低浓度雷公藤甲素联合顺铂对肝癌细胞HepG2活性的影响

目的探讨低浓度雷公藤甲素与顺铂联合用药对人肝癌细胞HepG2活性的影响,及其逆转顺铂耐药的可能机制。方法将人肝癌细胞HepG2分为顺铂单用组和雷公藤甲素加顺铂联合用药组。顺铂单用组分别用浓度为0、2.5、5、10、20、40μg/m L的顺铂处理,联合用药组同时联合低浓度雷公藤甲素(12.5ng/m L)处理HepG2。CCK-8法检测HepG2细胞增殖的抑制率;流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞内P糖蛋白的表达。结果顺铂单用组各浓度(0、2.5、5、10、20、40μg/m L)对肝癌细胞HepG2细胞活力24h的抑制率分别为0、(4.0±1.0)%、(9.7±1.1)%、(29.4±2.4)%、(47.5±2.5)%、(62.9±1.2)%,联合用药组24h抑制率分别为(4.7±1.0)%、(37.1±3.1)%、(44.1±3.5)%、(57.9±3.0)%、(66.9±2.0)%、(74.9±2.0)%,两组比较,细胞活力抑制率差异有统计学意义(P0.01);Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡后发现,顺铂单用组(0、5、10、40μg/m L)诱导HepG2肝癌细胞早期凋亡率分别为(4.3±0.3)%、(8.4±0.3)%、(9.6±0.3)%、(32.3±2.0)%,而联合用药组细胞早期凋亡率分别增加至(9.6±0.4)%、(16.2±0.2)%、(23.2±0.5)%、(53.0±3.6%),两组比较,细胞凋亡率差异有统计学意义(P0.01);PE单染检测P糖蛋白后发现,顺铂单用组(0、5、10、40μg/m L)细胞内P糖蛋白表达率分别为(37.3±0.4)%、(34.2±0.5)%、(30.1±1.1)%、(34.2±2.3)%,无明显变化,而联合用药组P糖蛋白的表达率分别降低至(25.0±1.8)%、(18.6±0.7)%、(8.9±0.3)%、(1.8±0.1)%,两组P糖蛋白表达差异有统计学意义(P0.01)。结论雷公藤甲素与顺铂联合用药可以显著抑制人肝癌HepG2的增殖并诱导凋亡,同时调节HepG2的顺铂耐药性,其作用机制可能与P糖蛋白下调相关,从而对肝癌细胞HepG2发挥抗肿瘤作用。     

水飞蓟宾诱导人肝癌细胞HepG2死亡及机制研究

目的：探讨水飞蓟宾对人肝癌细胞HepG2的杀伤作用及其机制。方法不同浓度水飞蓟宾处理HepG2细胞,采用MTT法检测HepG2细胞增殖情况,流式细胞术检测水飞蓟宾诱导HepG2细胞的凋亡情况。利用ROS荧光探针二氢乙啶（DHE）检测水飞蓟宾是否诱导HepG2细胞ROS的产生,并用ROS抑制剂抗坏血酸预处理后检测水飞蓟宾对HepG2的杀伤活性及诱导凋亡的能力。结果水飞蓟宾可显著抑制HepG2细胞的增殖并诱导其发生凋亡。水飞蓟宾处理后HepG2细胞的ROS显著增高（P〈0.05,P〈0.01）,用抗坏血酸预处理后水飞蓟宾对HepG2的增殖抑制作用降低,并抑制水飞蓟宾诱导的凋亡。结论水飞蓟宾通过诱导ROS的产生引起人肝癌细胞发生凋亡。     

基于qRT-PCR检测非小细胞肺癌患者血浆miR-205方法的建立及临床应用

目的建立一种定量检测血浆miR-205的qRT-PCR检测方法,并探讨其在NSCLC早期诊断及预后监测中的临床应用价值。方法针对miR-205的序列,构建qRT-PCR扩增体系。收集27例NSCLC患者术前和术后的血浆以及29例健康人血浆进行miR-205测定,并对受试者行ROC分析。结果本研究建立的qRT-PCR法检测miR-205的灵敏度为1.53×10-9μmol/L,精密度实验CV值均5%。NSCLC患者手术前血浆中miR-205表达水平高于对照组,差异具有统计学意义(P0.05);与术前相比,术后一周血浆中miR-205的表达明显降低,差异有统计学意义(P0.05)。miR-205所得ROC曲线下面积为0.765(95%CI:0.63~0.899),区别NSCLC患者和健康体检者的敏感度为77.8%,特异度为69.2%。结论 NSCLC患者血浆中miR-205的表达情况,可作为NSCLC潜在的生物标志物,本实验建立的血浆miR-205 qRT-PCR检测方法具有良好的精密度和灵敏度,有望成为一种新的有效辅助NSCLC早期诊断及判断预后的方法。     

