热带病研究新进展

一种新型抗疟原虫药物已经被报道 ,代号Ｇ2 5的这种药物可以阻止红内期的疟原虫构建它的细胞壁。在体外和猴 (Ｏｗｌｍｏｎｋｅｙｓ)体内的实验显示它和奎宁相比有显著的活性和相对低的毒性[1] 。第一个对自然感染的恶性疟原虫有明显保护作用的红细胞前期疫苗是ＲＴＳ ,Ｓ。据报道在冈比亚 ,该疫苗与新型佐剂ＡＳＯ2合用 ,对那些免疫不完全的恶性疟原虫感染者部分有效。保护作用是部分而且短时的 ,但是这种疫苗在低度流行区域或低传播季节可能具有潜在的应用价值[2 ] 。ＷＨＯ已将Ｃｏａｒｔｅｍ ,一种青蒿素和非青蒿素混合物 (蒿甲醚 / )的…     

全长cDNA文库的构建和新基因全长cDNA克隆的策略

基因全长cDNA克隆是研究基因功能的前提之一。新基因全长cDNA克隆的方法很多，目前比较可行且应用较多的主要是cDNA库筛选。本主要介绍了近年来比较常用的全长cDNA库的构建及全长cDNA的克隆(包括“电子”基因克隆)的策略和方法及其进展。     

日本血吸虫亲免素基因的扩增及序列分析

[目的]研究日本血吸虫亲免素基因编码序列的结构及进行初步的功能预测.[方法]用5'端和3'端锚定PCR从尾蚴文库中扩增,以获取日本血吸虫中国大陆株亲免素基因完整的开放阅读框(open readingframe,ORF);用生物信息学技术确认其是否为亲免素编码基因并进行结构功能的初步分析和预测.[结果]用5'端和3'端锚定PCR从尾蚴文库中获得了亲免素基因5'端和3'端所缺序列,得到的亲免素基因cDNA的总序列长为1 438 bp,其ORF长1 296 bp,编码431个氨基酸.利用生物信息学技术鉴定其为日本血吸虫亲免素基因的完整cDNA序列.并用RT-PCR从日本血吸虫尾蚴mRNA扩增出亲免素基因的ORF.[结论]成功获得了日本血吸虫亲免素编码基因的全长cDNA,为进一步的功能研究打下了基础.     

主动脉瓣机械瓣置换术后交替脉

报道４例因主动脉瓣关闭不全行主动脉瓣置换术后的患者在术后早期出现脉搏交替现象，此时心电图为整齐的窦性心律，所记录的脉搏图形高低交替，如扪诊桡动脉时则会发现桡动脉搏数为心电图示心率的一半。患者术后均顺利恢复，显示这一现象为一过性的、良性的过程。推测这一现象出现的原因可能是术后早期主动脉瓣不再有回流，因而巨大的左室腔充盈不足，加之左室收缩力尚低，不能在每次收缩时都能射出同等量的血流所致     

人类一条新的类蛋白质二硫键异构酶cDNA的克隆和表达

利用SMART技术构建了人胎脑cDNA文库，通过大规模测序筛选出一条1645bp的人类cDNA。此cDNA含有一个888bp的开放阅读框（ORF），编码一个296个氨基酸的蛋白质，预测分子量34．0KD。与目前数据库中序列比较，该cDNA编码的蛋白质与蛋白质二硫键异构酶的同源性达36％，命名为类蛋白质二硫键异构酶（PDI－L）基因，多组织Northern blot分析显示PDI－L cDNA在心、脑、肝肾等组织中均有表达，该cDNA的读框片段正确插入到改造后的pBV220表达载体中，获得了预期的表达蛋白。     

