肿瘤转移抑制基因HTPAP的Haploview单体型构建分析

目的 通过单核苷酸多态性(SNP)检测对肿瘤转移抑制基因HTPAP进行单体型构建和分析.方法 取100例肝细胞癌(HCC)新鲜标本,应用激光捕获组织显微切割获取纯肝癌细胞、提取DNA,对HTPAP基因上已登录的15个SNP位点进行检测,应用Haploview软件构建单体型.结果 15个SNP位点中,有8个表现为单态、5个呈多态性、2个未能检测出.对100例肝细胞癌的该5个多态位点进行单体型构建后发现11种单体型,其中3种单体型(C-A-T-C-A、C-G-T-C-A和T-A-G-G-G)最常见,占87%,另外8种单体型占13%.4个SNP(rs7007097、rs3830326、rs1149、rs3739252)表现为强连锁不平衡关系,尽管rs11539529出现重组现象,但从整体看还是属于同一个单体型块.结论 肿瘤转移抑制基因HTPAP在肝癌中常见C-A-T-C-A、C-G-T-C-A和T-A-G-G-G三种单体型,针对不同单体型研究分析可能为肝癌转移复发、预后预测提供新的途径和指标.     

DNA载体介导的RNAi抑制肝癌细胞的骨桥蛋白表达及侵袭性

目的探讨骨桥蛋白(OPN)对高转移潜能人肝癌细胞系HCCLM3侵袭性影响。方法构建两个针对人OPN mRNA干扰质粒pENTR~(TM)/U6-INF(pINF-1、2)及对照质粒pENTR~(TM)/ U6-CTR(pCTR),并将其转染HCCLM3细胞。逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定OPN的mR—NA表达量；Western印迹测定OPN蛋白的表达量；噻唑蓝(MTT)比色法实验检测HCCLM3的增殖力；Matrigel侵袭实验检测细胞侵袭力的改变；结果与仅加转染试剂的空白对照组(2．01±0．13)相比。转染24h后,plNF-1组OPN mRNA用RT-PCR无法检测到,pINF-2组mRNA(1．00±0．12)下降50%,而pCTR组mRNA(2．02±0．13)表达差异无统计学意义(P＞0．05)。转染48h后plNF-1组OPN蛋白表达(0．11±0．02)与空白对照组(1．02±0．11)相比下降90%；转染plNF-1后,HCC-LM3细胞的增殖力下降2%。但与对照组相比差异无统计学意义(P＞0．05)。Matrigel侵袭实验结果显示,与空白对照组(28．4±1．5)相比,转染plNF-1后HCCLM3细胞穿过人工基底膜的数量(10．2±0．8)明显减少,差异有统计学意义(P＜0．01)。结论pINF-1可以特异性抑制高转移肝癌细胞系HCCLM3中OPN的表达,并显著降低其侵袭力,但对细胞增殖力影响不大,此技术有望成为抑制肝癌侵袭转移的新途径。     

抑制骨桥蛋白表达降低肺癌侵袭和增殖的机制

目的 探讨抑制骨桥蛋白(OPN)表达降低肺癌细胞株A549侵袭、增殖的机制.方法 构建针对人OPN mRNA干扰质粒pENTRTM/U6-INF(pINF-1)及对照质粒pENTRTM/U6-CTR(pCTR),将其转染A549细胞,Western blot测定OPN、基质金属蛋白酶(MMP)和促分裂素原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路相关蛋白的表达;明胶酶谱检测MMP的表达.结果 与空白对照组(1.20±0.15)比较,转染72 h后pINF-1组OPN蛋白表达(0.15±0.04)下降87%,与对照组比差异有统计学意义(P＜0.05).Western blot的结果显示,pINF-1组细胞磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(pERK1/2)、磷酸化丝裂原细胞外激酶(pMEK)和MMP-2的表达明显下降,差异有统计学意义(P＜0.01);而MMP-9表达差异无统计学意义(P＞0.05).明胶酶谱结果同样表明pINF-1组MMP-2的表达明显下降(P＜0.01).结论 抑制OPN的表达降低肺癌细胞株A549侵袭力和增殖的机制可能与抑制MAPK信号通路和MMP-2的表达有关.

