转甲状腺素相关淀粉样变的研究进展

在1853年,Virchow首次发现了人体病变组织存有淀粉样变,用碘-硫酸方法能够进行检测.随后研究发现淀粉样变性疾患,是淀粉样前蛋白形成蛋白纤维沉积于细胞间质导致组织细胞核器官功能损害,引起一系列临床疾病.常见有免疫球蛋白轻链相关的淀粉样变性疾病(AL)、Aβ蛋白相关淀粉样变——阿尔茨海默病(AD)、转甲状腺素蛋白相关淀粉样变——老年性系统性淀粉样变( SSA)和家族性淀粉样多发性神经病变(FAP)等.     

淀粉样沉积诊断方法的研究进展

1853年德国科学家Virehow等在尸体解剖组织标本中，经病理染色发现无定形结构成分沉积于细胞间质，外观形态学淀粉样沉积组织失去弹性、颜色变浅。沉积于组织的无定形生化组成能够与碘化物起化学反应，因此命名为淀粉样变（amyloid）。此后很多学者从生物化学成分构成、超微结构、无定形生化组成对组织细胞的毒性作用等方面进行了广泛的研究。现在已经明确，淀粉样沉积形成原因蛋白在外来因素作用下或蛋白自身发生结构变化，形成蛋白纤维并沉积于细胞间质，导致组织细胞损害、功能低下、衰竭，从而引起一系列综合临床症状。病理形态学证明沉积于组织细胞间质的淀粉样沉积生物化学成分为蛋白，超微结构分析发现淀粉样沉积中含有淀粉样蛋白纤维。利用透射电子显微镜、扫描电子显微镜结合免疫标记电子显微镜观察淀粉样蛋白纤维超微结构发现：淀粉样蛋白纤维是以serumamyloidprotein（SAP）为中心，能够形成淀粉样蛋白纤维原因蛋白在外来因素、基因突变，原因蛋白内β-sleatedsheet结构增加，多个β-sleatedsheet部分重合形成微细蛋白纤维，并以SAP为中心进一步形成纤维状结构。另外分析迄今为止能够形成淀粉样沉积蛋白纤维原因蛋白的超级结构，发现的二级结构中β-sleatedsheet结构含量明显增多。     

过氧化修饰与淀粉样沉积形成

淀粉样沉积形成原因蛋白在基因突变、外来因素作用或蛋白自身立体结构发生变化，重合形成蛋白纤维并沉积于细胞间质，导致组织细胞功能低下、损害，而引起一系列综合临床症状。组织细胞间质的淀粉样沉积主要生物化学成分为蛋白质和脂肪。病理形态学结果提示，淀粉样沉积中含有淀粉样沉积蛋白纤维和纤维问质的无形成分主要为脂肪组织。利用透射电子显微镜、扫描电子显微镜结合免疫标记电子显微镜证明，淀粉样沉积蛋白纤维是以serum amyloid protein（SAP）为中心，原因蛋白内部β-sleated sheet结构增加，多个β-sleated sheet部分重合围绕SAP形成纤维状结构。     

荧光素标记靶体异性诊断淀粉样沉积的方法研究

[目的]设计一种能够与淀粉样沉积蛋白纤维特异性结合靶体并且标记荧光素，建立一种特异性、快速诊断淀粉样沉积的方法。[方法]利用刚果红染色结合偏振光确定诊断淀粉样沉积，病理形态学比较荧光素标记靶体与组织病理切片中淀粉样沉积的亲和性；提取FAP患者心脏组织淀粉样沉积蛋白纤维，利用水晶振荡子质量亲和分析法，检测淀粉样沉积蛋白纤维与荧光素标记靶体的亲和能力。[结果]该荧光素标记靶体能够与淀粉样沉积特异的结合；TYR淀粉样沉积蛋白纤维与靶体具有亲和性，并且能够达到最大结合点。[结论]荧光素标记靶体与淀粉样沉积蛋白纤维特异性结合，可能广泛应用淀粉样沉积的特异性诊断。     

TGF-β1对单核细胞来源的树突状细胞表型和功能的影响

目的:研究 TGF-β1对树突状细胞(DC)的分化、成熟及功能影响.方法:应用100万U/L粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素-4(IL-4)7 d诱导单核细胞分化为不成熟DC,加入终浓度20万U/L的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)48 h后获得成熟DC的体外模型,将TGF-β1加入该模型中,用流式细胞术分别检测DC分化,成熟阶段细胞表型的变化,应用ELISA检测DC IL-12的分泌水平,应用MTT法检测DC刺激同种异体T细胞增殖的能力.结果:TGF-β1对不成熟DC的特征性分子 CD1a的表达无明显影响,但在诱导DC的成熟阶段,TGF-β1明显抑制CD40、CD86及CD83上调.此外,TGF-β1显著减少DC IL-12的分泌,显著抑制DC刺激同种异体T 细胞增殖的能力.结论:DC是TGF-β1免疫抑制活性的靶细胞.TGF-β1不影响DC的分化,但抑制DC的成熟和细胞因子的分泌,降低DC刺激同种异体反应T细胞增殖的能力.     