重组人神经营养因子-4/5蛋白抗三氧化二砷神经毒作用

目的 :初步观察重组人神经营养因子 - 4/ 5 ( h NT- 4/ 5 )蛋白对三氧化二砷毒性的抑制作用。 方法 :利用 h NT- 4/ 5蛋白具有抗神经毒性的特点 ,采用本实验室克隆表达及部分纯化的具有天然 h NT- 4/ 5蛋白生物学活性的重组 h NT- 4/ 5蛋白 ,以不同水平的重组 h NT- 4/ 5蛋白 ( 0～ 10 0μl)与不同浓度的 As2 O3 ( 0～ 16 0μmol/ L )同时加入各组鸡胚前脑神经细胞和 PC12细胞培养液中共同孵育 2 4～ 48小时 ,观察其对染毒鸡胚前脑神经细胞存活和 PC12细胞突起生长的影响作用。 结果 :在鸡胚前脑神经细胞和 PC12细胞中与 As2 O3 共同培养 48小时后 ,对照组与实验组的细胞存活率差异有显著性 ,而且细胞存活率和突起数目随 h NT- 4/ 5浓度增高而提高和增加。 结论 :初步观察到重组 h NT- 4/ 5蛋白具有抑制 As2 O3 的毒性作用 ,为从基因工程途径寻找抗环境毒物因子提供了依据。     

恶性疟原虫pGST—HTl融合表达载体的构建及在大肠杆菌中的高效表达

目的 构建pGST—HT1融合表达载体,并观察其在大肠杆菌中的表达情况。方法 基因扩增,融合表达载体的构建,SDS—PAGE电泳和Western blot分析。结果 对重组质粒进行酶切鉴定证实HT11片段已克隆到pGSTag的EcoRI和Sall位点之间。表达产物经SDS—PAGE电泳后显示在相对分子质量82000处出一条新生蛋白带,与HT1／GST(56／26)融合蛋白大小一致,提示成功表达HT1融合蛋白。Western印迹杂交结果也显示在相对分子质量82000处出现阳性着色条带。结论 本实验成功构建pGST—HTl表达载体,并诱导表达出HTl融合蛋白,为HTl蛋白功能和免疫原性的进一步研究奠定了基础。     

脑胶质瘤患者全长新基因的获得及初步研究

目的 探讨基因芯片技术获取正常成人脑组织与人脑胶质瘤中差异表达的基因,并对其中一条基因进行初步研究。方法 抽提正常成人脑组织与人脑胶质瘤组织中的mRNA来制备探针,经杂交、洗涤后,通过计算机观察两者表达谱的差异情况,对507E08克隆子进行了Northern印迹、原位杂交、生物信息学分析和染色体定位。结果 通过4次基因芯片筛选,获得15条与胶质瘤相关的新基因,经Northern印迹证实507E08基因在人正常脑组织中低表达,而在人脑胶质瘤中高表达。原位杂交得到相同的结果。BLASTn和BLASTx分析显示,507E08基因为全长新基因,长度为2002bp,共编码203个氨基酸。本基因命名为人核糖体蛋白L14．22。该基因定位于14号染色体上D14S1066和D14S265Marker之间。结论 用基因芯片筛选正常脑组织与人脑胶质瘤差异表达的基因,具有样品用量少,高质量,高速度,高敏感等特性。507E08基因可能是与人脑胶质瘤形成有关的一条全长新基因。     

基因芯片在恶性胶质瘤研究中的应用

胶质瘤是一种恶性程度极高、侵袭性极强的肿瘤,临床治疗极为困难。目前肿瘤的基因治疗仍存在较多的理论和技术问题,主要原因在于未能从分子水平阐明胶质瘤的发生、发展及转移过程中基因的表达调控机制,因而,筛选恶性胶质瘤差异表达基因及寻找肿瘤相关基因显得尤为必要。基因芯片是最新发展起来的可应用于高效、快速的大规模筛选肿瘤相关基因的技术,将对肿瘤的分子病理分型和临床治疗、预后判断起到推动和促进作用。本文对基因芯     

微矩阵基因芯片筛选喉鳞癌相关基因的研究

目的：应用基因微矩阵方法筛选喉鳞癌相关基因。方法：按一步法抽提喉鳞癌和对照喉正常组织的总ＤＮＡ并纯化ｍＲＮＡ;将４０９６种人类基因ＰＣＲ产物用ＣａｒｔｅｓｉａｎＰｉｘｓｙｓ７５００点样仪按微矩阵排列点样于化学涂层的载玻片上,制成基因芯片;将等量的对照组织和喉鳞癌组织ｍＲＮＡ分别逆转录合成荧光分子掺入的ｃＮＤＡ－链做探针,混合后杂交上述基因芯片,经严格洗片后用ＳｃａｎＡｒｒａｙ３０００扫描仪扫描芯片