Abstract：

Objective To explore the mechanism of invasion and proliferation of lung cancer cell line A549 mediated by osteopontin. Methods One double-stranded DNA vectors pENTRTM/U6-INF ( pINF-1 ) targeting the mRNA of human osteopontin ( OPN), and the control vector pENTRTM/U6-CTR (pCTR) mismatching with mRNA of OPN were constructed, and then they were transfected into human A549 cells with high metastatic potentials. Western blotting was used to quantify the protein level of OPN,matrix metalloproteinases (MMPs) and mitogen-activated protein kinases (MAPK). The activity of MMPs was detected by gelatin zymography. Parallel experiments were performed in sextuplicate. Results As compared with control group only transfected with LipofectamineTM 2000, OPN protein level in pINF-1 group was decreased by 87% 72 h after transfection (P ＜0. 05), and no significant difference was found in the group transfected with pCTR. Moreover, the expression levels of phosphorylated extracellular signal-regulated kinases 1/2 (pERK1/2), phosphorylated MAPK/ERK1/2 kinase (pMEK) and MMP-2 protein were also decreased in pINF-1 group (P ＜ 0. 01 ). The activity of MMP-2 but not MMP-9 was decreased significantly in pINF-1 group (P ＜ 0. 01 ). Conclusion OPN plays an important role in metastasis as well as tumor growth of lung cancer cells probably through activation of the MAPK pathways and MMP-2.     

应用染色体8p微卫星杂合性缺失标记观察同一肝细胞癌结节内部不同肿瘤细胞群克隆差异

目的用染色体8p微卫星的杂合性缺失（LOH）作为肿瘤的遗传性标记，对同一肝细胞癌结节内部不同肿瘤细胞群是否有克隆差异进行研究。方法在10例肝细胞癌患者，同一肿瘤结节内部不同颜色质地的部分作为不同的细胞群，手工辅助显微切割获取较纯的肿瘤细胞，抽提肿瘤细胞DNA；选取5个染色体8p微卫星位点D8S277、D8S254、D8S258、D8S298、D8S1771，进行微卫星LOH的检测。结果在10例肝细胞癌患者，7例检测出8p微卫星的LOH，3例未检测出8p微卫星的LOH。6例患者在同一肿瘤结节的内部不同肿瘤细胞群之间出现微卫星位点LOH类型的差异，1例患者3个肿瘤细胞群的LOH类型相同。结论在同一肝细胞癌结节的内部，不同的肿瘤细胞群之间存在克隆差异，这种差异说明不同的肿瘤细胞群可能有不同的克隆来源，从而为观察同一肿瘤内不同肿瘤细胞群的生物学特性提供依据。     

抑制骨桥蛋白表达对肺癌侵袭、增殖的影响

目的 观察抑制骨桥蛋白(OPN)表达对肺癌细胞株A549侵袭、增殖的影响.方法 构建针对人OPN mRNA干扰质粒pENTR~(TM)/U6-INF(pINF-1)及对照质粒pENTR~(TM)/U6-CTR(pCTR),将其转染A549细胞.Western blot测定OPN的表达;噻唑蓝(MTY)比色法检测A549增殖力;Matrigel侵袭实验检测细胞侵袭力的改变.结果 与空白对照组(1.23±0.16)比较,转染72 h后pINF-1组OPN蛋白表达(0.17±0.07)下降85%;转染 pINF-1后,A549细胞增殖力下降56%,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05).Matrigel实验示,与空白对照组(72.4±6.5)比较,转染pINF-1组细胞穿过人工基底膜的数量(15.2±2.8)明显减少,差异有统计学意义(P<0.01).结论 pINF-1可以特异性抑制肺癌细胞株A549中OPN的表达,可显著降低其侵袭力和增殖.     

