α-干扰素治疗肝癌耐药性机制的研究

目的观察α-干扰素(IFN-α)治疗肝癌产生耐药性的过程,探讨其机制。方法裸鼠肝内原位接种裸鼠人肝癌高转移裸鼠模型LCI-D20肿瘤组织,随机分为7组,每组6只。其中治疗组于接种肿瘤后第2天皮下注射给予IFN-α(1．5×10~7 U/kg体重/d)20 d,治疗组A和B裸鼠于停药后第1和21天分别被处死；治疗组C和D于停药后第21天再次给予同剂量IFN-α(1．5×10~7 U/kg体重/d)联合格列卫(100mg/kg体重/d,灌胃)治疗20 d。对照组E～G分别在接种肿瘤后第28、48、68天被处死。观察裸鼠体重,肿瘤大小、体积,检测血清血管内皮细胞生长因子(VEGF)浓度、肿瘤组织微血管密度。抽提A、D、E、G各组总RNA做关于血管生成SuperArray基因芯片。结果A～G组肿瘤的大小分别为0．27、1．54、3．22、2．23、0．68、1．93、3．98 g,其中组A和组E,组D和组G相比,肿瘤大小差异有统计学意义(P＜0．05)。外周血VEGF浓度组A和组E,组C、D和组G相比差异有统计学意义(P＜0．05)。芯片结果提示在IFN-α治疗过程中,肝癌组织VEGF mRNA和裸鼠血清中的VEGF仍保持较低水平,而PDGF-AA mRNA的表达水平逐渐升高。组A微血管密度显著低于组E,而在组C和组G间差异无统计学意义。HE染色显示治疗组与对照组相比,异常核分裂象增多,肿瘤周围包膜变薄,纤维成分减少。结论肝癌可对IFN-α治疗产生耐药性,可能的机制为肝癌肿瘤血管生成由VEGF依赖转化为PDGF依赖。     

α干扰素抑制肝癌转移复发及其机制

肝癌占全世界癌症死亡的第三位，是我国癌症死因的第二位。经过几十年的努力，肝癌研究取得了许多进展，在某些临床中心，肝癌根治性切除后5年生存率可达40％以上（本所治疗的肝癌患者的5年生存率在小肝癌切除术者中约为60％，大肝癌切除术者约为30％）。但术后5年复发率高达60％以上（小肝癌也达40％～50％）。转移复发已成为进一步提高远期疗效的瓶颈问题，     

干扰素α治疗肝细胞癌的再认识

干扰素（IFN）是多功能的细胞因子，有抑制增殖、抗病毒、抑制血管生成和免疫调节的作用。IFN家族包括α、β、γ三大类，目前在肝病和肿瘤治疗中应用较多的是IFNα。[第一段]     

免疫检查点抑制剂治疗后肝功能异常的组织病理学分析

目的:探讨单独使用免疫检查点阻断剂(immune checkpoint inhibitors,ICI)、ICI与靶向抗血管生成的酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitor,TKI)联合使用两种情况下,免疫反应介导性肝炎(immune-mediated hepatitis,IMH)的组织学表现差异。方法:收集2015至2019年在复旦大学附属中山医院接受抗ICI治疗发生肝功能异常且获得肝组织标本的病例21例。其中10例使用单药ICI,另11例使用ICI及靶向抗血管TKI联合治疗,观察组织病理形态,使用免疫组织化学方法检测程序性死亡配体1、2(programmed cell death-ligand 1,PD-L1/2)表达情况。结果:单药ICI治疗的IMH表现为程度不等、均匀分布于肝小叶及汇管区的炎性病变,并可出现小胆管炎、静脉内皮炎、Kupffer细胞活化及紫癜样变。8例(8/10)出现轻度肝损伤,2例(2/10)出现轻-中度肝损伤。在使用ICI及抗血管TKI联合治疗的患者中,肝损伤往往较为严重,其中4例(4/11)出现中-重度肝损伤,肝细胞桥接坏死、大片坏死,汇管区中-重度炎性病变,部分小胆管上皮变性,伴显著界面性肝炎。在较严重IMH的病例中,较多CD8+的T淋巴细胞聚集在汇管区及肝窦内,且有部分肝窦内皮细胞表达PD-L1。单药治疗、联合治疗中各有2例发生死亡,其中联合治疗组中有1例发生急性多发性肝炎,肝组织大片凝固性坏死,肝功能不可逆损伤,最终患者因多系统免疫失调,多器官衰竭而死亡。结论:与单用ICI相比,联合使用ICI及抗血管TKI有可能造成肝细胞的叠加损伤,引起严重IMH的可能性更高。     

