急性白血病细胞中ID4基因甲基化的PCR定量检测系统的建立及其特异性和敏感性

ID4基因启动子区甲基化发生率在急性白血病中极高,甲基化程度与急性白血病关系密切。因缺少合适的研究方法,其具体的甲基化量化水平与疾病的关系,人们一直缺乏认识。本研究旨在建立ID4甲基化定量PCR体系,同时验证该方法的特异性及敏感性,并初步尝试在初治急性白血病骨髓样本中评估ID4的甲基化水平。首先构建质粒并建立体系标准曲线,分别使用MSP和定量MSP对细胞系样本进行检测,以传统MSP的结果为对照,验证新方法的特异性;按不同比例将甲基化阴性和阳性细胞混合,用甲基化定量PCR扩增验证新方法敏感性。结果表明,本研究成功建立了符合绝对定量要求的标准曲线;通过细胞系验证,MSP结果与定量MSP结果完全一致;同时在甲基化阴性细胞背景下,定量MSP可以稳定的检测到1：10-5水平的ID4甲基化阳性细胞。在急性白血病骨髓样本检测中,定量MSP甲基化阳性检出率高于MSP。结论：本研究成功建立了完整的ID4基因甲基化定量PCR体系,该方法特异性好、敏感性高。     

绿色荧光蛋白标记的报告系统优化K562细胞转染条件的研究

本研究旨在提高基因转染人红白血病细胞株K562的转染效率，同时观察绿色荧光蛋白（GFP）作为报告系统用于转染条件优化的可行性。目的基因以GFP为报告系统，通过脂质体转染及电穿孔两种方式转染K562细胞，荧光显微镜下观察并计算转染效率。结果表明：电转染较脂质体转染K562细胞的效率高，电穿孔转染效率在10％左右，而脂质体转染效率小于1％。结论：电转染较脂质体转染K562细胞的效率高，GFP可作为报告系统优化K562细胞转染条件。     

儿童嗜酸性粒细胞白血病1例报告并文献复习

正嗜酸粒细胞白血病是以高嗜酸细胞为特征的克隆性的细胞遗传学异常病变。嗜酸性粒细胞白血病按形态学分为3种类型:原始细胞型,幼稚细胞型和成熟细胞型。本病发病急,具有急性白血病的临床症状:发热、乏力、贫血、皮肤紫癜,需要排除寄生虫病、过敏性疾病、结缔组织病及其他原因引起的嗜酸粒细胞增多,结合骨髓涂片和活检以及组化检查。慢性型者常     

骨髓形态与遗传检测对骨髓增生异常综合征与巨细胞性贫血鉴别的意义

目的 分析探讨骨髓增生异常综合征（myelodysplastic syndrome,MDS）伴低原始细胞计数患者与巨幼细胞性贫血（megaloblastic anemia,MA）患者鉴别诊断中形态及遗传检测的差异.方法 对2011年1月-2013年6月在我院确诊的33例伴低原始细胞计数的MDS患者及19例MA患者进行临床参数、形态检测分析（骨髓原始细胞计数及病态造血）及遗传检测分析（染色体及基因检测）.结果 伴低原始细胞计数的MDS组较MA组巨核系病态造血更易见（P=0.031）,伴低原始细胞计数的MDS患者中细胞遗传学异常发生率与分子遗传学异常发生率均明显高于MA患者（P=0.000,P=0.000）.结论 联合形态及遗传检测可准确鉴别MDS与MA.     

联合骨髓形态与基因检测在骨髓增生异常综合征与溶血性贫血中的诊断意义

目的：分析形态及遗传检测参数的差异在骨髓增生异常综合征（M DS ）与溶血性贫血（H A ）鉴别诊断中的临床意义。方法选取解放军总医院2011年1月至2013年12月确诊的MDS患者56例,HA患者44例,分析比较其临床一般参数、骨髓形态参数（骨髓原始细胞计数及病态造血）及遗传参数（染色体及基因检测）检测的差异。结果 MDS组与HA组患者的一般临床参数比较,差异无统计学意义（P＞0．05）;而MDS组患者骨髓细胞病态造血较HA组患者更明显,组间比较差异有统计学意义（P＝0．001）,特别是红系及巨核系病态造血;MDS组患者的骨髓原始细胞计数较 HA组更高,比较差异有统计学意义（P＝0．002）;且染色体异常与基因异常更频繁发生于MDS组患者,与HA组比较差异有统计学意义（P＝0．000）。结论 MDS患者与 HA患者的鉴别诊断可以联合形态及遗传检测,达到更加及时、准确的检测目的。     