慢性乙型肝炎患者血清M65和M30水平与肝纤维化分期的关系

目的检测慢性乙型肝炎病毒感染后血清中M65和M30水平与肝脏继发性纤维化病变的关系。方法选择150例慢性乙型肝炎患者和100例健康对照者,检测慢性乙型肝炎患者和健康人群血清M65及M30水平,并对慢性乙型肝炎患者肝脏活检组织进行METAVIR纤维化分级以及TUNEL检测。结果慢性乙型肝炎患者血清M30水平（277±44.5）U/L和M65水平（520±56.7）U/L均显著高于健康对照组M30（95±22.8）U/L,M65（202±45.7）U/L（均P〈0.01）;在慢性乙型肝炎患者中M30及M65水平和肝纤维化有关,它们在血液中的浓度随着患者肝纤维化程度的加深而升高,肝纤维化F2级M30（442±67.9）U/L,M65（707±55.1）U/L;F3级M30（585±51.2）U/L,M65（774±63.2）U/L;F4级M30（611±42.1）U/L,M65（788±59.4）U/L显著高于F0级M30（223±23.1）U/L,M65（433±34.7）U/L和F1级M30（242±41.3）U/L,M65（448±39.4）U/L（均P〈0.05）;慢性乙肝患者肝细胞凋亡指数随着肝纤维化程度的提高而增加,分别为F0级16.3±3.1,F1级16.9±2.8,F2级21.3±3.6,F3级25.9±3.2,F4级28.0±3.7。结论血清M30及M65水平能提示慢性乙型肝炎患者肝纤维化的程度。     

血清同型半胱氨酸水平与高脂血症的相关性研究

目的探讨高脂血症患者血脂水平与血清同型半胱氨酸的相关性。方法选取132名高脂血症患者和130名血脂正常者分别作为病例组和对照组。对两组人群血脂谱主要指标以及叶酸和维生素B12含量进行测定,采用循环酶法检测血清同型半胱氨酸含量。结果高脂血症组和正常对照组血清同型半胱氨酸平均值分别为(16.80±3.41)μmol/L和(10.90±2.10)μmol/L,差异有统计学意义(P<0.01)。高脂血症组血清同型半胱氨酸与TC,LDL-C水平呈正相关(r=0.50,0.37;均P<0.01)。高脂血症组外周血叶酸与维生素B12水平与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论血清同型半胱氨酸可能与高脂血症相关,血清同型半胱氨酸升高对高脂血症患者的动脉粥样硬化的形成和发病可能有一定的作用。     

水飞蓟宾体外对人肝癌细胞株HepG2蛋白表达的影响及临床意义

目的探讨水飞蓟宾在体外对人肝癌细胞Hep G2蛋白表达的影响及临床意义。方法采用MTT法检测不同浓度水飞蓟宾（Silibinin）对Hep G2细胞增殖的影响;采用台盼蓝法检测不同浓度水飞蓟宾对Hep G2细胞的杀伤活性;采用western blot免疫印迹法检测自噬标记蛋白LC3-Ⅱ的表达水平;利用基因沉默技术,转染BNIP3小RNA（siRNA）抑制BNIP3的表达,之后再用MTT法和Western blot法检测水飞蓟宾对Hep G2细胞增殖和自体吞噬的影响。结果随着水飞蓟宾浓度的提高,水飞蓟宾在体外对Hep G2细胞的增殖抑制率和杀伤活性逐渐提高;水飞蓟宾在体外可显著诱导Hep G2细胞LC3-Ⅱ的表达;水飞蓟宾在体外可显著诱导Hep G2细胞BNIP3的表达;转染BNIP3 siRNA后,水飞蓟宾对Hep G2细胞的增殖抑制率25.3±4.0和LC3-Ⅱ表达水平0.35±0.11相比于对照组的增殖抑制率63.1±7.0和LC3-Ⅱ表达水平0.70±0.19显著下降。结论水飞蓟宾通过上调BNIP3的表达诱导人肝癌细胞发生自噬性死亡。