与高转移潜能人肝癌细胞特异性结合肽对人肝癌细胞株体外侵袭表型的影响

目的 研究与高转移潜能人肝癌细胞特异性结合肽(AWYPLPP肽)对不同转移潜能人肝癌细胞株体外侵袭表型的影响.方法 采用侵袭实验探讨AWYPLPP肽对不同转移潜能的人肝癌细胞株体外侵袭表型的影响;利用迁移实验、黏附实验和明胶酶谱实验研究其可能的作用机制,采用单因素方差分析检测结果.结果 在AWYPLPP肽浓度为0.10～100.00 μmol/L时,其能显著促进高转移潜能人肝癌细胞株HCCLM3的侵袭能力,呈剂量效应关系;在浓度为100.00μmoL/L时,其能促进其他高转移潜能人肝癌细胞株MHCC97、MHCC97H和HCCL,M6的侵袭能力(F=4.84,8.19,25.42,P<0.05),对低转移潜能人肝癌细胞株MHCC97L、PLC/PRE/5和Hep3B的侵袭能力无明显影响.迁移实验和黏附实验表明,AWYPLPP肽对HCCLM3的迁移和黏附能力无影响;明胶酶谱实验发现,AWYPLPP肽作用后HCCLM3细胞分泌活性型基质金属蛋白酶9(MMP-9)明显增加.结论 AWYPLPP肽能促进高转移潜能人肝癌细胞株体外侵袭能力,其作用的机制可能与活性型MMP-9分泌增加有关.     

肝癌姑息性切除术后裸鼠残癌模型的建立

目的 建立肝癌姑息性切除术(PR)后可研究残癌生物学特性变化的转移性裸鼠人肝癌原位移植瘤模型.方法 采用单肝叶双瘤源原位接种技术建立MHCC97H原位移植瘤模型,PR切除1瘤,观察5周.测量肿瘤大小,流式细胞术计数外周血循环肿瘤细胞数,荧光显微镜和苏木素-0伊红(HE)染色检测肝内、肺、腹腔转移等,免疫组织化学染色和Western blot检测脑和肿瘤组织Vimentin表达.结果 双瘤源接种成瘤率95.6％、PR成功率95.3％、裸鼠5周总体存活率90.2％.假手术组、肝部分切除术组、PR组肿瘤大小、循环肿瘤细胞数均依次升高,肝内转移率分别为15.4％、41.7％、83.3％,肺转移率分别为61.5％、91.7％、100.0％,腹腔转移率分别为23.1％、50.0％、83.3％(P值均＜0.05).手术组脑和肿瘤组织Vimentin表达均显著上调.结论 成功建立转移性裸鼠人肝癌原位移植瘤合并PR模型,可用于研究残癌生物学特性的变化.     

肝癌复发转移的研究

目的：通过实验和临床研究为肝部根治性切除后复发转移提供预测指标和预防方法,方法：用组织块肝原位移植建立高转移人肝癌裸鼠模型,用该模型建立高转移潜能人肝癌细胞系,用分子生物学方法研究肝部侵袭性有关变化,并由此设计实验性干预治疗,开展预防复发转移的临床实验。结果：（1）建成在肺、肝和淋巴结高转移的人肝癌裸鼠模型LCI－D20,建成高转移潜能人肝癌细胞系MHCC97。（2）初步摸清与肝癌侵袭性呈正、负相关的分子水平变化。（3）发现染色体8p缺失与肝癌转移有关。（4）验血提示血栓调节蛋白与肝内播散呈负相关,细胞间粘附分子－1、纤溶酶原激活物受体的抑制剂（PAI－1）和血内皮生长因子（VEGF）水平与肝癌侵袭转移呈正相关。（5）用LCI－D20模型,证实TNP470、苏拉明、反义VEGF、突变型flk-1相基因转染、羧基胺基咪唑,Endostain、干扰素α等抗血管生成剂有抑制肝癌生长和转移作用。反义H-ras、BB94或肝素也有类似作用。（6）根治性切除后经动脉化学药物治疗（化疗）,化学药物栓塞合并干扰素或LAK细胞治疗使3年复发率有所降低。结论：肝癌侵袭性相关的分子水平变化与其他实体瘤相仿,小肝癌的生物学特性比大肝癌略好, 这些研究为复发转移的预测和预防提供了有潜在意义的线索。     

