家蝇几丁质酶基因的鉴定与表达分析

目的 从基因家族的角度对家蝇几丁质酶进行鉴定与分析,初步探讨其潜在的生物学功能。方法 采用生物信息学方法分析家蝇几丁质酶基因的结构、组成及蛋白的理化特性,并构建分子系统树;通过qPCR检测8个基因的时空表达情况和4个基因在3种浓度的20E处理下的表达变化。结果 共鉴定20个家蝇几丁质酶基因,N-J树划分为8组;不同基因的外显子数量及结构域组成存在差异性;催化结构域具备昆虫几丁质酶高保守序列;相对分子质量为(26.663～270.602)×10³,pI为5.02～10.28。MdCht2、MdCht5、MdCht7和MdCht10在蛹期显著性高表达;MdCht4、MdCht8、MdCht9和MdIDGF7主要在幼虫期高表达;Ⅱ龄幼虫的8种几丁质酶基因呈组织特异性表达,其中在马氏管和肠组织中MdCht4显著性高表达。MdCht4、MdCht5、MdCht7和MdCht10对蜕皮激素20E的刺激呈正向应答,注射后8h和12h时的应激表达量与20E的浓度相关。结论 家蝇丁质酶基因呈组织特异性表达,部分几丁质酶基因对蜕皮激素20E的刺激呈正向应答,本文可为家蝇几丁质酶的功能...     

家蝇天蚕素Cec4的原核表达与纯化北大核心CSCD

目的构建家蝇天蚕素(Cecropin)Cec4原核表达质粒,表达及纯化Cec4蛋白。方法从家蝇cDNA文库中筛选家蝇天蚕素基因Cec4,设计并合成特异性引物,PCR扩增Cec4基因,连接克隆载体后转入DH5α感受态细胞,通过重组子鉴定及测序完成目的基因的克隆。用限制性内切酶BamHI和HindⅢ双酶切目的基因和质粒,构建GST表达载体pGEX 4T-1-Cec4,转化到大肠埃希菌BL-21中,利用IPTG诱导表达重组Cec4蛋白,经亲和层析纯化后进行SDS-PAGE电泳分析。结果 PCR扩增获得的Cec4基因全长为192 bp,连接到表达载体pGEX 4T-1获得重组质粒pGEX 4T-1-Cec4,转化大肠埃希菌BL-21后经30℃、0.6 mmol/L的IPTG诱导18 h,表达相对分子质量约为26×10~3上清表达的融合蛋白,亲和层析纯化后的蛋白浓度为0.117 mg/ml。结论成功构建重组质粒pGEX 4T-1-Cec4并表达和纯化获得Cec4蛋白,为其进一步研究奠定了实验基础。     

CM球帽附着体义齿修复多数牙缺失的临床效果评价

目的：探讨CM球帽附着体义齿修复多数牙缺失的临床效果。方法：收集双颌多数牙缺失、仅余留2-6颗天然牙的患者20例,随访6-24个月,询问患者对义齿的主观感受、咀嚼效率、义齿固位和稳定性,摄X线全景片,了解义齿、基牙和牙周情况。结果：患者普遍认为义齿易适应、美观、固位稳定性好、咀嚼有力。15例曾使用过传统可摘局部义齿的患者对比两种义齿,明显感觉CM球帽附着体义齿更加舒适、美观、稳定。复查X线片示CM球帽附着体义齿修复后各基牙牙周膜正常,牙槽骨无明显吸收。结论：CM球帽附着体义齿修复多数牙缺失的牙列缺损临床效果良好。