HSV-tk/GCV系统对小鼠肝癌细胞体外杀伤效应的研究

目的:研究HSV-tk/GCV系统对小鼠肝癌细胞的体外杀伤作用.方法:利用重组DNA技术,将HSV-tk基因亚克隆至逆转录病毒载体(pLNCTK)中,在LipofectAMINE介导下,转染PA317包装细胞,G418筛选,直至出现抗性克隆,扩大培养,用NTH3T3细胞测定病毒滴度,将重组逆转录病毒感染小鼠肝癌细胞MM45T.Li,G418筛选,直至出现抗性克隆,挑取阳性克隆,扩大培养,命名为MM45T.Li/TK.PCR,RT-PCR对HSV-tk基因修饰的MM45T.Li细胞进行鉴定,然后观察CCV对MM45T.Li/TK和不同比例TK~ 与TK~-混合细胞的杀伤作用.结果:重组逆转录病毒滴度为5×10~5CFU/ml,PCR及RT-PCR分析证明HSV-tk基因已整合至MM45T.Li细胞基因组中,并在mRNA水平上的表达.MM45T.Li/TK与未转基因的原肿瘤细胞,二者的生长速度与形态结构无明显差别.MM45T.Li/TK细胞对CCV高度敏感,即低浓度GCV(1mg/L)处理MM45T.Li/TK细胞3d,即可将其杀死.旁观者效应显示将25%MM45T.Li/TK细胞与75%MM45T.Li混合,发现90%以上的细胞被杀死.结论:小鼠肝癌细胞对HSV-tk/CCV系统高度敏感,并具有明显的旁观者效应.     

联合免疫基因与自杀基因治疗肿瘤研究进展

恶性肿瘤已成为威胁人类生命的主要疾病之一。近年来，虽然对于恶性肿瘤的治疗如手术。化疗、放疗和免疫疗法均取得了很大的进展，但对于中晚期、复发性及转移性肿瘤的疗效仍然不尽理想。随着分子生物学及其相关技术的发展，基因治疗已成为当前令人关注的研究领域。美国国立卫生院（NIH）及食品药物管理局（rpA）于1990年9月首次批准严重联合免疫缺陷症（SCI）病孩进行临床治疗至今，国际上约有30O多项临床方案，3000多病人接受临床基因治疗，其中主要为恶性肿瘤。但目前尚无肯定临床疗效的报道。因此科学家们便理性地认识到基因治疗尚…     

绿脓杆菌菌苗对44例肺癌化疗期间抗感染的观察

绿脓杆菌菌苗对４４例肺癌化疗期间抗感染的观察孙文长郝德治唐展云周喜荣李丽云李志平钟敏牟希亚研究采用的菌苗由一株低毒带甘露糖敏感血凝菌毛的绿脓杆菌（ＰＡ－ＭＳＨＡ）所制备。对照组患者单用化疗，观察组患者化疗再加用ＰＡ－ＭＳＨＡ。方法（１）病例选择：所有...     

实验性肿瘤的联合基因治疗研究

恶性肿瘤基因治疗的临床研究已有10余年，但疗效尚未确定。治疗策略也不下12种，但何种策略为佳尚无定论。目前采用的策略多数为单一基因治疗，鉴于肿瘤的发生可能涉及多种基因及多种因素，发病过程也是多步骤的，该研究探索多种基因及因素的配合进行实验性肿瘤的联合基因治疗研究。首先克隆一系列的治疗基因，构建不同载体及调控原件，     

含mIL-12基因多顺反子逆转录病毒载体构建及其在肝癌细胞中的表达

构建含小鼠白细胞介素１２双亚基及新霉素磷酸转移酶基因多顺反子逆转录病毒载体,并观察其在小鼠肝癌细胞中的表达。方法利用脑心肌炎病毒（ＥＭＣＶ）及脊髓灰质炎（Ｐｏｌｉｏ）病毒内核糖体进入位点（ＩＲＥＳ）,连接ｍＩＬ－１２ｐ４０及ｐ３５ｃＤＮＡｓ和筛选基因新霉素磷酸转移酶（ＮｅｏＲ）,克隆至逆转录病毒载体ｐＧＣＥＮ中,使三个基因同时受逆转录病毒载体５’端ＬＴＲ启动子控制,转录至同一ｍＲＮＡ转录本上,通过     

