氯沙坦降低小鼠呼吸机相关性肺损伤及抑制肺组织内小窝蛋白-1及NOX4的表达

目的利用呼吸机过度通气建立小鼠机械性肺损伤模型,以血管紧张素II受体抑制剂氯沙坦进行干预,探讨氯沙坦对机械
通气性肺损伤小鼠肺内小窝蛋白-1及氧化应激相关蛋白的调节。方法36只雄性C57小鼠随机分为对照组、机械通气组、单纯
药物对照组和治疗组,建模完成后分别检测各组小鼠急性肺损伤情况以及相关蛋白的表达和相互作用。结果机械通气组小鼠
肺损伤Smith评分3.3,明显高于对照组（0.4）和单纯药物对照组（0.3）,治疗组Smith评分2.3,较机械通气组明显降低（P<0.05）;
机械通气组小鼠肺组织内小窝蛋白-1 和NOX4 蛋白表达明显高于对照组及单纯药物对照组（P<0.05）,荧光共染可见小窝蛋
白-1及NOX4发生荧光重合,治疗组小鼠肺组织内上述蛋白表达较机械通气组明显降低（P<0.05）,荧光共染提示小窝蛋白-1及
NOX4荧光重合区域较机械通气组减少。结论在机械通气诱导的小鼠急性肺损伤模型中,氯沙坦可缓解机械通气诱导的肺损
伤并抑制小窝蛋白-1及NOX4的表达及相互趋近作用。
     

血管紧张素(1-7)对血管紧张素Ⅱ诱导肝星状细胞表达结缔组织生长因子的抑制作用

目的 探讨血管紧张素(Ang)(1-7)对Ang Ⅱ诱导的肝星状细胞(HSC)表达结缔组织生长因子(CTGF)的抑制作用及其机制.方法 培养人HSC细胞系(LX2细胞),以AngⅡ刺激24h,分别予以AngⅡl型受体阻断剂irbesartan、ROCK抑制剂Y27632预处理lh.设立AngⅡ+ Ang (1-7)处理组,观察Ang (1-7)对Ang Ⅱ的抑制作用;Mas受体拮抗剂A779阻断Mas受体,观察对Ang (1-7)抑制效应的阻断作用.利用Western blot、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和多基因定量检测系统检测RhoA、ROCK2 mRNA、结缔组织生长因子(CTGF)蛋白和mRNA的表达.结果 研究结果显示Ang Ⅱ刺激后,RhoA蛋白(0.87±0.093对比0.337±0.074)、ROCK2mRNA (0.747±0.061对比0.163±0.024)、CTGF mRNA (0.578±0.028对比0.262±0.007)相对表达量与对照组相比显著增高,差异有统计学意义(P值均＜0.01);irbesartan (RhoA蛋白:0.558±0.030对比0.87±0.093 ; ROCK2 mRNA:0.368±0.023对比0.747±0.061 ; CTGFmRNA:0.309±0.019对比0.578±0.028).Y27632(RhoA蛋白:0.564±0.067对比0.87±0.093 ; ROCK2 mRNA:0.218±0.046对比0.747±0.061 ; CTGF mRNA:0.340±0.020对比0.578±0.028)预处理组上述基因或蛋白相对表达量显著减低,差异有统计学意义(P值均＜0.01);Ang (1-7)单独处理组RhoA蛋白(0.449±0.035对比0.337±0.074)及CTGF mRNA(0.256±0.008对比0.262±0.007)与对照组相比无明显改变,差异无统计学意义(P值均＞0.05);但是Ang(1-7)可抑制AngⅡ诱导的上述基因或蛋白表达的增高(RhoA蛋白:0.615 ±0.034对比0.87±0.093;ROCK2 mRNA:0.403 ±0.040对比0.747±0.061; CTGF mRNA:0.265±0.011对比0.578±0.028),差异有统计学意义(P值均＜0.01); Mas受体拮抗剂A779可以阻断Ang (1-7)对AngⅡ的抑制作用(RhoA蛋白:0.929±0.076对比0.615±0.034; ROCK2 mRNA:0.720±0.054对比0.403±0.040; CTGF mRNA:0.568±0.029对比0.265±0.011),差异有统计学意义(P值均＜0.01).结论 AngⅡ通过RhoA-ROCK通路促进人HSC表达CTGF mRNA; Ang (1-7)与其Mas受体结合后对AngⅡ激活的CTGF mRNA的表达具有抑制作用.     