急性脑梗死患者血浆Hcy、eNOS、sTM、hs－CRP、vWF的变化及意义

目的：探讨血浆生物标志物检查诊断急性脑梗死患者的特异性和敏感度,以辅助临床诊断和病情随访。方法分别测定150例急性脑梗死患者（观察组）和50例健康查体者（对照组）的血浆同型半胱氨酸（ Hcy）、内皮型一氧化氮合酶（eNOS）、可溶性血栓调节蛋白（sTM）、超敏C反应蛋白（hs－CRP）及血管性假血友病因子（vWF）水平。结果观察组血浆Hcy、eNOS、sTM、hs－CRP、vWF水平均显著高于对照组（ P均＜0．05）。根据ROC曲线得出当Hcy临界值为9．11μmol／L时诊断急性脑梗死的敏感性为95．2％、特异性为76％,eNOS临界值为437．30μmol／L时诊断的敏感性为79％、特异性为96％,sTM临界值为7．43μmol／L时诊断的敏感性为75．2％、特异性为96％,hs－CRP临界值为3．38 mg／L时诊断的敏感性为81．9％、特异性为90％,vWF临界值为194．85 ng／mL时诊断的敏感性为75．2％、特异性为80％。结论血浆Hcy、eNOS、sTM、hs－CRP、vWF水平可作为急性脑梗死诊断的辅助指标。     

探讨鉴别诊断肺癌与肺感染患者的生物标志物

目的:探讨肺癌与肺感染患者之间生化成分含量以及蛋白组学变化,用于筛选诊断恶性胸腔积液的生物标志物。方法:(1)分别测定肺癌和肺感染患者血清和胸腔积液总蛋白、白蛋白、甘油三酯等10项生化成分含量,进一步比较两组之间各项指标的胸腔积液与血清的比值。(2)基质辅助激光电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析TTR蛋白化学修饰。结果:(1)肺癌患者血清中CHO、ApoA-1、TTR蛋白含量明显高于肺感染患者;而肺感染患者胸腔积液中ADA的活性高于肺癌患者。(2)计算个体胸腔积液与血清生化成分含量比值,肺癌患者TTR蛋白比例显著高于肺感染患者,ADA减低,与血清变化趋势相同,但更加明显。(3)肺癌患者及肺感染患者血清TTR蛋白均出现3种修饰类型,而肺癌患者胸腔积液中cysgly-TTR明显增高。结论:联合分析胸腔积液与血清TTR蛋白的比值和化学修饰,可能有助于鉴别诊断肺癌与肺感染。     

基于HPLC检测老年痴呆患者血清淀粉样变成分的方法

目的 探讨基于高效液相色谱法(HPLC),检测老年痴呆(AD)患者血清淀粉样变成分的方法.方法 将乙腈与血清按照一定比例混合(1:1)后,5000 r/min离心5 min沉淀高丰度蛋白,然后用HPLC法分离血清中淀粉样变相关蛋白,在pH3.0酸性条件37℃孵育5 d,制备淀粉样变纤维,同时用硫黄素T测定淀粉样变聚合物...     

系统性老年性淀粉样变患者血清转甲状腺素蛋白出现三种修饰基团减少

目的:探讨转甲状腺素（TTR）蛋白代谢修饰与淀粉样变形成的分子机制。方法:本研究首先利用ProteomeLabPF-2D系统依据蛋白质等电点分选各个pH值范围蛋白质,然后利用抗人TTR抗体,点免疫印迹实现鉴定TTR蛋白存在于被收集的范围。利用硫黄素T（ThT）试剂,测定各个收集部分溶液中淀粉样变的含量,进一步利用飞行质谱的表面增强激光解吸/电离时间（SELDI-TOF-MS）分析各个部分TTR蛋白的修饰类型。结果:系统性老年性淀粉样变（SSA）患者和健康志愿者血清pH范围分别为 8.1～8.0,4.0～4.6及6.8～5.8范围时出现高丰度蛋白。并且SSA患者pH6.8~5.8范围淀粉样变含量明显高于对照组（P＜0.05）,其中SSA组与健康组相比,血TTR 蛋白N端氨基酸修饰基团包括磷酰基（Phosphoryl）、羟基（Hydroxyl）、葡萄糖胺（O-GlcNac）基团修饰阴性。结论:SSA患者血TTR 蛋白N端氨基酸修饰基团Phosphoryl、Hydroxyl、O-GlcNac的减少可能与淀粉样蛋白的形成有关。