肝病胁痛组方用药刍议

胁痛 ,乃肝病临床常见症状之一。《灵枢·五邪》篇云 :“邪在肝 ,则两胁作痛。”盖肝居胁下 ,其经脉布于两胁 ,胆附于肝 ,其脉循于胁 ,故胁痛之症 ,多责之于肝胆。肝病胁痛 ,亦称肝痛 ,在“慢肝”、“乙肝”之类的肝病中 ,表现极为明显。患有肝病者 ,一日出现胁痛 ,思想上紧张     

内痈证验案三则

内痈临床常以穿刺方法或手术摘除。患者痛苦，还易并发后遗症。笔者用中药保守治疗，取得满意效果，兹介绍治验如下。     

拟除虫菊酯浸泡蚊帐防制疟疾媒介的观察

为了改进对疟疾和马来丝虫病媒介嗜人按蚊和中华按蚊的防制措施,以降低疟疾发病率和消灭恶性疟,我们于1986、1987连续两年在江苏省疟疾发病较高的盱胎县的2个乡试用溴氰菊酯和二氯苯醚菊酯浸泡居民用蚊帐的方法,进行现场实验观察。     

耻垢分枝杆菌新型毒素-抗毒素系统MSMEG_3435-3436基因功能的初步研究

目的 初步探讨耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis)毒素-抗毒素(toxin-antitoxin,TA)系统基因的功能及其在细菌药物耐受中的作用。方法 利用无水四环素(ATc)诱导穿梭质粒构建毒素基因(MSMEG_3436和MSMEG_6760)表达系统,检测毒素基因表达的抑菌作用。应用CRISPR-Cas12a基因编辑技术构建ΔMSMEG_3435-3436和ΔMSMEG_6762-6760敲除菌株,探究毒素-抗毒素系统对菌株生长的影响。通过计算菌株存活率检测MSMEG_3435-3436基因对异烟肼(96μg/ml)和利福平(40μg/ml)的耐受相关性。在耻垢分枝杆菌中用LacZ报告基因分别替换毒素-抗毒素基因(MSMEG_1277-1278、 MSMEG_1283-1284、 MSMEG_3435-3436、 MSMEG_4447-4448和MSMEG_5635-5634),构建5个启动子活性检测突变菌株(SY3328、SY3309、SY6407、SY3310和SY3311),并将pMV261空载体和pMV261-抗毒素系列质粒分别电转至5个突变菌株中,通过测定吸光度值(A₆₀₀、A₅₅₀和A₄₂₀)计算β-半乳糖苷酶活性[酶活性单位为“Miller单位(MU)”],以检测毒素抗毒素系统的启动子活性。结果 在耻垢分枝杆菌中,ATc诱导表达毒素基因MSMEG_3436可抑制细菌生长,而同时表达对应的抗毒素基因MSMEG_3435可消除抑制作用;ATc诱导表达毒素基因MSMEG_6760未发现明显的抑菌作用。与野生株相比,ΔMSMEG_3435-3436和ΔMSMEG_6762-6760敲除菌株在7H9液体培养基中生长表型无明显差异。野生株和ΔMSMEG_3435-3436敲除菌株经异烟肼和利福平处理后的存活率[分别为(4.38±1.48)%和(3.49±0.66)%,(0.15±0.04)%和(0.03±0.02)%]显示毒素-抗毒素基因MSMEG_3435-3436与药物耐受性无关(t=0.548,P=0.613;t=2.663,P=0.056)。启动子(SY3328、SY3309、SY6407、SY3310和SY3311)在携带pMV261-空载体和pMV261抗毒素表达质粒的报告菌株中的β-半乳糖苷酶活性分别为(376.50±17.13)和(315.50±20.71)、(189.00±12.24)和(160.70±9.89)、(225.20±9.95)和(211.70±2.57)、(221.40±12.07)和(186.60±13.17)、(179.10±5.87)和(127.70±19.21)MU,差异均无统计学意义(t=2.272,P=0.086;t=1.795,P=0.147;t=1.319,P=0.258;t=1.949,P=0.123;t=2.562,P=0.063)。结论 成功构建了MSMEG_3435-3436和MSMEG_6762-6760在耻垢分枝杆菌中的诱导表达体系及敲除菌株,并发现MSMEG_3435-3436是一个新的有功能的毒素-抗毒素系统,以及这两个毒素-抗毒素系统与菌株生长表型及异烟肼和利福平耐受性无关,最后发现耻垢分枝杆菌中5对毒素-抗毒素系统的抗毒素基因可能在自身启动子调控中不发挥关键作用,可为进一步研究结核分枝杆菌毒素-抗毒素系统的功能提供线索。     

CRISPR基因组编辑技术在结核分枝杆菌中的研究进展及应用

结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)感染引起的结核病仍然是全球公共卫生的威胁。为了应对此挑战，开发新型抗结核疫苗和药物刻不容缓，因此，需要对结核分枝杆菌基因功能进行更加全面深入的了解。基于CRISPR-Cas系统的基因组编辑技术已经广泛应用于原核及真核生物中，然而直到近年来才在结核分枝杆菌中得到发展和应用。笔者综述了基于CRISPR的基因组编辑技术在结核分枝杆菌中的研究进展以及在实际工作中的应用，重点总结了CRISPR全基因组敲除和抑制文库筛选在结核分枝杆菌遗传及化学-遗传相互作用研究中的应用，旨在加深对结核分枝杆菌基因编辑的认识并促进结核分枝杆菌的基础研究。