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本研究应用分子生物学技术 ,构建小鼠 β2 m反义核酸重组荧光蛋白表达载体pEGFP β2 mAN ,经过酶切、PCR鉴定 ,以及序列分析证实克隆的正确性。然后用脂质体转染NIH3T3细胞 ,经过RT PCR及Westernblot检测 ,观察重组质粒对细胞β2 mmRNA和蛋白表达的影响 ,同时在荧光显微镜下直接观察细胞转染的结果。结果证明pEGFP β2 mAN已成功导入NIH3T3细胞中 ,且有效表达 ,在荧光显微镜下可见梭形绿色荧光细胞 ;与同步转染的小鼠 β2 m正、反义核酸表达载体pcDNA3 β2 mSN、pcDNA3 β2 mAN的转染结果一起进行分析 ,转染pcDNA3 β2 mSN细胞的 β2 mmRNA和蛋白表达水平升高 ,而转染pcD NA3 β2 mAN和pEGFP β2 mAN的细胞 β2 mmRNA和蛋白表达水平降低。小鼠 β2 m反义核酸重组荧光蛋白表达载体pEGFP β2 mAN的转染结果显示 :它不但可以降低NIH3T3细胞 β2 m基因的表达 ,而且为观察脂质体转染效果提供了直观、即时的方法 相似文献
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目的分析丁香茄中挥发油的化学成分。方法采用水蒸气蒸馏法提取丁香茄中挥发油,用GC-MS法测定和分析其化学组分。结果共鉴定了19个成分,占总峰面积的96%,按相对峰面积计,其中含亚油酸为62.8%,总脂肪酸和其他酯约占72%。结论丁香茄挥发油的主要成分为脂肪酸,为开发利用丁香茄资源提供了实验依据。 相似文献
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<正>急性子宫内翻是一种罕见而又严重威胁产妇生命的分娩并发症,子宫内翻是指子宫底部向宫腔内陷入,甚至自宫颈翻出。临床上常根据发生的时间及内翻的程度进行分类。按子宫内翻发生时间分为急性、亚急性和慢性。按子宫内翻程度分为一度、二度和三度。急性子宫内翻脱垂,即三度,是子宫内翻程度最重的表现。近代,随着围生期保健三级管理 相似文献
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目的探讨人胚胎干细胞(human embryonic stem cells,hESCs)的体外培养及其特性。方法 hESCs接种于饲养层细胞,培养液为含20%Knockout SR的Knockout DMEM,其中添加10 ng/mL碱性成纤维细胞生长因子(bFGF),通过观察细胞形态、免疫细胞化学技术分析hESCs表面标志分子SSEA-3、SSEA-4、SSEA-1和TRA-1-60的表达,鉴定hESCs的未分化状态;G显带技术分析细胞染色体核型。同时,通过分析hESCs体外形成胚胎体、体内生成畸胎瘤的情况,鉴定hESCs的分化潜能。结果 hESCs在饲养层细胞上呈克隆生长,细胞为二倍体核型。hESCs表达SSEA-3、SSEA-4、以及TRA-1-60细胞表面特征性标志。体内、外分化实验证实hESCs具备多分化潜能。结论 hESCs在体外培养条件下能够保持未分化状态和发育的全能性,为进一步探索hESCs的诱导分化,以及hESCs的应用研究提供可行性保证。 相似文献
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树突细胞融合瘤苗对脐血源性CIK/NK细胞杀伤作用的影响 总被引:2,自引:0,他引:2
目的研究K562、Raji肿瘤细胞树突细胞(DC)融合瘤苗对脐血来源细胞因子诱导的杀伤(CIK)细胞/自然杀伤(NK)细胞杀伤作用的影响。方法诱导脐血单个核细胞成为DC、CIK/NK细胞,通过聚乙二醇将灭活K562和Raji肿瘤细胞株与DC融合形成K562-DC和RajiDC融合瘤苗。实验分为3组:DC融合瘤苗组、灭活肿瘤细胞加DC组、单纯DC组。以MTT法评价各组不同共孵育刺激对CIK/NK细胞杀伤活性的影响。结果使用不同抗原刺激的各组脐血来源CIK/NK细胞对特定肿瘤的杀伤有促进作用,但不具有特异性。在20∶1效靶比时,K562-DC和RajiDC融合瘤苗组对Raji细胞的杀伤率分别为(75.44±4.19)%和(81.33±4.18)%,RajiDC融合瘤苗组对Raji细胞的杀伤率显著高于K562-DC融合瘤苗组(P<0.05);灭活K562+DC和灭活Raji+DC组对Raji细胞的杀伤率分别为(73.12±4.22)%和(80.49±4.27)%,灭活Raji+DC组对Raji细胞的杀伤率显著高于灭活K562+DC组(P<0.01),各组对K562细胞的杀伤率比较差异无统计学意义(P>0.05)。不同效靶比CIK/NK细胞对不同种属的肿瘤细胞株的杀伤率比较,Raji细胞刺激的效果更强些。相同的肿瘤抗原刺激的或经灭活肿瘤细胞加DC刺激的CIK/NK细胞对不同种属的肿瘤细胞杀伤率差异无统计学意义。结论脐血来源的CIK/NK细胞对肿瘤细胞的杀伤为非特异性的 相似文献
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目的探讨体外直接诱导HSF6人胚胎干细胞(humanem bryonic stem cells,hESCs)分化为神经细胞的方法。方法采用直接的方法,在1%血清培养条件下,顺序添加bFGF、RA和Forskolin,诱导HSF6人ESCs分化为神经细胞。结果细胞发生神经样形态学改变,免疫荧光细胞化学分析结果显示,分化细胞表达神经干细胞特异性标志分子——巢蛋白(nestin),以及神经元标志分子——β微管蛋白Ⅲ(neuron-specific class Ⅲ beta-tubulin,TuJ1)。实验组nestin阳性细胞数占(95.2±3.03)%,明显高于未添加诱导因子组的(31.6±4.93)%,差异有统计学意义(P〈0.05)。结论本研究直接诱导hESCs分化为神经细胞,减少了常规经胚胎体(embryoid body,EB)的诱导方法而产生其它胚层细胞的机会,为进一步探索hESCs源性神经细胞的功能,以及为细胞替代治疗提供高纯度的hESCs源性神经细胞奠定了基础。 相似文献
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目的探讨体外直接诱导HSF6人胚胎干细胞(humanem bryonic stem cells,hESCs)分化为神经细胞的方法。方法采用直接的方法,在1%血清培养条件下,顺序添加bFGF、RA和Forskolin,诱导HSF6人ESCs分化为神经细胞。结果细胞发生神经样形态学改变,免疫荧光细胞化学分析结果显示,分化细胞表达神经干细胞特异性标志分子——巢蛋白(nestin),以及神经元标志分子——β微管蛋白Ⅲ(neuron-specific class Ⅲ beta-tubulin,TuJ1)。实验组nestin阳性细胞数占(95.2±3.03)%,明显高于未添加诱导因子组的(31.6±4.93)%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论本研究直接诱导hESCs分化为神经细胞,减少了常规经胚胎体(embryoid body,EB)的诱导方法而产生其它胚层细胞的机会,为进一步探索hESCs源性神经细胞的功能,以及为细胞替代治疗提供高纯度的hESCs源性神经细胞奠定了基础。 相似文献
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