检测结核抗体IgM在结核病早期诊断中的应用

[目的]基于多表位结核分枝杆菌嵌合抗原,建立抗结核抗体IgM检测试剂,并探讨在结核病早期诊断中意义。[方法]克隆表达多表位结核分枝杆菌嵌合抗原包被酶联板,抗人IgM单抗标记HRP,建立间接免疫酶联法检测结核抗体IgM,结核抗体IgG同时检测51例结核病人血清样品,两者检测结果进行比较。[结果]51例结核病人血清抗IgG、IgM抗体分别检测率为70．58％（36／51）,43．13％（22／51）,其中10例结核抗体IgG阴性,IgM抗体为阳性。46例健康人血清样品IgM抗体检测2例阳性,特异性95．7％（2／46）。[结论]结核抗体IgM检测在结核病早期诊断中具有一定意义,可作为结核抗体IgG的补充实验,抗IgG、IgM抗体同时检测可提高检测的灵敏度。     

接种甲型H1N1流感疫苗献血者血清中血凝素IgG抗体的检测

目的研制甲型H1N1流感(甲型流感)血凝素(HA)IgG抗体(抗-HAIgG)检测试剂,并用于对献血人群中甲型流感疫苗(甲流疫苗)接种者的抗-HAIgG检测。方法克隆表达甲型流感HA表位抗原(18-243aa),制备出酶联免疫吸附法(ELISA)抗-HA试剂,并对106份甲型流感流行前的献血者血清(甲型流感前组)、97份接种甲流疫苗后的献血者血清(接种甲流疫苗组)做抗-HAIgG检测。结果甲型流感前组:4例抗-HAIgG为阳性,102例阴性,阳性率为3.77%(4/106);甲流疫苗组:78例抗-HAIgG为阳性,19例阴性,阳性率为80.41%(78/97)。结论ELISA法检测甲型流感抗-HAIgG试剂具有较高的特异性、灵敏度和安全性,其在献血人群中的甲型H1N1病毒感染的流行病学调查、疫苗免疫血浆的筛选方面,具有一定的应用价值。     

型别特异性丙型肝炎病毒嵌合抗原在血清分型中的应用

目的克隆表达型别特异性丙型肝炎病毒HCV 1b、2a嵌合抗原,并用于HCV血清分型检测。方法分别对HCV 1b、2a的C区和NS4区进行表位预测,选取优势表位序列连接后,于PGEX-4T-2载体中克隆表达嵌合的HCV 1b、2a抗原,应用竞争抑制酶联法对44份HCV 1b和18份2a血清进行血清分型检测。结果 62例血清样品中50例能分型,其中1b型34例,2a型16例,其分型率为80.6%(50/62),与基因型的符合率为90.0%(45/50)。结论丙型肝炎病毒HCV 1b、2a嵌合抗原用于HCV的血清分型检测,具有较高的准确率和分型率,可用于HCV血清分型检测。     

丙型肝炎病毒非结构区 3(NS3)Ⅰ、Ⅱ型血清反应性的比较研究

目的研究丙型肝炎病毒(HCV)非结构区3(NS3)Ⅰ型、Ⅱ型血清反应性.方法利用表达载体PBVIL1对HCV全长NS3区Ⅰ型、Ⅱ型抗原表位进行克隆表达,经纯化获得电泳纯的抗原.经酶联免疫吸附(ELISA)的方法检测丙型肝炎179份总抗体可疑阳性血清,再用NS3区Ⅰ、Ⅱ型抗原进行相应抗体检测.结果通过测定HCV-NS3区Ⅰ型、Ⅱ型抗体,179份HCV-NS3区1型阳性检出105份,HCV-NS3区Ⅱ型阳性检出95例.结论重组表达的HCV-NS3 Ⅰ型、Ⅱ型抗原对丙型肝炎病毒血清反应略有不同.二者具有一定的互补性.     

