粉防己碱对酮康唑抗近平滑念珠菌复合体的体外增效活性研究

目的 探讨粉防己碱在体外对酮康唑抗近平滑念珠菌复合体有无增效作用.方法 参照美国临床和实验室标准协会(CLSI)推荐的M27-A3方案,采用棋盘式微量稀释法测定酮康唑单独及联合粉防己碱抗21株近平滑念珠菌复合体临床株抗真菌活性,结合部分抑制浓度指数(FICI)对结果进行评价;以甲基四氮盐(XTT)法分别测定不同时间点药物作用的效果,绘制时间杀菌曲线,动态观察药物体外抗近平滑念珠菌复合体活性.结果 粉防己碱与酮康唑单独作用于21株近平滑念珠菌复合体菌株的最低抑菌浓度分别是32～64 mg/L和0.031 25～2 mg/L,两药联合时最低抑菌浓度分别降至2 ～8 mg/L和0.008～0.25 mg/L,FICI值为0.09 ～ 0.5;时间杀菌曲线表明,与酮康唑单用组和粉防己碱单用组相比,酮康唑联合粉防己碱组真菌生长延迟明显.结论 粉防己碱在体外对酮康唑抗近平滑念珠菌复合体有明显的增效作用.     

以棋盘法测定汉防己甲素联合伏立康唑的体外抗烟曲霉活性

【摘要】 目的 探讨汉防己甲素对伏立康唑抗烟曲霉的体外增效活性。 方法 参照美国临床和实验室标准协会（CLSI）推荐的M38-A2方案,采用棋盘式微量液基稀释法测定汉防己甲素联合伏立康唑对21株烟曲霉临床株的抗真菌活性,以吸光度A值测定法判读最低抑菌浓度,并以FICI法评价联合用药的效果,同时以其中的CMCC（F）A.1a株为代表,用等效线图解法验证结果。 结果 汉防己甲素与伏立康唑单独作用于上述烟曲霉临床株的最低抑菌浓度分别为512 μg/ml和0.125 ~ 2 μg/ml,联合用药时的最低抑菌浓度值分别降至8 ~ 128 μg/ml和0.03 ~ 0.5 μg/ml,且终点清晰,“拖尾现象”消失,FICI值为0.13 ~ 0.63,有16株菌表现为协同作用,其余菌株表现为无关作用。CMCC株相应的MIC值等效曲线是凹形,也表明具有协同作用。 结论 汉防己甲素对伏立康唑抗烟曲霉有体外增效活性。     

以棋盘法测定汉防己甲素与伊曲康唑的体外联合抗烟曲霉作用

目的 探讨汉防己甲素在体外对伊曲康唑抗烟曲霉活性是否有增效作用。方法 参照美国临床和实验室标准协会（CLSI）推荐的M38-A2方案,采用棋盘式微量液基稀释法,以21株烟曲霉临床株为研究对象,测定汉防己甲素联合伊曲康唑对其的抗真菌活性,以OD值测定法判读最低抑菌浓度,并以FICI法评价结果,同时以其中的AF46株为代表,用等效线图解法验证结果。结果 汉防己甲素与伊曲康唑单独作用于上述烟曲霉临床株的最低抑菌浓度值分别为256~512 μg/mL、0.125~32 μg/mL,联合用药时的最低抑菌浓度值分别降至8~64 μg/mL、0.03~2 μg/mL,且终点清晰,“拖尾现象”消失,FICI值为0.08~0.38,均表现为显著协同作用。AF46株的等效曲线呈凹形,也表明具有协同作用。结论 汉防己甲素在体外对伊曲康唑抗烟曲霉活性有显著增效作用。     

以棋盘法测定并评价汉防己甲素与酮康唑联合对白念珠菌的体外抗真菌活性

目的 探讨汉防己甲素对酮康唑抗白念珠菌有无增效活性。方法 参照美国临床和实验室标准协会（CLSI）推荐的M27-A3方案,采用棋盘式微量液基稀释法测定汉防己甲素和酮康唑联合对16株同一亲本来源的白念珠菌的体外抗真菌活性。以OD值测定法判读最低抑菌浓度,并以FICI法对联合用药结果进行评价。结果 汉防己甲素与酮康唑单独作用于上述16株白念珠菌的最低抑菌浓度分别为64-128 μg/mL和1-32 μg/mL;两药联合时的最低抑菌浓度值分别降至2-16 μg/mL和0.016-0.5 μg/mL,且终点清晰,“拖尾现象”消失,FICI值为0.033-0.133,均表现为显著协同作用。结论 汉防己甲素在体外对酮康唑抗白念珠菌活性有明显的增效作用。     