实验性肿瘤的联合基因治疗研究

恶性肿瘤基因治疗的临床研究已有10余年,但疗效尚未确定。治疗策略也不下12种,但何种策略为佳尚无定论。目前采用的策略多数为单一基因治疗,鉴于肿瘤的发生可能涉及多种基因及多种因素,发病过程也是多步骤的,该研究探索多种基因及因素的配合进行实验性肿瘤的联合基因治疗研究。首先克隆一系列的治疗基因,构建不同载体及调控原件,然后进行不同基因的联合治疗作用,并与放射治疗相结合,最后还筛选新的肿瘤治疗侯选基因,旨在为临床提供更有效的肿瘤基因治疗策略和方案。     

基因修饰人肝癌和胃癌"瘤苗"及实验性肿瘤联合基因治疗

恶性肿瘤基因治疗的临床研究已有10余年,但疗效尚未确定。治疗策略也不下十余种,但何种策略为佳尚无定论。目前采用的策略多数为单一基因治疗,而肿瘤的发生可能涉及多种基因及多种因素,发病过程也是多步骤的。本研究建立一种细胞因子基因工程人肝癌和胃癌细胞“瘤苗”,用于经手术切除的肝癌或胃癌患者,消灭微小残存癌细胞,     

绿脓杆菌MSHA菌毛株菌苗对恶性淋巴瘤的治疗及其机制初探

绿脓杆菌MSHA菌毛株菌苗是一种新型的微生物免疫调节剂，首次应用于恶性淋巴瘤化疗的辅助治疗。结果显示：在化疗同时进行菌苗治疗组其治疗有效率（95．56％）明显高于仅进行化疗的对照组（69．77％），而感染率（17．78％）则明显低于对照组（37．21％），P值均小于0．05。菌苗治疗组IL－2水平，NK细胞活性及CD4 ／CD8 比值也明显高于对照组，且其抵抗多种不同菌属的革兰氏阴性杆菌抗体水平亦显著高于对照组，提示该菌苗是通过调整或增强患者自身细胞免疫或体液免疫水平，达到抗肿瘤．抗感染的功效。作者认为该菌苗是恶性淋巴瘤患者化疗的良好辅助药物。     

人TNF-α基因修饰成纤维细胞的抗肿瘤研究

近年来,白细胞介素4(IL-4)基因治疗的研究取得了很大进展并已试用于临床治疗晚期肿瘤.我们的实验也曾表明,IL-4基因转染的肿瘤细胞所制备的瘤苗对于实验性肺转移荷瘤小鼠具有一定疗效,该作用可能与IL-4基因的转染与表达对肿瘤细胞免疫原性的增强及IL-4对机体抗肿瘤免疫功能尤其是T细胞功能的激发有关;关于肿瘤     

腺病毒介导的胞嘧啶脱氨酶基因对小鼠肝癌的治疗

目的 探讨腺病毒介导的胞嘧啶脱氨酶基因对小鼠肝癌的基因治疗效果。方法 分离纯化ＡｄＣＤ,体外实验观察ＩＣ５０,旁观者效应及凋亡现象。在体内,ＡｄＣＤ瘤内注射并腹腔注射５ＦＣ,观察ＡｄＣＤ／５ＦＣ系统对肝瘤荷瘤小鼠的抗肿瘤效应。结果 当ＭＯＩ＝１００时,ＡｄＣＤ感染的ＭＭ４５Ｔ．Ｌｉ细胞对５ＦＣ敏感,ＩＣ５０〈５０μｍｏｌ／Ｌ。当ＡｄＣＤ感染的ＭＭ４５Ｔ．Ｌｉ细胞占１０％时,可有７２％细胞死亡,Ａｄ