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目的 探索细粒棘球蚴重组蛋白HIS-CTLA-4IgV-EgG1Y162-2的最佳诱导表达条件,并对其蛋白结构进行预测。方法 构建p ET30a-CTLA-4IgV-EgG1Y162-2重组质粒,将其转化至Ecoli.BL21(DE3)细菌中,选择不同的时间段和温度,用不同浓度的IPTG进行诱导蛋白表达。将得到的菌液通过超声破碎,经离心后用SDS-PAGE分别分析上清和沉淀中重组蛋白HIS-CTLA-4IgV-EgG1Y162-2的表达情况。Western Blot鉴定重组蛋白表达。鉴定成功后进行大量诱导表达。采用生物信息学的方法,使用在线软件SWISS MODEL对HIS-CTLA-4IgV-EgG1Y162-2蛋白三维结构进行预测。结果 HIS-CTLA-4IgV-EgG1Y162-2重组蛋白在28℃条件下,诱导4 h,IPTG的浓度为0.2 mmol/L时可溶性蛋白表达量达到最大。蛋白的相对分子量约为29 kD,结果与预期相符。其蛋白三维结构的预测与2×44.1.A结构的相似程度为78.13%。结论 探索出HIS-4IgV-EgG1Y162-2重组蛋白最佳诱导表达条件,并成功预测... 相似文献
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目的:将优化的EgA31-EgG1Y162抗原基因构建于pET30a上,诱导蛋白表达,SDS-PAGE鉴定蛋白表达效果,用生物信息学软件分析优化的EgA31-EgG1Y162抗原序列,为构建高效的疫苗奠定理论基础。方法:运用ProtParam,DNAstar,E.coli Codon Usage Analyzer等多种生物信息学软件分析优化后EgA31-EgG1Y162蛋白的理化性质,比较其优化前后序列的异同点及抗原表位分布情况等。结果:EgA31-EgG1Y162蛋白属于不稳定性蛋白且亲水性蛋白,通过网上在线软件分析,优化序列的密码子中不含利用率低的密码子。表位预测分析确定6个T细胞表位的氨基酸区域1~15、86~97、177~193、359~388、305~319、344~358和7个B细胞表位为102~112、172~204、318~334、343~353、394~409、415~431、443~458。结论:多价EgA31-EgG1y162融合抗原蛋白的优化序列中不含利用率低的密码子,且T和B细胞表位未受影响,为重组蛋白体外的有效表达奠定实验基础,对包虫病的多价表位疫苗研究具有... 相似文献
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目的:研究我国城镇居民医疗需求的影响因素以提高医疗资源的利用效率。方法:利用我国30个省市2003—2012年的面板数据,从经济因素、人口结构和环境因素三个方面对其进行了实证研究。结果:可支配收入、医疗价格、医疗保险、废水排放和生活烟尘对城镇居民的医疗需求有显著影响。结论:提高医疗资源利用效率的关键在于提高居民的支付能力和改善城市废水污染。 相似文献
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目的 研究食管癌患者应用紫杉醇联合卡铂同步放化疗的临床效果。方法 选取2020年1月—2022年1月郑州大学第一附属医院放疗科接受治疗的食管癌患者120例,随机分为对照组和实验组各60例,对照组应用卡铂注射液开展同步放化疗治疗,实验组在对照组基础上联合应用紫杉醇注射液治疗,治疗2个周期后,以疾病整体治疗效果、血清肿瘤标志物、1年内生存、复发情况以及不良反应情况作为观察指标,对比组间治疗效果。结果 治疗后实验组和对照组治疗有效率分别为75.00%、56.67%,实验组有效率更高,差异有统计学意义(P<0.05);治疗前两组肿瘤标志物血清癌胚抗原(CEA)、糖类抗原19-9(CA19-9)水平比较(P>0.05),治疗后均显著下降,且实验组CEA、CA19-9水平分别为(4.01±0.18)μg/L及(35.88±0.65)μ/mL,均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);实验组1年内生存率95.00%较对照组高,而复发率5.00%则较对照组更低,差异有统计学意义(P<0.05);实验组、对照组治疗期间不良反应发生率分别为21.67%、16.67%,差异无统... 相似文献
