猪伪狂犬病毒gB基因在大肠杆菌中的分段表达

目的 分段表达伪狂犬病毒( pseudorabies virus,PRV)gB基因,用于PRV疫苗免疫抗体评估试剂盒研究.方法 分析gB抗原表位,设计4对特异性引物,从PRV新疆分离株中扩增gB基因的4个片段,分别命名为gB-1、gB-3、gB-4和gB-5基因,克隆到pGEM-T-easy载体并测序.再将4个gB基因片段融合到pGEX-6P-1原核表达载体中,表达并纯化.Western Blotting进行重组蛋白的抗原性检测.以纯化的重组蛋白为抗原建立间接ELISA方法,检测猪血清临床样品.结果 构建的4种表达质粒均可在大肠杆菌中表达,经SDS-PAGE分析,表达分子量分别为75.05、53.86、49.96和49.72×103Da,其中gB-3、gB-4和gB-5表达量较高,表达产物主要存在于包涵体中.Western Bloting鉴定显示,4种融合蛋白均可被猪伪狂犬阳性血清特异识别.以gB-3、gB-4和gB-5建立的ELISA方法与IDEXX公司的gB-ELISA试剂盒符合率分别为40.9％、81.8％和81.8％.结论 本研究成功表达了PRV的gB-1、gB-3、gB-4和gB-5重组蛋白,gB-3、gB-4和gB-5表达量较高;其中以gB-4和gB-5建立的间接ELISA方法与IDEXX公司的符合率较高.     

诊断一起猪弓形虫和附红细胞体混合感染流行报告

目的对某猪场发病猪群进行诊断。方法通过临床调查、大体剖检、病理组织学观察、血清学和PCR等方法确诊。结果在血涂片中可见附红细胞体和弓形虫滋养体;在肺、肝组织切片中可见大量弓形虫假包囊;应用PCR方法检测弓形虫保守基因,结果为阳性。结论证实该猪场此次发病为猪弓形虫和附红细胞体混合感染。