ICP-MS法评价黔产枳椇子重金属安全性

目的:检测贵州省10个产地枳椇子中重金属的含量。方法:采用电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS),参照2015版《中国药典》对10批黔产枳椇子中铅(Pb)、镉(Cd)、汞(Hg)、砷(As)、铜(Cu)进行测定。结果:各元素线性关系均良好(r0.998),方法检出限为0.008～0.022μg/L,平均回收率为86.2%～103.4%,精密度的RSD值均小于4.0%;Cu含量为5.09～8.01 mg/kg,As为0.011～0.039 mg/kg,Cd为0.00216～0.0157 mg/kg,Pb为0.012～.263 mg/kg,Hg为0.008～0.182 mg/kg。10个产地枳椇子5种重金属残留量均在WM2-2001《药用植物及制剂进出口绿色行业标准》、2015年版《中国药典》、GB 14882-94《食品中放射性物质限制浓度标准》限量指标范围内。结论:本研究采用ICP-MS法检测枳椇子中5种重金属的含量,揭示了贵州省不同产地枳椇子中5种重金属的含量情况,为黔产枳椇子安全性评价提供基础数据。     

经皮二氧化碳测量在腹膜后腹腔镜泌尿外科手术中的准确性:一项前瞻性观察性研究

目的：比较呼气末二氧化碳分压（end-tidal carbon dioxide partial pressure,P_ETCO₂）和经皮二氧化碳分压（transcutane- ous carbon dioxide partial pressure,P_TCCO₂）预测泌尿外科腹膜后腹腔镜手术患者动脉血二氧化碳分压（arterial carbon dioxide pressure,P_aCO₂）的准确性。方法：选择全身麻醉下行腹膜后腹腔镜泌尿外科手术患者50例,于气腹前及气腹后30、60、90 min 分别测定P_aCO₂、P_ETCO₂、P_TCCO₂。计算P_aCO₂-P_ETCO₂和P_aCO₂-P_TCCO₂的差值。对P_aCO₂与P_ETCO₂、P_aCO₂与P_TCCO₂进行相关性和回归分析。采用Bland-Altman分析评价P_aCO₂与其他两个指标的一致性。结果：P_aCO₂-P_ETCO₂和P_aCO₂-P_TCCO₂的绝对差值分别为 （13.20±4.43）mmHg和（4.35±2.56）mmHg（P ＜ 0.05）。P_aCO₂与P_ETCO₂的相关系数为0.79（r ² =0.62,P ＜ 0.001）,与P_TCCO₂的相关系数为 0.91（r ² =0.83,P ＜ 0.001）。P_aCO₂与 P_ETCO₂的 95%一致性界限为 4.53~21.88 mmHg,与 P_TCCO₂的 95%一致性界限为-3.18~ 10.48 mmHg。结论：P_TCCO₂监测可提高评估患者腹膜后腹腔镜泌尿外科手术中P_aCO₂的准确性。     

热休克蛋白A12A对内毒素血症肝损伤的作用及机制研究

目的：研究热休克蛋白A12A（heat shock protein A12A,HSPA12A）对内毒素血症肝损伤的影响及机制。方法：①采用脓毒症小鼠肝组织RNA测序的公共数据库,以生物信息学手段分析Hspa12a和多种载脂蛋白的mRNA表达变化。②采用 6~8周龄Hspa12a基因敲除（Hspa12a knockout,Hspa12a^-/-）鼠和野生型（wild type,WT）鼠,腹腔注射脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）5 mg/kg诱导内毒素血症,以生理盐水（normal saline,NS）注射小鼠为对照组,分为NS-WT组、NS-Hspa12a^-/-组、LPS-WT组和LPS-Hspa12a^-/-组;LPS作用6 h后,收集肝组织,HE染色观察肝脏组织病理变化;免疫印迹和RT-PCR分析其中HSPA12A、 ApoA1、ApoB、ApoM表达水平;分离血清,测定肝功能标志物丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase,ALT）和天冬氨酸氨基转移酶（aspartate aminotransferase,AST）水平以及高密度脂蛋白胆固醇（high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C）和低密度脂蛋白胆固醇（low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C）水平。③WT鼠原代肝细胞过表达Hspa12a后,使用LPS（500 ng/mL）作用于肝细胞模拟内毒素血症肝损伤模型,6 h后检测肝细胞培养上清的ALT和AST水平。④根据是否发生脓毒症肝损伤将患者分为脓毒症肝损伤组和对照组,比较两组患者ALT、AST、HDL-C和LDL-C的差异。结果：①生物信息学分析显示,脓毒症小鼠肝脏Hspa12a、Apoa1、Apob和Apom的mRNA表达下降。②与NS-WT组相比,LPS-WT组肝组织出现明显损伤（P < 0.001）、炎症病灶数量增多（P < 0.01）、血清 ALT（P < 0.05）和 AST（P < 0.01）升高,同时肝组织中 HSPA12A 表达显著下降（P < 0.05）;而与 LPS-WT组相比,LPS-Hspa12a^-/-组肝脏病理变化更严重（P < 0.05）且血清ALT（P < 0.01）和AST（P < 0.05）水平升高,HDL-C和 LDL-C水平下降（P < 0.01）,肝组织载脂蛋白（ApoA1、ApoB、ApoM）表达降低（P < 0.05,P < 0.01）。③体外实验中LPS作用使肝细胞培养上清中ALT和AST水平升高（P < 0.001）,而过表达Hspa12a能够减轻LPS作用引起的ALT和AST水平升高（P < 0.01）。 ④临床数据显示,出现脓毒症肝损伤的患者血浆中ALT和AST水平相比对照组显著升高（P < 0.001）,HDL-C和LDL-C水平显著下降（P < 0.001）。结论：内毒素血症导致肝脏HSPA12A表达下调,其介导了内毒素血症肝损伤的发生,过表达Hspa12a能够保护内毒素血症引起的肝损伤,该作用可能与维持肝脏载脂蛋白及脂蛋白稳态有关。     

