山东省淄博市淄川区淡色库蚊病原携带现况调查

【目的】了解山东省淄博市淄川区淡色库蚊(Culex pipiens pallens)病原携带现况。【方法】在2017—2018年蚊虫活动高峰期采集淄川区淡色库蚊,通过RT-PCR扩增甲病毒属、黄病毒属、布尼亚病毒属和辽宁病毒目标片段及测序,检测蚊虫所携带的病毒种类及数量,利用Excel软件PooledInfRate v4统计程序通过最大似然法估计蚊虫带毒率,利用MEGA7.0软件对所得病毒NS5基因和E基因核酸序列与Genbank中已知库蚊黄病毒参考毒株进行系统发生树构建,分析确定病毒的基因型。【结果】从3组淡色库蚊(ZCB10_A22_2、ZCB11_A23_2、ZCC2_A26_2)中扩增得到库蚊黄病毒,蚊媒活动高峰期蚊虫带毒率为5.04‰(95%CI:1.35‰～13.78‰),未检测到甲病毒属、布尼亚病毒属和辽宁病毒。NS5基因系统发育分析发现3组病毒与分离自上海的病毒株(MG602497.1)遗传关系最近,相似度为96.83%～97.23%;E基因系统发育分析发现3组病毒与分离自日本东京的病毒株(AB262759.2、AB377213.1)遗传关系最近,相似度为97.55%～97.72%。病毒分型为Ⅰ型库蚊黄病毒。【结论】淄川区淡色库蚊携带库蚊黄病毒,应持续开展蚊虫携带病原体监测。     

公共环境治理与蚊媒控制

目的了解山东省淄博市淄川区淡色库蚊(Culex pipiens pallens)病原携带现况。方法在2017—2018年蚊虫活动高峰期采集淄川区淡色库蚊,通过RT-PCR扩增甲病毒属、黄病毒属、布尼亚病毒属和辽宁病毒目标片段及测序,检测蚊虫所携带的病毒种类及数量,利用Excel软件PooledInfRate v4统计程序通过最大似然法估计蚊虫带毒率,利用MEGA7.0软件对所得病毒NS5基因和E基因核酸序列与Genbank中已知库蚊黄病毒参考毒株进行系统发生树构建,分析确定病毒的基因型。结果从3组淡色库蚊(ZCB10_ A22_ 2、ZCB11_ A23_ 2、ZCC2_ A26_ 2)中扩增得到库蚊黄病毒,蚊媒活动高峰期蚊虫带毒率为5.04‰(95%CI：1.35‰~13.78‰),未检测到甲病毒属、布尼亚病毒属和辽宁病毒。NS5基因系统发育分析发现3组病毒与分离自上海的病毒株(MG602497.1)遗传关系最近,相似度为96.83%~97.23%;E基因系统发育分析发现3组病毒与分离自日本东京的病毒株(AB262759.2、AB377213.1)遗传关系最近,相似度为97.55%~97.72%。病毒分型为Ⅰ型库蚊黄病毒。结论淄川区淡色库蚊携带库蚊黄病毒,应持续开展蚊虫携带病原体监测。     