LRP在非小细胞肺癌中的表达及其临床相关性研究

目的:探讨肺耐药相关蛋白(lungresistance-relatedprotein,LRP)在非小细胞肺癌(non-smallcelllungcancer,NSCLC)中的表达及其临床相关性。方法:用SP免疫组化方法检测62例术前均未进行化疗及放疗的NSCLC组织中LRP的表达。同时,用原位杂交方法检测21例新鲜肺癌组织中LRPmRNA的表达。结果:在NSCLC中LRP蛋白及mRNA表达的阳性率分别为75.8%(47/62例);61.9%(13/21例)。LRP蛋白表达与LRPmRNA的表达呈一致性(P<0.05)。LRP蛋白表达与分化程度相关(P<0.05)。结论:LRP与NSCLC的耐药明显相关,是一个有效判断预后的敏感指标。     

骨髓间充质干细胞对人肝癌细胞系MHCC97-H增殖能力的影响

目的 观察骨髓间充质干细胞(MSC)对肝癌细胞增殖能力的影响.方法 人肝癌细胞系MHCC97-H培养液中分别加入0、25%和50%MSC的条件培养基(MSC-CM),采用CyQUANT细胞增殖实验检测吸光度A值变化.在MHCC97-H细胞培养液中添加50%MSC-CM,荧光实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测肿瘤增殖细胞核抗原(PCNA)、Ki-67抗原的变化.16只裸鼠皮下接种MHCC97-H细胞后,实验组经静脉注射MSC,1×106个/次,每周3次,对照组静脉注射PBS;比较肿瘤体积.结果 培养液中加入MSC-CM后A值依次为211.65±54.72、236.24±57.15和283.59±62.16(P<0.05).PCNA和Ki-67的表达水平分别升高1.8和7.0倍.实验组肿瘤体积(1745±455)mm3m大于对照组(972±568)mm3(P<0.05),肿瘤体积平均增加速度(56.0±26.1)mm3/d高于对照组(32.4±14.5)mm3/d(P<0.05).结论 骨髓间充质干细胞可促进肝癌细胞系MHCC97-H的增殖.     

非小细胞肺癌淋巴结阳性率与预后的临床分析

目的 探讨淋巴结阳性率(LNR)对预测非小细胞肺癌(NSCLC)患者预后的临床价值.方法 回顾性分析301例行完全性切除术的N1、N2期NSCLC患者的临床资料.其中,男198例,女103例;年龄31～78岁,中位年龄59岁.分析临床病理特征与LNR的相关性,单因素Kaplan-Meier生存分析和多因素Cox比例风险回归分析LNR对术后生存时间的影响;结合现有N分期对有淋巴结转移的患者进行预后危险组别的划分.结果 高LNR组与低LNR组在年龄、吸烟状况、病理类型、临床分期、N分期、隆突下淋巴结是否转移和淋巴结阳性个数、清扫个数及阳性淋巴结站数存在明显差异(P<0.05);LNR是独立预后因素,LNR的高低明显影响总生存期(OS)和无病生存期(DFS)(P<0.001),LNR越高,死亡(HR=2.507,P<0.001)和复发转移(HR=1.872,P=0.008)的风险性越大;在同一N分期中,LNR高、低亚组间比较OS与DFS差异亦有统计学意义.随危险组别的增高,5年总生存率(32.8%、20.7%、6.9%)及中位生存时间(MST)(57、30、16个月)、5年无病生存率(28.1%、16.3%、5.5%)及中位无病生存时间(DMST)(38、19、10个月)均逐渐降低(均P<0.001).结论 LNR能更准确判断NSCLC预后、指导术后治疗,有助于完善NSCLC的TNM分期体系.

