SEA诱导人PBMC对结肠癌Caco-2细胞的杀伤效果观察

目的通过蛋白注入和基因转染两种形式,观察金黄色葡萄球菌肠毒素A（SEA）诱导人外周血单核细胞（PBMC）对结肠癌Caco-2细胞的杀伤效果。方法密度梯度离心法分离PBMC,用不同浓度SEA诱导;MTT法测定PBMC对Caco-2细胞的杀伤率;用阳离子脂质体法将重组质粒pEGFP-N1-SEA转染至Caco-2细胞,检测PB—MC对该细胞的杀伤率。结果在一定范围内,随着SEA浓度的升高,PBMC对Caco-2细胞的杀伤率显著上升,在36h、高效靶比、高SEA浓度的情况下,杀伤率可达57．23％;将pEGFP-N1-SEA转染至Caco-2中,转染效率达55％,同时能显著提高PBMC的杀伤率,转染60h后杀伤率可达54．62％。结论通过蛋白注入和基因转染两种形式,SEA均能诱导并增强PBMC对Caco-2细胞的杀伤效果。     

SEA体内杀伤S180肉瘤效果及其细胞因子的测定

目的:研究SEA抗肿瘤的效果及其对细胞因子干扰素(IFN)-γ的影响,探讨其作用机制。方法:采用S180细胞建立小鼠肉瘤模型40只进行体内抑瘤实验,随机分成4组,包括SEA高剂量组(n=10)、SEA中剂量组(n=10)、SEA低剂量组(n=10)和对照组(n=10),前3组分别注射0.5、0.25、0.05mg/kg的SEA,对照组注射生理盐水,接种第5天起测量各组小鼠肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲线并计算抑瘤率。治疗结束后取小鼠血清并测定IFN-γ的含量。结果:SEA高、中和低剂量组抑瘤率分别为(44.00±3.21)%、(3.92±2.12)%和(2.33±1.95)%,SEA高剂量组脾脏指数和IFN-γ的含量明显增加,与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01),但肿瘤质量却明显减小。结论:SEA通过激活T细胞,分泌细胞因子IFN-γ抑制小鼠体内S180肉瘤生长。     

固定化酶连续拆分D,L-蛋氨酸

目的研究利用基因重组工程技术构建高活性的氨基酰化酶工程菌连续拆分D,L-蛋氨酸。方法氨基酰化酶工程菌经发酵收集高活性的菌体,通过海藻酸钠包埋技术制备固定化酶,连续拆分D,L-蛋氨酸。结果利用基因工程构建的工程菌表达氨基酰化酶,比酶活性大于6000μ/g湿菌体,酶柱比酶活性大于4000μ/g酶,半衰期20d,可连续拆分24d,拆分率达90%,收率达74.5%左右。结论利用基因工程技术构建工程菌表达的氨基酰化酶活性高和拆分率高。     

超抗原SEA原核表达及诱导淋巴细胞杀伤人肺腺癌细胞效果观察

目的探讨重组质粒pET22b-SEA经原核表达后,金黄色葡萄球菌肠毒素A（SEA）对人外周血单核细胞（PBMC）杀瘤活性的影响。方法将重组质粒pET22b—SEA转化至E．coli BL21（DE3）扩大培养,IPTG诱导后,进行SDS-PAGE分析;密度梯度离心分离PBMC,不同浓度SEA诱导PBMC,12、36、60h后用MTT法测定PBMC对人肺腺癌细胞A549的杀伤活性。结果经诱导,pET22b-SEA得到表达,产物相对分子质量约为30kDa,与理论值大小一致;随着SEA浓度的升高PBMC的杀瘤活性显著增强,在36h、高效靶比、高SEA浓度的情况下,杀伤率最高可达57．21％。结论重组质粒pET22b-SEA在大肠杆菌中成功表达;SEA可诱导PBMC对人肺腺癌细胞A549产生更强的杀瘤活性。     

超抗原VEGF-SEA融合基因的克隆与表达

目的:构建血管内皮生长因子-葡萄球菌肠毒素A(VEGF-SEA)基因的原核表达质粒,获得VEGF-SEA融合蛋白。方法:制备VEGF-SEA基因片段,插入pET40b构建重组质粒pET40b-VEGF-SEA,经序列分析正确后转化大肠杆菌BL21(DE3),进行IPTG诱导表达蛋白。用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表达蛋白的相对分子质量及表达形式,并对产物采用His·Bind Buffer kit试剂盒纯化。结果:获得VEGF-SEA基因片段长1130bp,经序列分析与预期完全一致,其表达出目的蛋白的大小约为66.2ku,以包涵体形式表达,经纯化,纯度达到90%以上。结论:表达载体pET40b-VEGF-SEA构建成功,VEGF-SEA融合蛋白获得高效表达,本实验为进一步研究VEGF-SEA蛋白的活性及其功能,探讨超抗原抑制肿瘤生长作用奠定了基础。     

超抗原SEA对人外周血单个核细胞杀伤乳腺癌细胞效力的诱导作用

[目的]研究超抗原葡萄球菌肠毒素A(SEA)对外周血单个核细胞(PBMC)杀伤人乳腺癌细胞(MCF-7)效力的增强作用.[方法]淋巴细胞分离液梯度离心法从人外周血中分离出PBMC,在其中加入终浓度分别为0.01、0.1、1、10mg/L的SEA,与MCF-7在96孔板中共同培养.24、48、72h后用酶标仪检测吸光度值.计算杀伤率.[结果]SEA的促杀伤作用随着时间的增加而增强.SEA与PBMC相互作用72 h后,SEA浓度10 mg/L时,可达到最大杀伤效率.[结论]SEA能够提高PBMC对癌细胞的杀伤作用.