SH-SY5Y 细胞中过表达 RIPK3对 ZFP36基因转录的影响

摘要： 目的 探讨 SH-SY5Y 细胞中受体相互作用蛋白激酶-3 （RIPK3） 下游信号通路及其中的关键信号分子的作用。方法 通过质粒转染的方式在实验组 SH-SY5Y 细胞内表达外源性 RIPK3 蛋白, 将转染空载质粒载体 SH- SY5Y 细胞作为对照组。通过观察质粒所携带的绿色荧光蛋白 （GFP） 在细胞中的表达情况以验证转染结果, Western blot 对外源性 RIPK3 表达进行验证。MTT 法检测细胞增殖活性, 观察过表达 RIPK3 对细胞活性的影响, 以确认其在细胞内是否具有生物活性。运用转录组测序技术 （RNAseq） 分别检测 2 组细胞内基因转录丰度并应用 Ingenuity Pathway Analysis （IPA） 数据库进行分析, 获得 RIPK3 下游信号通路及关键分子。通过微滴式数字化 PCR （ddPCR） 对部分 RNAseq 结果进行验证。结果 外源性 RIPK3 在细胞内具有生物活性, 能够抑制 SH-SY5Y 细胞的增殖。 RNAseq 数据经 IPA 分析后得出锌指蛋白 36 （ZFP36） 为 RIPK3 下游效应分子, 其相关效应分子包括血管内皮生长因子 （VEGF）、 人脱帽酶 2 （DCP2）、 脑源性神经营养因子 （BDNF）、 肿瘤坏死因子 （TNF） 的转录丰度也发生了相应的变化。结论 RIPK3 能够参与对 ZFP36 以及与其相关效应分子的转录调控, 进而在神经系统的发育、 炎症和肿瘤发生等生理、 病理过程中发挥重要作用。     

基于CiteSpace中医药治疗脑出血科学知识图谱分析※

目的 基于CiteSpace对中医药治疗脑出血的相关文献进行可视化分析,探讨中医药在治疗脑出血领域的现状、热点及未来发展趋势。方法 检索2011年1月1日—2021年12月31日中国知网数据库（CNKI）中收录的中医药治疗脑出血相关文献,运用CiteSpace软件对文献的作者、机构及关键词进行共现分析、突现分析及聚类分析,绘制相关科学知识图谱。结果 共纳入文献493篇,该领域文献的年发文量总体呈上升趋势,主要核心研究团队有刘远新团队、兰志刚团队、刘旭团队及赵海滨团队等,研究机构主要以陕西中医药大学、长春中医药大学附属医院及南京中医药大学等为核心。关键词分析显示,高频关键词有针灸、中药治疗、康复、临床疗效、活血化瘀等,成为目前研究热点;生活质量、针灸康复及安全性是未来研究趋势。结论 中医药治疗脑出血研究领域发展良好,但影响力不足,针灸、中药治疗、康复及生活质量是现阶段研究的热点与前沿。     

RIPK3基因转染的 SH-SY5Y 细胞中 HIF-1α基因及其信号通路相关基因表达变化

目的观察受体相互作用蛋白激酶3(RIPK3)基因转染的神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y中低氧诱导因子1α(HIF-1α)mRNA及其信号通路相关基因表达变化。方法构建表达RIPK3基因的p CMV6-AC-GFP质粒(重组质粒),培养SH-SY5Y细胞,分为实验组及对照组,分别转染重组质粒和空载质粒。采用Western blotting法检测细胞中的RIPK3蛋白,分别于培养8、14、20、26、32、38 h后,通过MTT实验检测细胞增殖情况(OD值)。采用转录组测序技术(RNAseq)及Ingenuity Pathway Analysis(IPA)软件检测并筛选RIPK3-HIF1α下游信号通路中的关键基因。采用微滴式数字PCR(dd PCR)检测两组细胞中的HIF-1αmRNA。结果实验组细胞中RIPK3蛋白相对表达量(0.806±0.097 5)高于对照组(0.455±0.088 6),P<0.05。随培养时间延长,实验组细胞增殖受到抑制。实验组细胞中HIF-1αmRNA相对表达量(0.015 43±0.003 47)低于对照组(0.046 28±0.010 26),P<0.05。在HIF-1α为核心的相互作用关系网络中,筛选出关键分子泛素缀合酶样蛋白(UBC)、希佩尔-林道蛋白(VHL)、转录延伸因子B多肽1(TCEB1)、血管内皮生长因子A(VEGFA)。结论 RIPK3基因转染SH-SY5Y后,细胞中HIF-1αmRNA表达下调,同时HIF-1α信号通路相关基因(UBC、VHL、TCEB1、VEGFA)的表达水平受到影响。     

基于网络药理学探讨红景天治疗脑出血的作用机制

目的 运用网络药理学方法探讨红景天治疗脑出血的潜在作用机制。方法 通过TCMID数据库与文献检索收集红景天的化学成分,利用Swiss ADME数据库与Swiss Target Prediction数据库进行有效化合物筛选与靶点预测,通过Gene Cards和OMIM数据库获得脑出血相关靶点,交集法获取红景天—脑出血共同靶点,通过STRING数据库构建蛋白—蛋白相互作用（PPI）网络,利用Cytoscape软件构建红景天成分—靶点互作网络,进行可视化处理,并筛选节点度值较高的关键成分和核心靶点,通过Metascape数据库进行GO功能和KEGG通路富集分析,预测作用机制。结果 筛选出红景天治疗脑出血的有效活性成分32个,作用靶点142个,经分析获得AKT1、VEGFA、EGFR、MAPK3、STAT3、HIF1α、MMP-9、PTGS2等15个核心靶标可能是参与脂质与动脉粥样硬化、神经活性配体—受体相互作用、cGMP-PKG信号通路、p53信号通路及NF-κB信号通路发挥抑制细胞凋亡、调控炎性反应及调节血管生成等作用。结论 红景天通过多种不同成分作用于多个不同靶点,且协同调控多种不同信号...