靶向肺癌的紫杉醇长循环脂质体抑瘤作用研究

目的:构建靶向肺癌的紫杉醇长循环纳米脂质体,改善紫杉醇的体内分布,提高其安全性和抑瘤作用。方法:采用固相合成法合成精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(arginine-glycine-aspartic acid,RGD)-6-氨基己酸(ε-amino hexanoic acid,EACA)臂-棕榈酸(palmitate,Pal)复合物(RGD-EACA-Pal)。采用薄膜超声分散法制备空间稳定性紫杉醇脂质体(sterically stabilized liposome of paclitaxel,SSL-PTX)和主动靶向肺癌的空间稳定性紫杉醇脂质体(active lung cancer-targeting sterically stabilized liposome of paclitaxel,T-SSL-PTX),并测定其包封率和物理性状。构建肺腺癌细胞A549的荷瘤裸鼠模型,分别尾静脉注射紫杉醇注射液(商品名为泰素)、SSL-PTX和T-SSL-PTX,分析它们在体内的药代动力学、组织分布及抑瘤作用。另外,分别将昆明小鼠尾静脉注射泰素、SSL-PTX和T-SSL-PTX,观察各药物的最大耐受量(maximum tolerance dose,MTD)。结果:成功构建主动靶向肺癌组织的紫杉醇长循环纳米脂质体,包封率为95%以上,透射电子显微镜下观察其外观基本呈圆整状且均匀分散,SSL-PTX与T-SSL-PTX的粒径分别为(83.4±36.7)nm和(94.7±41.2)nm。药物动力学结果表明,紫杉醇脂质体剂型相比泰素有较好的长循环作用,且T-SSL-PTX和SSL-PTX的药代动力学参数无明显差异。组织分布检测显示,T-SSL-PTX的肿瘤组织靶向效率较SSL-PTX及泰素均有提高,而其他器官中药物分布相对降低。紫杉醇脂质体2个剂型的最大耐受量均高于泰素。体内抑瘤实验结果显示,以相同的紫杉醇剂量给药,T-SSL-PTX相比SSL-PTX及泰素,其抑瘤作用更明显(P<0.05);且T-SSL-PTX以低剂量给药或延长给药间隔,均能达到优于SSL-PTX及泰素的抑瘤作用。结论:本研究构建的靶向肺癌的紫杉醇长循环纳米脂质体能改善紫杉醇传统剂型的药物动力学和组织分布,提高了紫杉醇在体内的安全性和抑瘤作用。     

三氧化二砷对博莱霉素致大鼠肺纤维化的影响及其作用机制

肺泡炎是肺纤维化疾病的发病机制之一，有研究发现诱导肺内炎性细胞凋亡可以减轻博莱霉素A5（BLM-A5）所致大鼠肺泡炎和肺纤维化程度。三氧化二砷（As2O3）可以诱导多系统的多种细胞发生凋亡，但As2O3对肺纤维化疾病是否有作用，目前尚未见报道。本实验目的是探索适当剂量的As2O3能否诱导肺纤维化大鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）中的炎性细胞发生凋亡，从而减轻肺泡炎和肺纤维化。     

三氧化二砷对大鼠肺纤维化模型的干预作用及其机制的探讨

目的观察三氧化二砷(arsenictrioxide,AS2O3)对博莱霉素-A5(bleomycin-A5,BLM-A5)所致大鼠肺纤维化有无治疗作用并探讨其作用机制。方法50只SD大鼠分为空白对照组、肺纤维化模型组和三氧化二砷治疗组。其中对照组10只,气管内给予生理盐水后,连续7天腹腔内注入生理盐水;模型组20只,气管内给予BLM-A5后,连续7天腹腔内注入生理盐水;治疗组20只,气管内给予BLM-A5后连续7天腹腔内注入AS2O3。每组再随机均分成2个亚组,分别于实验第7天、第28天处死。检测以下项目:①支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolarlavagefluid,BALF)经流式细胞仪行细胞分类和炎性细胞凋亡率检测;②ELISA法检测BALF中细胞因子γ-干扰素(interferon-gamma,IFN-γ)的含量。③光镜下观察肺组织肺泡炎和肺纤维化程度;④实验第28天肺组织羟脯氨酸(hydroxyproline,HYP)含量的测定。结果与模型组相比,治疗组:①BALF中中性粒细胞和淋巴细胞百分比总和降低(P<0.05);炎性细胞凋亡率增加(P<0.05);实验第7天组IFN-γ含量降低(P<0.05)。②肺组织炎症和纤维化程度减轻;HYP含量降低(P<0.05)。结论AS2O3能减轻BLM-A5诱导的肺纤维化大鼠肺组织炎症和纤维化程度,作用机制可能与其诱导肺内炎性细胞凋亡有关。     

