体相互作用蛋白激酶-3 （RIPK3） 下游信号通路及其中的关键信号分子的作用。方法 通过质粒转染的方式在实验组 SH-SY5Y 细胞内表达外源性 RIPK3 蛋白, 将转染空载质粒载体 SH- SY5Y 细胞作为对照组。通过观察质粒所携带的绿色荧光蛋白 （GFP） 在细胞中的表达情况以验证转染结果, Western blot 对外源性 RIPK3 表达进行验证。MTT 法检测细胞增殖活性, 观察过表达 RIPK3 对细胞活性的影响, 以确认其在细胞内是否具有生物活性。运用转录组测序技术 （RNAseq） 分别检测 2 组细胞内基因转录丰度并应用 Ingenuity Pathway Analysis （IPA） 数据库进行分析, 获得 RIPK3 下游信号通路及关键分子。通过微滴式数字化 PCR （ddPCR） 对部分 RNAseq 结果进行验证。结果 外源性 RIPK3 在细胞内具有生物活性, 能够抑制 SH-SY5Y 细胞的增殖。 RNAseq 数据经 IPA 分析后得出锌指蛋白 36 （ZFP36） 为 RIPK3 下游效应分子, 其相关效应分子包括血管内皮生长因子 （VEGF）、 人脱帽酶 2 （DCP2）、 脑源性神经营养因子 （BDNF）、 肿瘤坏死因子 （TNF） 的转录丰度也发生了相应的变化。结论 RIPK3 能够参与对 ZFP36 以及与其相关效应分子的转录调控, 进而在神经系统的发育、 炎症和肿瘤发生等生理、 病理过程中发挥重要作用。     

经络弹拨法治疗急性腰扭伤110例

近年来,笔者用经络弹拨及取穴点拨法治疗急性腰扭伤,在临床上取得了较为满意的效果,现将有关资料报告如下。1 临床资料患者110例,其中男性56例,女性54例;11～20岁4例,21～30岁 32例,31～40岁 38例,41～50岁 4例,51～60岁 8例,61～70岁 12例,71岁以上 12例。2 治疗方法令患者面对医生站立,患侧手按住腰部最痛点,医生以右手拇食二指点拨患者健侧手背上之腰痛穴2～3分钟,同时令患者以最痛势活动,至痛感缓解时止;令患者保持原姿势,医生点拨患者前臂上之扭伤穴,顺逆时针各20～30次,点拨同时令患者以痛势转动腰部,直至痛感缓解;令患者俯卧,以双手依次点拨患者双侧涌泉穴、昆仑穴、太溪穴、承山穴、委中穴、殷门     

RIPK3基因转染的 SH-SY5Y 细胞中 HIF-1α基因及其信号通路相关基因表达变化

目的观察受体相互作用蛋白激酶3(RIPK3)基因转染的神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y中低氧诱导因子1α(HIF-1α)mRNA及其信号通路相关基因表达变化。方法构建表达RIPK3基因的p CMV6-AC-GFP质粒(重组质粒),培养SH-SY5Y细胞,分为实验组及对照组,分别转染重组质粒和空载质粒。采用Western blotting法检测细胞中的RIPK3蛋白,分别于培养8、14、20、26、32、38 h后,通过MTT实验检测细胞增殖情况(OD值)。采用转录组测序技术(RNAseq)及Ingenuity Pathway Analysis(IPA)软件检测并筛选RIPK3-HIF1α下游信号通路中的关键基因。采用微滴式数字PCR(dd PCR)检测两组细胞中的HIF-1αmRNA。结果实验组细胞中RIPK3蛋白相对表达量(0.806±0.097 5)高于对照组(0.455±0.088 6),P<0.05。随培养时间延长,实验组细胞增殖受到抑制。实验组细胞中HIF-1αmRNA相对表达量(0.015 43±0.003 47)低于对照组(0.046 28±0.010 26),P<0.05。在HIF-1α为核心的相互作用关系网络中,筛选出关键分子泛素缀合酶样蛋白(UBC)、希佩尔-林道蛋白(VHL)、转录延伸因子B多肽1(TCEB1)、血管内皮生长因子A(VEGFA)。结论 RIPK3基因转染SH-SY5Y后,细胞中HIF-1αmRNA表达下调,同时HIF-1α信号通路相关基因(UBC、VHL、TCEB1、VEGFA)的表达水平受到影响。     

经络弹拨法治疗急性腰扭伤55例

急性腰扭伤是多发病常见病,多发生在从事体力劳动的青壮年及中年人,一般由负重时肌肉过度踡缩或过度牵拉引起,俗称“闪腰岔气”。腰在人体中起着枢纽的作用,身体的各种活动都需要腰的配合,因此,引起腰部扭伤的机会也较多。近年来,我根据祖国医学“通则不痛,痛者不通”理论利用经络弹拨法治疗急性腰扭伤取得了满意的效果。