脂多糖通过NOD样受体蛋白3炎症小体通路诱导大鼠急性肝损伤实验研究

目的:探讨脂多糖(LPS)诱导大鼠急性肝损伤的机制.方法:对SD大鼠腹腔注射10 mg/kg LPS 24 h后,比较对照组(3只)与LPS组(3只)大鼠外周血转氨酶水平;取肝组织制片后HE染色观察两组大鼠肝组织有无损伤;免疫组化检测两组大鼠肝组织中NOD样受体蛋白3(NLRP3)与凋亡相关微粒蛋白(ASC)表达情况....     

醛固酮拮抗剂对肝纤维化大鼠NOX4蛋白表达的抑制作用

目的 探讨醛固酮拮抗剂对肝纤维化大鼠NOX4蛋白表达的抑制作用. 方法 体内实验:雄性Wistar大鼠24只,随机分为3组,每组8只.模型组:用四氯化碳(CCl4)油2.5 ml/kg皮下注射,3次/周;安体舒通组:CCl4油注射的同时予以安体舒通20 mg/kg灌胃,1次/d;对照组:用橄榄油皮下注射,于4周后处死实验动物取材.用HE染色观察肝组织形态结构;Masson染色进行METAVIR肝纤维化评分;免疫组织化学法检测NOX4蛋白的表达.体外实验:将大鼠HSC-T6细胞株与不同剂量的醛固酮(10-9、10-7、10-5 mol/L,观察剂量效应)作用不同时间(6、12、24h)以观察时间效应.给予醛固酮(Ald)1μmol/L、依普利酮1μmol/L预处理60min,再给予Ald刺激大鼠HSC-T6细胞,设立阴性对照组.Western blot方法检测NOX4蛋白的表达.采用Oneway ANOVA方差分析法,首先用Levene方法进行方差齐性检验,确定方差齐且整体比较组间差异有统计学意义后进一步做多重比较,多重比较采用LSD法. 结果 CCl4组纤维化程度较对照组明显增高(相对表达量为16.060±0.300比2.471±0.160),两组比较,差异有统计学意义.CCl4+Sp组纤维化程度较CCl4组低(相对表达量为5.761±0.152比16.060±0.300),两组比较,差异有统计学意义.免疫组织化学结果显示,与对照组相比,CCl4组NOX4蛋白表达明显增高(相对表达量为7.231±0.211比1.350±0.252),两组比较,差异有统计学意义.与CCl4组相比,CCl4+Sp组NOX4蛋白表达下降(相对表达量为4.270±0.242比7.231±0.211),两组比较,差异有统计学意义.Ald刺激HSC-T6细胞后NOX4蛋白表达增强,并呈时间、浓度依赖性,在10-5 mol/L浓度刺激24h达到峰值;与对照组相比,Ald组NOX4表达明显增加(相对表达量为0.710±0.011比0.316±0.015),两组比较,差异有统计学意义.与Ald组相比,Ald+依普利酮组NOX4的表达减少(相对表达量为0.615±0.014比0.710土0.011),两组比较,差异有统计学意义.结论 醛固酮拮抗剂通过抑制Ald诱导的氧化应激效应抑制肝纤维化大鼠NOX4蛋白的表达.     

螺内酯对肝纤维化大鼠肝窦血管生成的抑制作用

摘要：目的探讨螺内酯对肝纤维化大鼠肝窦血管生成的抑制作用。方法雄性Wistar 大鼠24 只,随机分为3 组,每组8 只大
鼠。分组如下：假手术组（Sham 组）;胆总管结扎组（BDL 组）,予行胆总管结扎术;螺内酯治疗组（BDL+SP组）,于手术后第2天
给予螺内酯20 mg/kg灌胃处理,1次/d。于4周后取材。Masson三色染色检测胶原和大鼠的肝组织学改变。运用实时荧光定量
聚合酶链反应（Real time-qPCR）检测各组血管内皮生长因子A（VEGF-A）mRNA的表达。运用免疫组织化学技术检测各组血
管性假血友病因子（vWF）的表达。结果BDL+SP组纤维化程度较BDL组低［(2.84±0.44) vs (19.73±3.54), P=0.00］,差异有统
计学意义;免疫组织化学结果显示：BDL组vWF表达较Sham组增高［(3.08±0.17) vs (0.98±0.11), P=0.00］,BDL+SP组较BDL组
表达下降［(1.15±0.09) vs (3.08±0.17), P=0.00］,差异有统计学意义;在BDL组VEGF-A mRNA的表达增加,BDL+SP组则表达
下降［(0.71±0.12) vs (1.75±0.15), P=0.00］,差异有统计学意义;且各分组中VEGF-A mRNA的表达与vWF表达呈现显著正相关
关系（r=0.890, P=0.000）。结论螺内酯通过抑制肝脏VEGF-A mRNA的表达抑制肝窦毛细血管生成。