cRGD-氧化铁纳米粒的构建及应用于核磁共振成像诊断中的动物研究

目的:构建肿瘤靶向的核磁共振成像(magnetic resonance imaging, MRI)阴性造影剂纳米粒,并初步探讨其在肿瘤MRI中的应用.方法:化学共沉淀一步法制备超小型超顺磁性氧化铁(ultrasmall superparamagnetic iron oxide, USPIO)纳米粒.采用化学交联法将含有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(Arg-Gly-Asp, RGD)序列的环形短肽(cyclic RGD, cRGD)与USPIO共价结合,制备具有整合素α靶向作用的超顺磁性造影剂,并对其进行理化性质的检测.采用普鲁士兰染色法检测cRGD-USPIO和USPIO与人肺腺癌A549细胞及人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVECs)的特异性结合能力.建立A549裸鼠移植瘤模型,尾静脉注射USPIO和cRGD-USPIO,行MRI检测,评价cRGD-USPIO对肿瘤MRI信号增强的作用.结果:成功制备获得cRGD-USPIO纳米粒,其核心纳米粒径为5～10 nm,平均粒径为(43.97±10.10)nm,比饱和磁化强度为59.94 A·m~2·kg~(-1).细胞结合实验结果提示,与USPIO组比较,cRGD-USPIO组阳性染色明显增强.动物体内MRI诊断结果显示,与USPIO组比较,cRGD-USPIO组肿瘤信号明显降低(P<0.01).结论:构建的靶向性超顺磁性氧化铁纳米粒可能成为一种新型的、具有肿瘤早期诊断特异性的MRI阴性造影剂.     

手术在ⅢB期肺鳞癌综合治疗中的作用

目的ⅢB期肺鳞癌放化综合治疗已是共识,手术介入是否致临床获益,报道不一,本研究目的是评价手术治疗在综合治疗中的作用,并验证8版TMN分期对其影响。方法将50例患者按治疗方法分为A组:放疗+化疗组(25例)、B组:手术+放化疗组(25例)。采用Kaplan-Meier方法进行生存分析。结果A组中位无进展生存期(Progression-Free Survival,PFS)为7.0月(95%CI 5.239-8.761),而B组手术组中位PFS为12.0月(95%CI 7.934-16.066)。B组的PFS显著高于A组,差异均有统计学意义,P0.01。手术对FPS影响有统计学意义(HR=0.468 P0.01)对于手术组,年龄对PFS有影响因素(HR=2.475,P=0.013)。按照8版新TNM分期,ⅢC期患者中位PFS为9.0月(95%CI 5.893-12.107)低于新分组为ⅢB期的患者中位PFS为10.0月(95%CI 8.490-11.510),但未得出统计学显著性差异。结论ⅢB期鳞癌治疗要以综合治疗为主,手术治疗可使生存受益,并延长无进展生存时间。     

临床病理讨论第93例——“慢性肝病”、反复咳嗽、咳痰

临床资料 患者女性,51岁。因反复咳嗽、咳痰6年余,再次发作2个月于2003年8月12日入上海市肺科医院诊治。患者咳白色黏痰,活动后稍感气促。无畏寒、发热、盗汗、乏力、消瘦等。无胸痛、咯血、头昏、心悸、关节疼痛等。因血清总蛋白及球蛋白升高9年,外院拟诊为“慢性肝病、肝硬化”。血糖     

肿瘤新生血管靶向的顺磁性长循环纳米脂质体的构建

目的 构建一种以肿瘤新生血管为靶向的顺磁性长循环纳米脂质体,并探讨其靶向肿瘤的能力。 方法 设计并采用FMOC（fluorenylmethyloxycarbonyl,FMOC）固相合成法合成RGD10肽（GARYCRGDCFDG）－赖氨酸-甘氨酸-甘氨酸（lysine-glycine-glycine,KGG臂）－棕榈酸（Pal）复合物;采用薄膜超声分散法制备包封MRI（magnetic resonance lmaging,MRI）造影剂GD-DTPA（Gadopentetate Dimeglumine）的血管靶向顺磁性长循环纳米脂质体（neovessel targeted PEGylated Gadopentetate Dimeglumine liposomes,T-PEG-GD LP）和普通顺磁性长循环纳米脂质体（PEGylated Gadopentetate Dimeglumine liposomes,PEG-GD-LP）,采用激光粒度分析仪和透射电子显微镜进行形貌表征测定,超滤离心法测定其包封率,MRI扫描测定其信号强度;为验证T-PEG-GD-LP与肿瘤组织的特异性亲和力,检测了HUVEC、A549细胞对其的摄取能力。结果 透射电子显微镜显示T-PEG-GD-LP、PEG-GD-LP均呈规则的圆形或略呈椭圆形,粒径检测结果显示其平均粒径小于100nm,MRI测定T-PEG-GD-LP信号强度介于GD-DTPA与PEG-GD-LP之间,HUVEC、A549两种细胞对T-PEG-GD-LP的摄取量均高于GD-DTPA和PEG-GD-LP（P<0.05）。结论 构建的肿瘤新生血管靶向顺磁性长循环纳米脂质体具有良好的肿瘤靶向能力,可成为一种新型有效的肿瘤靶向MRI造影剂。     