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目的采用生物信息学的方法,应用相关软件对EgG1Y162-2和CTLA-4IgV-EgG1Y162-2蛋白的氨基酸序列进行分析,了解其理化性质及结构特点,预测并比较其抗原表位,为CTLA-4IgV-EgG1Y62-2蛋白作为包虫病表位疫苗的研究奠定基础。方法利用ProtParam在线软件分析EgG1Y162-2和CTLA-4IgV-EgG1Y162-2蛋白的理化性质;运用DNAstar中的protean软件与在线SOPMA软件预测EgG1Y162-2和CTLA-4IgV-EgG1Y162-2蛋白的二级结构;应用I-TASSER在线软件预测并比较EgG1Y162-2和CTLA-4IgV-EgG1Y162-2蛋白的三级结构,并使用BepiPred1.0,IEDB等软件对其T/B细胞抗原表位进行预测与分析。结果预测EgG1Y162-2蛋白由69个氨基酸组成,为稳定蛋白,具有亲水性。二级结构中的α螺旋、β-折叠、β-转角与无规则卷曲分别占7.69%、30.77%、15.38%和46.15%。预测的3条T细胞优势表位分别是1-18、21-43和47-62位氨基酸,2条B细胞优势抗原表位分别是9-28与57-69位氨基酸;CTLA-4IgV-EgG1Y162-2蛋白由208个氨基酸组成,稳定蛋白,具有亲水性。二级结构中的α螺旋、β-折叠、β-转角与无规则卷曲分别占13.46%、32.21%、7.69%和46.63%。预测的3条优势T细胞表位分别是143-154、165-177和183-199位氨基酸。2条B细胞优势抗原表位分别为151-167和197-205位氨基酸。结论EgG1Y162-2和CTLA-4IgVEgG1Y162-2蛋白均存在优势T抗原表位与B抗原表位,且T/B联合表位存在高度重合。说明CTLA-4IgV与EgG1Y162-2蛋白通过Linker序列连接后几乎未对EgG1Y162-2蛋白的优势表位产生影响。因此,将CTLA-4IgV基因与特异性抗原EgG1Y162-2基因进行融合表达可能会增强疫苗的免疫效果,这对囊型包虫病多价复合疫苗的研究具有重大意义。 相似文献
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目的 建立一种定量检测肝细胞癌(HCC)组织肝细胞核因子4α(HNF4α)mRNA的方法。方法 取手术获得的HCC组织16例,提取总RNA,逆转录PCR扩增获得全长HNF4α mRNA对应cDNA产物,经TA克隆后,测序确认。根据获得序列,设计检测HNF4α mRNA 引物及MGB荧光探针。以体外转录HNF4α mRNA为标准品,建立一步法 逆转录荧光定量PCR检测方法,同时设定β-actin mRNA为内参对照,最终计算得到组织HNF4α mRNA水平。采用免疫组化染色检测HNF4α蛋白表达,比较HNF4α mRNA水平与HNF4α蛋白表达的对应结果。结果 HCC组织HNF4α mRNA定量标准曲线斜率为-3.237,相关系数r值达0.994,β-actin mRNA定量标准曲线斜率为-3.037,相关系数r值为0.996,表明建立的方法可用于检测HNF4α mRNA定量(V-4α值),16例HCC组织HNF4α mRNA与HNF4α 蛋白表达结果呈一致性对应关系。结论 我们初步成功建立了定量检测HCC组织HNF4α mRNA水平方法,其意义还需要进一步研究。 相似文献
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目的探讨肝细胞癌患者组织中HNF4a蛋白表达与无病生存期和总生存期的关系。方法免疫组化检测肝癌组织中HNF4a蛋白,观察172例患者肝细胞癌组织中HNF4a的表达情况;HNF4a蛋白表达水平与各临床病例参数间的关系、患者无病生存期和总生存期的关系,建立回归模型。结果 HNF4a阳性率为81.98%(141/172),HNF4a基因表达与患者性别、年龄、HBsAg、肝硬化、肿瘤大小、TNM分期以及转移复发无相关性(P0.05),与AFP、肿瘤病理分级存在相关性(P0.05)。HNF4a蛋白高表达患者中无病生存期为22个月,HNF4a低表达患者无病生存期为4个月,差异有统计学意义(P0.05)。总生存期分析显示,HNF4a蛋白表达是其风险因素(P0.05)。结论 HNF4a蛋白低表达肝癌患者生存期降低的风险显著升高,HNF4a表达与肝细胞发生发展密切相关,有可能是肝细胞癌转移复发以及预后的参考指标。 相似文献
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目的:探讨支持性护理联合Orem自理模式对鼻咽癌化疗病人自我护理能力、毒副反应及生存质量的影响。方法:采用整群便利抽样法选取2018年1月—2020年1月医院收治的鼻咽癌化疗病人146例为研究对象,随机分为研究组与对照组各73例。对照组实施常规护理,研究组实施支持性护理联合Orem自理模式干预,比较两组病人的自我护理能力、毒副反应及生存质量。结果:干预后,研究组病人自我护理能力评分明显高于对照组(P<0.05);研究组病人的毒副反应评分明显低于对照组(P<0.05);研究组病人生存质量评分明显高于对照组(P<0.05)。结论:将支持性护理联合Orem自理模式应用于鼻咽癌化疗病人护理中,可明显提高病人自我护理能力,缓解病人毒副反应,改善病人生存质量。 相似文献