基于实时二维剪切波弹性成像的正常肝脏弹性模量值探讨

 目的 基于对实时二维剪切波弹性成像(two-dimensional shear wave elastography,2D-SWE)技术可重复性的研究,以病理学作为金标准,建立正常肝组织的2D-SWE弹性模量值范围。方法 选取42例健康体检者,由高低年资两位医师分别对其行2D-SWE肝组织弹性硬度检测,通过分析组内及组间差异探讨2D-SWE技术的方法学效能。设定严格入组条件,选取手术病理证实为无纤维化的128例患者,探讨基于2D-SWE技术的正常肝脏弹性模量值范围。结果 2D-SWE具有良好的可重复性,高低年资医师组内相关系数分别为0.984及0.978,且不同操作者对同一组受检者的弹性模量测值差异无统计学意义(P=0.121)。基于2D-SWE的正常肝脏弹性模量值参考范围为4.33~7.40 kPa。男性弹性模量测值稍高于女性(P=0.013),不同年龄组及轻度炎症差异均无统计学意义(P=0.775,P =0.138)。结论 2D-SWE技术检测肝组织弹性硬度稳定性佳,推荐正常肝脏弹性模量值范围为4.33~7.40 kPa,是肝纤维化诊断体系的可靠基础。     

在接受仑伐替尼联合PD-1抗体治疗的不可切除肝细胞癌患者肝切除术前行门静脉栓塞术的研究

目的:探究肝切除术前行门静脉栓塞术(PVE)在接受仑伐替尼联合程序性死亡蛋白-1(PD-1)抗体治疗的不可切除肝细胞癌患者中的安全性和临床结果。方法:回顾性分析2019年5月至2020年11月复旦大学附属中山医院肝肿瘤外科在肝切除术前接受仑伐替尼联合PD-1抗体治疗及PVE的不可切除肝细胞癌6例患者资料,均为男性,年龄...     

肝血管平滑肌脂肪瘤的诊断与治疗

目的：报告8例肝血管平滑肌脂肪瘤的影像学特征及病理学特点，探讨其诊断与治疗方法。方法：对8例经手术及病理证实的肝血管平滑肌脂肪瘤的术前影像学表现（B超、CT、MRI、^99mTc-PMT）、手术情况及病理特点进行分析。结果：B超：肿瘤呈强回声光团6例，低回声光团2例；边界清楚7例，血供丰富、内部回声不均匀4例，其中1例内部呈分隔网状结构。彩色Doppler超声示肿瘤血供丰富，均测及动脉频谱，阻力指数为0.4-0.5。静脉造影示肿瘤内血流信号明显增加。CT：平扫示肿瘤呈低密度影7例，不均匀5例，边界清楚7例，肿瘤内见软组织影2例，脂肪成分2例。增强扫描示动脉期明显强化，门脉期及延迟期逐渐呈低密度。MRI：肿瘤呈短T1、长T2信号，增强后强化明显，脂肪抑制后短T1变成长T1。^99mTc-PMT示肿瘤呈放射性增强，5min相肿块区呈放射性缺损，2h、5h延迟相肿块区未见放射性填充，肝血池相肿块呈放射性填充。病理及免疫组化：肿瘤由成熟的脂肪、血管及平滑肌组成，HMB-45阳性。术前确诊3例。结论:B超示强回声光团，CT呈低密度影中出现软组织影、脂肪成分，增强明显，MRI出现脂肪信号，脂肪抑制后短T1变成长T1，增强明显。^99mTc-PMT示肿瘤呈放射性增强，5min相呈放射性缺损，延迟相未见放射性填充，肝血池相呈放射性填充。这些是肝血管平滑肌脂肪瘤的影像学特点，结合病史可作出诊断。此病应尽早手术治疗，行肝部分切除。最后确诊依靠病理检查及免疫组化分析。