母细胞性浆细胞样树突细胞肿瘤1例及文献复习

目的 通过病例报道及文献复习,提高对母细胞性浆细胞样树突细胞肿瘤（blastic plasmacytoid dendritic cell neoplasm,BPDCN） 的认识。 方法 报道1 例BPDCN 的临床特征、实验室检查等临床资料,并进行文献复习。 结果 该例BPDCN 临床上以皮肤受累为首发症状,皮损表现为结节、红斑。病理及免疫学特征性标识本病。患者累及骨髓,骨髓细胞形态学检查对疾病诊断予以帮助。 结论 该病侵袭性强,进展较快,且目前尚无有效治疗手段,预后极差。单纯从骨髓细胞形态学很难与其他急性白血病相鉴别,需紧密结合临床,同时辅以病理及免疫分型检查明确诊断,以防漏诊、误诊。     

基于生物信息学分析的人ID4基因启动子表达载体的构建及鉴定

目的:基于生物信息学分析构建人ID4基因启动子表达载体,以其作为研究ID4基因启动子表达调控分析的工作基础.方法:在分析人ID4基因启动子结构和调控元件的基础上,据UCSC基因组生物信息学中人ID4基因转录起始点(TSS)上游启动子区-643 bp及5'非翻译区(5'-UTR) 164 bp序列设计并合成引物,进行PCR扩增;以PCR产物作为模板经巢式PCR扩增了TSS上游启动子区-621 bp片段,将PCR产物回收、纯化后再连接到pGEM-T Easy载体上并转化至DH5α感受态大肠杆菌中构建成pGEM-T Easy-人ID4基因启动子重组质粒.转化产物经半巢式PCR及酶切鉴定,对得到的阳性克隆进行测序.结果与结论:成功构建出含有糖皮质激素受体、cAMP结合蛋白及雌激素受体反应调控元件序列的人ID4基因启动子表达载体.该表达载体的构建为进一步研究人ID4基因的启动子活性及表达调控奠定了基础.     

三种教学模式在骨髓形态诊断教学中的应用分析

目的本文拟探讨LBL、PBL联合CBL教学模式在骨髓形态诊断教学中的分层应用分析。方法选取医院检验医学专业本科实习生共20人,规培及新入职人员等轮转生共18人作为研究对象,采用自身对照方法分为实习组和轮转组。每项内容教学两次,分别采用不同教学方法。理论教学分别采用LBL教学方法和PBL教学方法,实践教学分别采用LBL+CBL教学方法和PBL+CBL教学方法。结果理论成绩表明:实习组学员PBL方法与LBL方法的成绩对比,差异无统计学意义(P0.05);轮转组学员PBL方法的成绩优于LBL方法,差异具有统计学意义(P0.05)。技能成绩表明:两组学员LBL+CBL方法的成绩均好于PBL+CBL方法,差异具有统计学意义(P0.05)。结论LBL、PBL联合CBL教学模式在骨髓形态诊断教学中不能过于追求某一种教学方法,对学生分层教学,对内容分方法教学才能最大程度提升教学相长。     

Sezary综合征1例并文献复习

目的:通过报告1例sezary综合征以及文献复习提高对此病的认识。方法:报告1例sezary综合征,并对国内文献进行总结分析。结果:共26例sezary综合征患者,男性23例占88.5%,中位年龄59.5岁,主要表现为全身红皮病,伴有瘙痒,可出现淋巴结肿大、肝脾肿大。实验室检查发现白细胞升高,外周血中可找到sez-ary细胞。皮肤或淋巴结活检可发现sezary细胞。部分患者经以激素为主的治疗后获得缓解。结论:sezary综合征是一罕见的淋巴瘤,对此病的认识还需提高,国内尚需加强对细胞免疫分型和分子生物学的检测。