广州管圆线虫感染小管福寿螺相关基因定量分析及 α-tubulin基因组织表达分析

目的　探究小管福寿螺感染广州管圆线虫后部分基因表达情况,初步了解广州管圆线虫与其中间宿主小管福寿螺之间的相互作用关系,为防治广州管圆线虫病提供基础数据。方法　取含有广州管圆线虫Ⅰ期幼虫的大鼠粪便喂食福寿螺,分别于感染后1、10、20 d各取3～5只小管福寿螺,采集其血淋巴、肝胰腺、肾脏、肠道、头足和鳃组织,以未感染的小管福寿螺为空白对照组,提取不同感染时期小管福寿螺各组织总RNA,逆转录为cDNA。基于前期转录组测序结果,挑选10个涉及免疫防御、信号转导、细胞生长和代谢、应激反应等方面的基因,对小管福寿螺感染广州管圆线虫1、10、20 d的血淋巴进行基因荧光定量表达分析,并对α?微管蛋白（α?tubulin）基因在感染广州管圆线虫后的福寿螺肝胰腺、肾脏、头足部、肠道、鳃组织中的表达水平进行分析。结果　与空白对照组相比,CELA1基因在感染广州管圆线虫后1、10、20 d的福寿螺中表达量上调（t = 12.32、23.51、34.92,P均 < 0.05）,且表达量随感染时间延长而上升;GST基因表达量在感染后1 d为空白对照组的（7.26 ± 1.80）倍,在感染后10、20 d表达水平低于空白对照组（t = 23.89、19.83,P均 < 0.05）;ferritin基因在感染后10 d较空白对照组显著上调（t = 32.76,P < 0.05）。CRT基因表达水平在感染后1、10、20 d均较空白对照组上调（t = 7.23、5.78、6.32,P均 < 0.05）。α?tubulin基因在小管福寿螺肝胰腺组织中的表达水平最高（F = 17.58,P < 0.05）;在小管福寿螺感染广州管圆线虫后,该基因在各组织中的表达量均有不同程度变化,其表达量以肝胰腺组织中下调最为明显（P均 < 0.05）。结论　小管福寿螺感染广州管圆线虫后,血淋巴中多个基因表达水平发生改变,α?tubulin基因表达水平在多个组织中受到抑制。该研究为深入阐明小管福寿螺和广州管圆线虫的相互作用关系奠定了基础。     

广州管圆线虫感染小管福寿螺相关基因定量分析及 α-tubulin基因组织表达分析

目的　探究小管福寿螺感染广州管圆线虫后部分基因表达情况，初步了解广州管圆线虫与其中间宿主小管福寿螺之间的相互作用关系，为防治广州管圆线虫病提供基础数据。方法　取含有广州管圆线虫Ⅰ期幼虫的大鼠粪便喂食福寿螺，分别于感染后1、10、20 d各取3～5只小管福寿螺，采集其血淋巴、肝胰腺、肾脏、肠道、头足和鳃组织，以未感染的小管福寿螺为空白对照组，提取不同感染时期小管福寿螺各组织总RNA，逆转录为cDNA。基于前期转录组测序结果，挑选10个涉及免疫防御、信号转导、细胞生长和代谢、应激反应等方面的基因，对小管福寿螺感染广州管圆线虫1、10、20 d的血淋巴进行基因荧光定量表达分析，并对α?微管蛋白（α?tubulin）基因在感染广州管圆线虫后的福寿螺肝胰腺、肾脏、头足部、肠道、鳃组织中的表达水平进行分析。结果　与空白对照组相比，CELA1基因在感染广州管圆线虫后1、10、20 d的福寿螺中表达量上调（t = 12.32、23.51、34.92，P均 < 0.05），且表达量随感染时间延长而上升；GST基因表达量在感染后1 d为空白对照组的（7.26 ± 1.80）倍，在感染后10、20 d表达水平低于空白对照组（t = 23.89、19.83，P均 < 0.05）；ferritin基因在感染后10 d较空白对照组显著上调（t = 32.76，P < 0.05）。CRT基因表达水平在感染后1、10、20 d均较空白对照组上调（t = 7.23、5.78、6.32，P均 < 0.05）。α?tubulin基因在小管福寿螺肝胰腺组织中的表达水平最高（F = 17.58，P < 0.05）；在小管福寿螺感染广州管圆线虫后，该基因在各组织中的表达量均有不同程度变化，其表达量以肝胰腺组织中下调最为明显（P均 < 0.05）。结论　小管福寿螺感染广州管圆线虫后，血淋巴中多个基因表达水平发生改变，α?tubulin基因表达水平在多个组织中受到抑制。该研究为深入阐明小管福寿螺和广州管圆线虫的相互作用关系奠定了基础。     

