14-3-3蛋白多克隆抗体的制备和应用

目的 制备１４－３－３特异性抗体并试用于朊病毒病患者脑脊液标本检测。方法 以原核细胞表达的谷光甘肽－Ｓ－转移酶（ＧＳＴ）－１４－３－３蛋白为抗原,免疫家兔。用酶联免疫吸附测定法（ＥＬＩＳＡ）及Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ方法检测制备的抗血清效价和特异性。结果 ＥＬＩＳＡ检测显示所制备的抗体与纯化的ＧＳＴ－１４－３－３蛋白反应效价为１：４０９６０００;Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ结果证实所制备的抗体可有效识别原核细胞表达的及脑组织提取物中存在的１４－３－３蛋白。对例具有较为典型脑电图改变、临床可疑诊断为克罗伊茨费尔特－雅各布病（Ｃｒｅｕｔｓｆｅｌｄｔ－Ｊａｃｏｂ ｄｉｓｅａｓｅ,ＣＪＤ）病人的脑脊液检测发现其１４－３－３蛋白为阳性;另外４例伴有痴呆、昏迷症状病人脑脊液１４－３－３蛋白为阴性,其中３例进行的脑组织活检显示致     

人PrP特异性多肽抗体的鉴定和应用

目的 为了进一步检测制备的人PrP特异性多肽抗体的免疫反应性和特异性。方法 构建人PrPN端缺失原核表达质粒,表达并纯化N端缺失的PrP蛋白;Western blot检测多肽抗体与纯化的各种人全长、N端缺失以及C端缺失PrP蛋白的反应能力;免疫荧光法检测多肽抗体与真核表达的人PrP蛋白反应能力;提取Creutzfeldt-Jakob病（CJD）病人以及Scrapie感染的仓鼠脑组织,Westen blot检测多肽抗体与致病性PrP－res蛋白的反应能力。结果 所制备的PrP多肽抗体能与原核及真核细胞表达的各种不同长度的PrP蛋白反应,同时还能特异性识别Scrapie感染鼠脑组织中和CJD病人脑组织中的PrP－res蛋白。结论 多肽抗体具备良好的免疫反应性和特异性,可以应用于临床CJD病人的检测。     

卫生行政部门在实行卫生防疫工作目标管理中应注意的几个问题

<正> 1 制定确切的目标是实现目标的前提制定目标是目标管理的重要一环,也是最难办的一步,卫生防病目标制定的确切与否关系着目标管理的成败,特别是实行目标管理后各级领导要签定目标责任书,把能否完成目标作为考核干部政绩的主要内容,目标的确切就显得尤为重要。我们的做法是:一是根据党和国家的方针政策及上级指示制定目标,如四苗接种率,国家要求达两个85％(分别以省和县为单位),我们都作为年度的主要工作目标;二是根据《传染病防治法》、《食品卫生法》、《公共场所卫生管理条例》等卫生法规制定目标,如法定传染     

人朊蛋白基因外显子Ⅰ及其上游序列具有启动子样活性

目的 鉴定朊蛋白（ＰｒＰ）基因转录启动子位置。方法 利用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增人ＰｒＰ基因外显子Ⅰ及其上游序列，序列鉴定后插入ＣＡＴ报道质粒ｐＢＬ－ＣＡＴ６，分别转染ＨｅＬａ、ＣＯＳ７和Ｓｈ－ｓｙ５ｙ细胞系，检测ＣＡＴ表达值；提取三种细胞蛋白，以条带移动实验检测细胞转录激活因子ＳＰ１含量。结果 人ＰｒＰ基因外显子Ｉ及其上游序列为ＧＣ富含，带有多个ＳＰ１可能性综合位点，但无明显ＴＡＴＡ盒；瞬时转染结果显示这段序列可诱导２～３倍的ＣＡＴ表达增强；定量移动条带实验证明ＨｅＬａ细胞中含有较高浓度的ＳＰ１，而ＣＯＳ７和Ｓｈ－ｓｙ５ｙ细胞中ＳＰＩ含量极低。结论 人ＰｒＰ基因外显子Ｉ及其上游序列具有启动子样功能，为弱的非ＴＡＴＡ盒启动子；不同组织来源的细胞中ＳＰ１含量不同，在神经细胞系Ｓｈ－ｓｙ５ｙ中人ＰｒＰ基因外显子Ｉ     

伤寒沙门菌耐药基因检测及定位

目的探讨伤寒沙门菌耐药基因的定位。方法３２Ｐ随机引物标记氯霉素耐药基因为探针，以Ｓｌｏｔｂｌｏｔ、Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ法检测，同时以氯霉素乙酰转移酶活性（ＣＡＴ）和药敏试验（ＭＩＣ）作为耐药标志。结果１６株伤寒菌中有１４株含９８６０００００大质粒。经杂交，其中７株质粒阳性；１株染色体阳性；３株质粒与染色体均为阳性。质粒杂交带位于４．３ｋｂ片段，染色体为５．２ｋｂ片段。结论伤寒菌耐氯霉素基因大部分位于９８６０００００大质粒上，少数位于染色体上或两者兼有     

人朊病毒多肽抗体的制备及应用

目的 利用人工合成人朊病毒蛋白（ＰｒＰ）多肽制备特异性抗ＰｒＰ抗体,以期用于朊病毒相关疾病的临床诊断。方法 根据ＰｒＰ基因编码的氨基酸序列合成多肽,与载体偶联合免疫动物,所制备的抗血清用ＥＬＩＳＡ及Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ鉴定。结果 ＥＬＩＳＡ检测表明所制备的抗血清可同多种ＰｒＰ发生一反应;Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ结果显示抗血清可与正常组织ＰｒＰ＾ｃ和病理组织的ＰｒＰ＾ｓｃ反应;用蛋白酶Ｋ处理,可     

建立乡(镇)防保站五年来实践体会

党的十一届三中全会以来,随着农村经济的迅速发展,农村的预防保健任务也相应加重,原有的乡镇防保体制远远不能适应新形势发展的需要。我市于1985年在4个乡(镇)卫生院将防保组分离出来,建立乡(镇)级防保站,经过5年来的尝试和探索,使乡(镇)防保机构增强了活力和生机。