三氯乙烯药疹样皮炎肝脏自身免疫性指标分析

目的 探索三氯乙烯药疹样皮炎（occupational medicamentosa-like dermatitis induced by trichloroethylene,OMDT）引发的肝脏自身免疫情况。
方法 选取10例OMDT慢性期患者和5名门诊随访的治愈者作为研究对象,检测肝功能指标丙氨酸氨基转移酶（ALT）和自身免疫性肝炎（AIH）相关免疫指标[免疫球蛋白（IgG）、抗核抗体（ANA）、抗平滑肌抗体（ASMA）、抗肝肾微粒体抗体（LKM-1）、抗肝溶质抗原1型抗体（LC-1）、抗可溶性肝抗原/肝胰抗原抗体（SLA/LP）、抗线粒体亚型-2抗体（AMA-M2）],比较、分析各指标在慢性期患者和治愈者中的水平。
结果 慢性期患者肝功能指标ALT活性中位数（49.5 U/L）高于临床参考值,但IgG浓度（4.74~11.32 g/L）均在参考值范围内,且自身抗体指标均为阴性。治愈者ALT活性中位数（10.0 U/L）在参考值范围内,但其中1人（20%）IgG浓度高于临床参考值,ANA阳性率为60%,其他自身抗体指标均为阴性。慢性期患者ALT活性中位数高于治愈者,而治愈者ANA阳性率高于慢性期患者,差异均有统计学意义（P < 0.05）。
结论 OMDT患者在慢性期期间虽然肝功能受损,但可能未发生自身免疫;治愈后肝功能基本恢复,部分自身免疫指标却可能升高。
     

HSPA12A高表达于神经组织

目的研究热休克蛋白70(HSP70)家族新成员HSPA12A的组织分布和细胞定位。方法采用免疫印迹和免疫荧光组织化学方法,分析成年小鼠7种不同组织中HSPA12A的表达,并探讨其是否在成年、胚胎鼠神经元中具有表达。结果 (1)在成年小鼠心、肝、脾、肺、肾、脑、骨骼肌这7种组织中,脑组织的表达量是其他组织的至少10倍以上(P<0.01);(2)HSPA12A在胚胎时期的鼠皮层神经元中表达;(3)HSPA12A在成年鼠的皮层神经元中持续表达。结论 HSPA12A被首次证实在神经组织中表达最高,且从胚胎时期到成年鼠皮层神经元中均持续表达,提示HSPA12A可能在神经细胞的内稳态维持中具有重要作用。     

热休克蛋白A12B对缺血/再灌注损伤心肌微血管内皮完整性的保护作用

目的探讨热休克蛋白A12B(heat shock protein A12B,HSPA12B)对心肌缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤后微血管无复流现象、血管通透性及其微血管内皮结构完整性的影响。方法实验选用同窝、8~10周龄雄性HSPA12B转基因鼠(HSPA12B Transgenic,Tg)和野生型鼠(wild type,WT)。所有小鼠均接受手术,即结扎冠状动脉左前降支诱导心肌缺血(45 min),松开结扎为I/R开始。I/R 30 min后,采用番茄血凝素免疫荧光标记检测心肌微血管血流灌注情况,伊文斯兰染料检测心肌微血管渗透性。I/R 4 h后取小鼠心脏组织,电子显微镜观察心肌微血管内皮细胞超微结构变化。结果 I/R损伤后,与WT鼠相比,Tg鼠心肌无复流面积显著减少,血管通透性明显降低,微血管内皮细胞损伤减少且细胞间连接更加完整。结论高表达HSPA12B显著减轻心肌I/R诱导的心肌微血管内皮细胞结构和功能损伤,从而保护心肌I/R损害,提示HSPA12B可能为治疗心肌I/R损伤的新靶点。     