Abstract：

Objective To investigate the relationship between the metastatic lymph node ratio (LNR) and the prognosis of non-small cell lung cancer (NSCLC). Methods A total of 301 patients with N1 and N2 NSCLC undergoing curative pulmonectomy were analyzed retrospectively. There were 103 females and 198 males with a median age of 59 years (range: 31-78). The correlations between LNR and clinicopathological data were analyzed by χ2 test. The effects of LNR on overall survival (OS) and disease free survival (DFS) of patients were analyzed by the methods of univariate Kaplan-Meier and multivatiate Cox proportional hazard model. The risk groups were classified by LNR on the basis of N staging. Results LNR correlated with age, smoking status, pathological type, clinical stage and N stage (P<0.05). And it also correlated with positive lymph nodes, resected lymph nodes and the number of positive lymph node station (P<0.001). Kaplan-Meier survival analysis revealed that LNR influenced significantly the lengths of OS (P<0.001) and DFS (P<0.001). Cox proportional hazard model showed a high LNR was an independent poor prognostic factor for OS (HR=2.507, 95%CI 1.612-3.900, P<0.001) and DFS (HR=1.872, 95%CI 1.182-2.964, P=0.008); and at the same N stage, the low-LNR group was better in OS and DFS than the high-LNR group. After stratification into high-, medium- and low-risk groups, the high- (LNR: >18%, N-status: N2), intermediate- (LNR: >18%, N-status: N1; LNR: <18%, N-status: N2) and low-risk factors (LNR: <18%, N-status: N1) could efficiently predict the outcomes. The 5-year survival rate (32.8% vs 20.7% vs 6.9%), median survival time (MST) (57 vs 30 vs 16 months), 5-year disease-free survival rate (28.1% vs 16.3% vs 5.5%) and disease-free survival time (38 vs 19 vs 10 months) decreased progressively with the rising risk groups (P<0.001). Conclusion LNR may be used to accurately predict the prognosis, guide the treatment of NSCLC and improve its staging.     

骨桥蛋白及 CD44 v6在肺腺癌侵袭转移中的作用

目的：探讨骨桥蛋白（ OPN）及其受体CD44v6在肺腺癌侵袭转移中的作用。方法应用免疫组化方法检测129例癌旁组织、肺原位腺癌（AIS）、伏壁样生长为主型腺癌（LPA）患者手术切除标本中OPN、CD44v6的表达情况。检测H358细胞（原位癌细胞系）和A549细胞中OPN、CD44v6蛋白及mRNA的表达,Transwell 试验观察OPN、CD44 v6对H358细胞、A549细胞侵袭力的影响。结果 OPN、CD44 v6在LPA组织中的表达阳性率显著高于AIS及癌旁组织,AIS高于癌旁组织,OPN与CD44v6的表达呈显著正相关（ P＜0．05）。 OPN、CD44v6及OPN mR-NA、CD44v6 mRNA在A549细胞中的表达水平高于H358细胞。 Transwell试验提示OPN对A549细胞的趋化作用高于H358细胞。使用OPN抗体阻断OPN对两种细胞的趋化作用,两种细胞穿过数均减少;阻断CD44 v6受体通道后,OPN对两种细胞的趋化作用明显减弱。结论 OPN-CD44 v6复合体对肺腺癌的侵袭能力具有重要作用,OPN有望成为评估肺腺癌进展及预测肿瘤转移潜能的指标。     

胸部巨大恶性外周神经鞘膜瘤1例

患者男,55岁.主因"发现左胸部隆起10天"于2010年12月入本院.查体:神清,左胸部锁骨处隆起,余查体大致正常.胸部CT示:左上胸腔巨大肿物,侵及肺、胸壁及锁骨下动静脉.胸部肿物穿刺病理考虑平滑肌肉瘤.入院诊断:左胸部平滑肌肉瘤.入院后完善相关检查,查无其他脏器受累,患者心肺功能尚可,各项化验检查未见手术禁忌证.遂全麻下行左胸巨大肿物切除术+胸壁切除术.手术过程顺利.术后予抗炎、补液、左上肢固定等治疗.术后病理:梭形细胞肉瘤,考虑恶性外周神经鞘膜瘤.