Real-time PCR法用于日本血吸虫感染宿主血清DNA的定量检测及其感染度的评价

目的以日本血吸虫高度重复序列-逆转录转座子SjR2为靶序列,建立TaqMan实时定量PCR法检测宿主血清中的日本血吸虫DNA用于评价感染度。方法以real-timePCR法检测不同感染度的家兔模型血清DNA。结果该法具有高度的敏感性和特异性,可以检测到44．7拷贝的重组质粒DNA。在感染家兔后的3d到7周血清中均能检测到血吸虫DNA,不同感染度早期检测的时间节点及其检测阈值分别为,家兔感染30条尾蚴（EPG=14）需在感染后2周才能检测到目的DNA,其含量为119．03拷贝,感染50条尾蚴（EPG=24）、感染100条尾蚴（EPG=48）则在感染后1周可检测到目的DNA,其含量分别为54．36拷贝和72．24拷贝,在家兔感染200条尾蚴（EPG=97）、感染500条尾蚴（EPG=232）最早在感染后3d即可检测到目的DNA,其含量分别为60．34拷贝和142．47拷贝。日本血吸虫感染宿主血清DNA水平与感染度呈正相关,即血清DNA浓度随感染度的增大而上升。结论本研究所建立的real-timePCR法可定量检测血清DNA动态变化并对日本血吸虫病诊断及感染度的评价具有潜在的应用价值,为日本血吸虫病诊断与疗效考核提供了新方法。     

吡喹酮衍生物抗日本血吸虫生物学效应研究

目的观察32种YCH—II—P系列PZQ衍生物对体外培养的日本血吸虫成虫和童虫活性的影响。方法ICR小鼠感染日本血吸虫尾蚴后第17d及第6周肝门静脉灌注法收集童虫与成虫,分别加不同浓度的化合物于培养液,过夜后（16h）无菌生理盐水洗涤虫体3次,换新鲜培养液继续培养虫体72h,每天置体视显微镜下观察其死亡率及活力降低情况,收集第72h虫体作扫描电镜观察。结果32种YCH—II—P系列PZQ衍生物筛选出P96、P125、P126、P64种有效化合物。其中P96作用浓度为50μmol／L时虫体完全死亡,体外抗日本血吸虫成虫及童虫临界致死浓度均为25μmol／L,SEM显示虫体皮层及抱雌沟内壁损伤严重。结论YCH—II-P系列PZQ衍生物中P96体外具有显著的杀日本血吸虫成虫和童虫作用效应。