红细胞共价交联血影蛋白作为正己烷神经毒效应替代标志物的初步人群研究

目的 初步在人群中论证外周血红细胞共价交联血影蛋白（Sp）作为正己烷神经毒效应替代标志物的可行性。
方法 选取15名职业接触正己烷的工人作为接触组,将其中神经-肌电图异常的5人分类为慢性正己烷中毒前期接触者,其余无神经-肌电图异常的10人分类为一般接触者;选取无正己烷接触史的10名身体健康者作为对照组。采集所有研究对象肘静脉血并提取红细胞膜蛋白。聚丙烯凝胶电泳分离不同相对分子质量的膜蛋白后,分别用考马斯亮蓝和硝酸银染色分析蛋白交联情况,并用免疫印迹实验检测交联蛋白是否为Sp。比较不同组间共价交联Sp阳性率差异。
结果 所有膜蛋白样本电泳后经考马斯亮蓝染色均未显示高分子量交联条带,但部分蛋白样本电泳后经硝酸银染色显示交联条带,经免疫印迹实验证实交联条带为Sp。中毒前期接触者共价交联Sp阳性率（100%）高于一般接触者（10.0%）（P < 0.01）。
结论 外周血红细胞共价交联Sp有可能作为正己烷接触人群神经毒效应替代标志物。
     

热休克蛋白A12B对心肌缺血/再灌注损伤的保护作用

目的探讨热休克蛋白A12B(heat shock protein A12B,HSPA12B)在心肌缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤中的作用。方法本实验采用8~10周龄、雄性高表达HSPA12B转基因鼠(HSPA12B transgenic mice,Tg鼠),一窝所生的雄性野生型(wild type,WT)鼠作为对照,随机分配后行假手术或I/R手术,结扎冠状动脉左前降支45 min(缺血)、松开结扎线4 h(再灌注)。通过聚合酶链式反应(PCR)检测WT鼠I/R手术与假手术后4 h,心肌HSPA12B mRNA的表达水平;通过2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法测定I/R手术后4 h,WT鼠与Tg鼠的心肌梗死面积;通过免疫印迹法检测WT鼠与Tg鼠分别行I/R手术与假手术的4组心肌中Bcl-2和Bax蛋白水平。结果 I/R损伤引起WT鼠心肌HSPA12B mRNA表达水平增高。在共同经历I/R损伤后,Tg鼠较WT鼠的心肌梗死面积缩小,并且Tg鼠心肌组织抗凋亡能力(Bcl-2/Bax比值)明显高于WT鼠。结论高表达HSPA12B可能通过减少细胞凋亡,减轻心肌I/R损伤,发挥心肌保护的功能,提示HSPA12B可能是干预心肌I/R损伤的潜在靶点。     

右美托咪定对心内直视手术患者免疫功能的影响

目的 观察右美托咪定对心肺转流(CPB)心内直视手术患者围术期免疫功能的影响.方法 择期全身麻醉下CPB心内直视手术的患者50例,随机均分为右美托咪定组(D组)和对照组(C组).D组于麻醉诱导开始时给予右美托咪定0.8μg·kg-1·h-1泵注,C组给予等容量生理盐水.于麻醉诱导前10 min(T0)、CPB开始前1 min(T1)、CPB结束后1 min(T2)和气管拔管后即刻(T3)抽取外周血,用流式细胞仪检测T淋巴细胞(CD3+、CD4+、CD8+)和自然杀伤细胞(CD16+/CD56+)水平.结果 与T0时相比,两组T1-T3时CD3+、CD4+、CD8+、CD16+/CD56+水平降低(P＜0.05);与C组相比,D组T1-T3时CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+及CD16+/CD56+水平增高(P＜0.05).结论 CPB下心内直视手术患者围术期使用右美托咪定可减轻免疫抑制.     

褐藻糖胶抑制人肝癌细胞HepG2增殖的机制

目的:探讨褐藻糖胶对人肝癌细胞株HepG2体外增殖的相关机制。方法:采用MTT法测定不同浓度褐藻糖胶对人肝癌细胞株HepG2增殖的抑制作用,计算细胞生长抑制率;将0、10、100、500 μg/ml的褐藻糖胶作用于HepG2细胞,48 h后光镜观察细胞形态改变,用Hoechst染色法和琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡;Western blot检测cyclinD1和拓扑异构酶IIα(topoisomerase IIα,TopoIIα)表达的改变。结果:褐藻糖胶具有抑制人肝癌细胞HepG2增殖的作用,呈剂量依赖性。不同浓度褐藻糖胶作用HepG2细胞后,500 μg/ml组较其他浓度组光镜下和Hoechst 33258染色均呈现较明显细胞形态改变,100 μg/ml和500 μg/ml组均检测出DNA梯形条带。褐藻糖胶也能降低细胞增殖生物标志蛋白cyclinD1和TopoIIα的蛋白表达。结论:褐藻糖胶抑制人肝癌细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与褐藻糖胶抑制细胞增殖的生物标志蛋白cyclinD1和TopoIIα表达有关。