白介素-15突变体在大肠杆菌中的克隆表达及鉴定

目的 :构建两株IL 15末端缺失突变体以研究其N、C端对其功能的影响。方法 :以pBV2 2 0为载体 ,在大肠杆菌中进行表达。表达产物以包涵体形式存在 ,经过SDS PAGE纯化 ,复性 ,以CTLL 2增殖实验检测野生型及突变体的生物活性。结果 :N端缺失突变体失去了增殖活性 ,而C端缺失突变体保持了对CTLL 2的生长刺激活性     

丙型肝炎病毒优势表位抗原不同嵌合表达蛋白的血清反应性研究

目的采用含HCV不同优势表位抗原进行连接表达,对20份血清进行对比检测,探讨血清反应性.方法构建原核融合表达载体pBVIL-1,精选出HCV主要表位抗原插入表达载体在E.coli中表达,纯化后的融合抗原包被酶联板,用ELISA方法进行测定.结果不同抗原组合连接(HCV NS4-Core、NS4-Core-NS3、NS4-Core-NS5AB-NS3)对血清的反应性不同.结论含有多个抗原表位的嵌合抗原,能提高检测的灵敏度.     

人C-反应蛋白的提取、纯化和测定

C-反应蛋白(CRP)是一种经典的急性时相的血浆蛋白质。正常健康人血清中CRP含量极低(1～3μg/ml),而在各种炎症(感染)、组织损伤,恶性肿瘤、心肌梗塞等情况下,在数小时内即急剧上升,超过正常值达数十至数百倍之巨。当病情缓解时又能迅速恢复正常。CRP浓度的变化虽仅反映了疾病的非特异性变化,但在临床上对疾病的诊断、鉴别诊断、治疗和转归均有重要的参考意义。因而近年来在国内、外又引起了人们极大的兴趣和重视。CRP的分离提纯方法,文献报道很多,有硫胺划分后C多糖(CPS)沉淀法,DEAE-纤维素离子交换法,用CRP的配基如磷     

人外周血淋巴细胞表面SRBC受体的研究 Ⅳ.人和猪SRBC受体的比较研究

人和猪的胸腺和外周血淋巴细胞都能和SRBC形成E-玫瑰花。如SRBC是以同样的配体和上述细胞结合,那末在上述细胞的表面应具有同样的SRBC受体。去年我们用亲和层析法提取人血清中SRBC受体,在PAGE上虽呈一条区带,但其中尚含有不     

人ZnT8抗原在1型糖尿病诊断中的初步应用

目的构建人锌转运子ZnT8基因N末端、C末端和N-C融合区段的原核表达载体,诱导表达获得重组蛋白,并初步验证各抗原在1型糖尿病ZnT8自身抗体检测中的价值。方法应用RT-PCR方法调取目的基因,构建相应的原核表达质粒,转化大肠杆菌E.coli HB101,诱导表达获得纯化重组蛋白,并作为抗原包被酶联板,初步建立检测ZnT8自身抗体的ELISA方法 ,评价各基因片段在1型糖尿病诊断中的价值。结果获得了3种可被1型糖尿病患者血清识别的重组人ZnT8抗原区段,其中C末端区段ZnT8（268-369aa）与其它两个片段相比具有更高的检测敏感性和特异性,成为首选的抗原区段。结论所选重组人ZnT8（268-369aa）抗原区段具有良好的抗原性,可作为1型糖尿病患者辅助诊断试剂的候选抗原。     

基于化学发光肠道病毒71型IgM抗体检测试剂的研制及初步应用

目的在肠道病毒71型(EV71)重组外壳蛋白VP1的基础上建立以化学发光为基础的IgM抗体检测技术,并与普通TMB显色酶联免疫吸附法比较,评价其临床应用前景。方法采用抗IgM单克隆抗体及辣根酶标记的重组VP1抗原,在此基础上建立EV71-IgM捕获法化学发光检测技术,并对比化学发光检测技术与普通酶联检测技术在45份EV71抗体阳性和30份阴性血清中的反应情况。结果化学发光法、普通酶联免疫吸附法、市售EV71-IgM检测试剂分别能与38份、19份、26份EV71抗体阳性血清发生阳性反应,灵敏度分别为84.4%、42.2%和57.8%;化学发光法灵敏度显著高于其他两种,差异有统计学意义(P<0.05);3种检测方法与阴性血清均无阳性反应。结论在EV71-VP1重组抗原的基础上建立的EV71-IgM捕获法化学发光检测技术具有很高的灵敏度,并有很好的临床应用前景。