浙江省杭州市入侵生物福寿螺种群遗传学研究

目的　对浙江省杭州市西湖区入侵生物福寿螺的分布现状及遗传标记进行分析，了解该地区福寿螺的扩散趋势。方法　2017年在杭州市西湖区各种水体（如湖泊、河流、湿地）及沿岸陆地选择5个采样点，现场采集福寿螺标本，对采集的标本进行形态学鉴定。同时取成螺足部肌肉组织提取总DNA进行COI基因扩增，并进行单倍型多样性、核酸多样性分析。此外，对GenBank中的福寿螺单倍型及本研究获得的单倍型进行系统进化树分析，以了解其近缘福寿螺。结果　在杭州市西湖区池塘、河流、湿地等生境均发现福寿螺。根据形态特征，采集的标本初步鉴定为福寿螺。从上述福寿螺DNA样本中共获得16条序列，属于3个单倍型，分别为Hap1、Hap2、Hap3。单倍型中Hap1、Hap3频率较高，Hap2频率相对较低。以上表明本次采集的标本包括小管福寿螺和斑点福寿螺两种。Hap1与来自阿根廷及中国广东省和香港特别行政区的小管福寿螺具有较近的亲缘关系，Hap2与来自阿根廷、日本、中国广东省广州市的小管福寿螺具有较近的亲缘关系，Hap3与来自阿根廷、巴西的斑点福寿螺具有较近的亲缘关系。结论　杭州市西湖区存在小管福寿螺和斑点福寿螺。斑点福寿螺扩散至西湖区可能是由多次引入导致或随水流扩散蔓延而致。     

山东省淄博市淄川区淡色库蚊kdr等位基因突变研究

目的　了解山东省淄博市淄川区淡色库蚊（Culex pipiens pallens）季节消长趋势及蚊虫击倒抗性（Knockdown resistance, kdr）相关钠通道基因多态性分布特征。方法　于2017–2018年蚊媒活动高峰期，使用诱蚊灯法对山东省淄博市淄川区进行蚊虫种群和密度调查，提取淡色库蚊DNA，通过PCR检测kdr等位基因突变类型和频率。结果　在山东省淄博市淄川区共捕获830只蚊虫，包括淡色库蚊、骚扰阿蚊、白纹伊蚊、刺扰伊蚊、中华按蚊和三带喙库蚊6种，其中淡色库蚊占83.13%，密度为12.32只/（台·夜）；淡色库蚊全年密度监测曲线呈双峰趋势，高峰出现在6月和9月。在kdr基因1 014位点共检测发现5种kdr等位基因类型，包括TTA（75.71%）、TTT（10.00%）、CTA（5.71%）、TCA（4.29%）、TTC（4.29%），同时发现2种核苷酸非同义突变，即亮氨酸（L1014）突变为苯丙氨酸（L1014F）、丝氨酸（L1014S）。罗村镇、太河镇两地淡色库蚊kdr基因突变频率分别为10.53%、40.63%，差异具有统计学意义（[χ2] = 8.559，P = 0.003）。结论　淡色库蚊为山东省淄博市淄川区优势蚊种。本研究首次在淡色库蚊中检测发现CTA、TTC两种kdr等位基因突变，kdr基因型呈多态性。     

黄连素对胰岛素抵抗3T3- L1脂肪细胞脂联素、瘦素、TNF-α和IL-6的影响

目的探讨黄连素对胰岛素抵抗(IR)3T3-L1脂肪细胞脂联素、瘦素、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)蛋白表达的影响,分析黄连素改善IR的分子机制。方法将3T3-L1脂肪细胞随机分为对照组、IR组、黄连素组,应用地塞米松诱导细胞IR,黄连素组同时加入黄连素。采用葡萄糖氧化酶法测定3组细胞上清液葡萄糖消耗量,观察黄连素对脂肪细胞葡萄糖摄取的影响;应用免疫印迹试验测定脂肪细胞脂联素、瘦素蛋白水平变化;应用酶联免疫吸附实验检测脂肪细胞TNF-α和IL-6蛋白水平变化。结果与对照组比较,IR组脂联素蛋白表达水平明显下降(P<0.05),瘦素、TNF-α和IL-6蛋白表达水平升高;经黄连素干预后,脂联素蛋白表达水平有一定升高,瘦素、TNF-α和IL-6蛋白表达水平降低,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论黄连素可能通过增加脂联素蛋白分泌,减少瘦素、TNF-α和IL-6蛋白水平而改善IR。