培美曲塞治疗非小细胞肺癌无症状脑转移临床分析

目的:培美曲塞已被确定为晚期非小细胞肺癌(非鳞癌)的标准用药之一。本研究旨在探讨培美曲塞治疗非小细胞肺癌无症状脑转移的近期疗效和不良反应。方法:回顾性分析2008年11月—2010年12月45例非小细胞肺癌无症状脑转移患者的临床资料,评价疗效和不良反应。结果:所有患者颅内转移灶的疗效:部分缓解17例(37.8%),疾病稳定20例(44.4%),疾病进展8例(17.8%),客观缓解率为37.8%,疾病控制率为82.2%。全身病灶的总体疗效:部分缓解5例(11.1%),疾病稳定16例(35.6%),疾病进展24例(53.3%),客观缓解率为35.6%,疾病控制率为46.6%。颅内转移灶与全身病灶的疾病控制率差异有统计学意义(P=0.006),而客观缓解率差异无统计学意义(P>0.05)。颅内转移灶的无进展生存期为3.87个月,全身病灶的中位无进展生存期为2.27个月,差异有统计学意义(P=0.009)。颅内转移灶的近期疗效与患者年龄、性别、吸烟状况、脑转移灶数目、是否接受放疗等临床特征之间无明显相关性(P>0.05)。未观察到严重不良反应。结论:培美曲塞对于非小细胞肺癌脑转移患者颅内转移灶具有较好的疗效,不良反应较小。     

吉非替尼获得性耐药的非小细胞肺癌细胞株PC9/AB2相关耐药机制研究

目的 探讨吉非替尼获得性耐药的非小细胞肺癌细胞株PC9/AB2的相关耐药机制.方法 体外培养人肺腺癌细胞株PC9并采用N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)诱变和药物筛选建立吉非替尼获得性耐药细胞株PC9/AB2,四甲基偶氮唑盐(MTF)法检测PC9和PC9/AB2细胞对吉非替尼的敏感性,流式细胞仪检测吉非替尼对PC9和PC9/AB2细胞凋亡的影响,抽提基因组DNA,对上皮细胞生长因子受体(EGFR)基因19～21外显子进行聚合酶链反应(PCR)扩增及测序,采用Western blot法检测PC9和PC9/AB2细胞中c-MET和整合素β1蛋白的表达水平.细胞黏附试验和细胞划痕试验检测PC9和PC9/AB2细胞的黏附及迁移能力.结果 (1)MTT和凋亡检测结果表明,PC9/AB2细胞株的半数致死浓度(IC50)为(24.2±5.5)μmol/L,野生型PC9细胞的IC50为(0.04±O.01)μmol/L,与PC9细胞相比,PC9/AB2细胞对吉非替尼的耐受性提高了576倍;在同等剂量的吉非替尼作用下,PC9细胞的凋亡率为38.5%,而PC9/AB2细胞的凋亡率为2.2%.(2)基因测序结果证明,PC9和PC9/AB2细胞均存在19外显子15 bp的碱基缺失,但未发生T790M突变.(3)Western blot检测结果显示,PC9和PC9/AB2细胞中的c-MET蛋白表达水平无明显差异,而整合素β1蛋白表达水平PC9/AB2细胞较PC9细胞升高了2.5倍.(4)细胞黏附试验和划痕实验结果表明,PC9/AB2细胞的黏附和迁移能力均明显高于PC9细胞.结论 整合素β1水平升高及其相关的肿瘤细胞黏附、迁移能力的提高可能与非小细胞肺癌PC9/AB2细胞株EGFR酪氨酸激酶抑制剂耐药相关.     

纳米砷与三氧化二砷的体外细胞毒性比较研究

目的通过比较三氧化二砷与纳米元素砷两种砷制剂在体外对肺腺癌细胞株以及正常小鼠淋巴细胞的影响，对纳米砷制剂的作用进行初步评估。方法将不同浓度的纳米砷或三氧化二砷与肺腺癌细胞株A549或H1299细胞体外作用2d，将不同浓度的纳米砷或三氧化二砷与小鼠脾细胞作用24h，将不同浓度的纳米砷或三氧化二砷加白细胞介素2与小鼠脾细胞作用72h。随后以MTT检测法分别检测各组的杀伤率。结果纳米砷与三氧化二砷对肺腺癌细胞株A549或H1299的杀伤率，在相同摩尔药物浓度下很接近。三氧化二砷与纳米砷对小鼠脾脏淋巴细胞与rIL-2活化的淋巴细胞的毒性作用也相当接近，且三氧化二砷与纳米砷在低浓度1．5umol／L时，其杀伤率巳达40％以上，二者差异无显著性（P〉0．05）。结论纳米元素砷具有较强抗癌活性，但其对正常淋巴细胞的毒性与三氧化二砷相比未见减轻。这对于笔者加深对纳米元素的认识，具有一定的意义。