汉防己甲素对氟康唑抗白念珠菌生物膜增效活性的初步研究

目的探讨汉防己甲素（tetrandrine,TET）对氟康唑（fluconazole,FLC）抗白念珠菌生物膜是否有增效活性。方法构建白念珠菌生物膜,参照微量稀释法,测定FLC单独及其联合TET对生物膜不同时期的最小抑菌浓度（minimum in-hibitory concentration,MIC）;生物膜重新悬浮后,测定FLC单独及其联合TET对不同浓度菌液的MIC。结果 FLC单独及其联合TET对白念珠菌生物膜最初期（0h）的MIC50值范围分别为0.25～64μg/mL和0.125～16μg/mL（P=0.002）;早期（4h）的MIC50值范围分别为8～256μg/mL和1～64μg/mL（P=0.000）;中期（24h）、成熟期（48h）的MIC50值均〉1024μg/mL。生物膜重新悬浮后,FLC单独及其联合TET对低浓度菌液（终浓度为1×103 CFU/mL）的MIC值范围分别为0.25～64μg/mL和0.125～16μg/mL（P=0.003）,高浓度菌液（终浓度为1×106 CFU/mL）的MIC值均〉64μg/mL。结论汉防己甲素在体外对氟康唑抗白念珠菌生物膜最初期（0h）、早期（4h）有增效活性,对中期（24h）、成熟期（48h）无增效活性;汉防己甲素对氟康唑抗白念珠菌生物膜重新悬浮后的低浓度菌液（终浓度为1×103 CFU/mL）有增效活性,高浓度菌液（终浓度为1×106 CFU/mL）无增效活性。     

汉防己甲素对伊曲康唑、伏立康唑和泊沙康唑抗烟曲霉体外增效活性研究

目的 探讨汉防己甲素(tetrandrine,TET)对伊曲康唑(itraconazole,ITR)、伏立康唑(voriconazole,VRC)和泊沙康唑(posaconazole,PCZ)体外 抗烟曲霉有无增效活性。方法 参照M38-A2方案的微量稀释法,以23株烟曲霉临床株为研究对象,测定TET对其的最大非细胞毒性剂量和ITC、VRC、PCZ单独及联合TET对其的最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentrations,MICs)。结果 TET抗烟曲霉的最大非细胞毒性剂量为 80 μg/mL。 ITC单独及联合TET对烟曲霉的MIC值范围分别为0.5 μg/mL~32 μg/mL 和0.0625 μg/mL~4 μg/mL,差异有统计学意义(P<0.05) ;VRC单独及联合TET 的MIC值范围分别为0.25 μg/mL~2 μg/mL 和0.03125 μg/mL~0.25 μg/mL,差异有统计学意义(P<0.05); PCZ单独及联合TET 的MIC值范围分别为0.125 μg/mL~1 μg/mL 和0.03125 μg/mL~0.25 μg/mL,差异有统计学意义(P<0.05) 。结论 汉防己甲素在体外对伊曲康唑、伏立康唑和泊沙康唑 抗烟曲霉有增效活性。     

白念珠菌CDR1/CDR2和MDR1基因高表达对氧化应激的影响

目的探索白念珠菌CDR1/CDR2和MDR1基因高表达对氧化应激的影响。方法以白念珠菌CDR1/CDR2和MDR1基因高表达株及其亲本株为研究对象,测定过氧化氢(H2O2)对菌株生长的影响。以H2O2建立氧化应激模型,比较各菌株细胞内活性氧(Reactive oxygen species,ROS)、线粒体膜电位(Mitochondrial membrane potential,ΔΨm)、氧化应激相关基因(CAP1和GRP2)和ROS清除相关基因(SOD2和SOD5)转录水平的差异。结果各菌株均在5mmol/L H2O2作用时出现100%生长抑制;H2O2能升高细胞内ROS和降低ΔΨm(P0.05),其中高表达株中两者的变化幅度较亲本株低(P0.05);同时高表达株中CAP1和GRP2基因在转录水平的表达上调以及SOD2和SOD5基因的下调也较亲本株少(P0.05)。结论 CDR1/CDR2和MDR1基因高表达能够降低白念珠菌的氧化应激反应,增强其对氧化应激的适应性。