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基质金属蛋白酶抑制因子-1 小干扰RNA载体构建及对肝星状细胞沉默效应的研究 总被引：2，自引：0，他引：2
目的构建TIMP-1小干扰RNA(siRNA)真核表达载体并观察其对肝星状细胞株TIMP-1 mRNA表达的作用。方法根据siRNA设计原则,在TIMP-1 mRNA序列中选择2个特异性靶序列(447～465 nt、552～540 nt)及1条无关对照序列,体外合成对应发卡样DNA片段,将其克隆入pGEM-T连接载体,BamH I和Xho I分别双酶切pGEM-T及表达载体pRNAT-U6.2,胶回收粘末端将特异序列定向亚克隆构建TIMP-1 pRNAT-U6.2/siRNA载体,用脂质体包裹转染入T6细胞,采用RT-PCR检测TIMP-1 mRNA表达水平的变化。结果所构建的TIMP-1 pRNAT- U6.2/siRNA载体,经酶切鉴定与测序,结果显示特定位点靶序列与设计序列完全一致;转染T6细胞后,TIMP-1 mRNA表达明显降低。结论成功构建TIMP-1 siRNA载体TIMP-1 pRNAT U6.2/siRNA,转染T6细胞可以有效抑制TIMP-1 mRNA的表达。 相似文献
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我们通过收集在湘西民间土家族散在传承的药筒滚熨疗法,经过系统整理,逐步规范,全面阐述土家族药筒滚熨疗法的概念、适应症、操作程序、评价、操作注意事项和意外情况及处理措施,规范土家族药筒滚熨疗法的临床操作,保障运用安全,为进一步推广奠定基础。 相似文献
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