12-烷基化壳聚糖纳米粒包裹反义内皮素转换酶核酸表达质粒在哮喘基因治疗中的特征

目的:气道给予12-烷基化壳聚糖纳米粒包裹的反义内皮素转换酶核酸表达质粒,观察对卵清蛋白致敏的小鼠变应性气道炎症的影响,并与裸DNA组小鼠作比较。方法:实验于2004-03/2006-02在广州医学院第一附属医院海印分院15楼实验室完成。①40只Balb/c小鼠采用随机数字法分为4组,每组10只。②12-烷基化壳聚糖纳米粒的制备:将12-烷基化壳聚糖纳米絮状物溶于0.05mol/L醋酸钠/0.05mol/L醋酸溶液中,浓度0.02wt%,将反义内皮素转换酶核酸溶于25mmol/L的Na2SO4溶液中,浓度0.01wt%,按烷基化壳聚糖与反义内皮素转换酶核酸按不同质量比制备包裹反义内皮素转换酶核酸的12-烷基化壳聚糖纳米粒。③凝胶阻滞实验:为检测pH值对DNA结合力的影响,在pH=3,4,5,6,7,8时,反义内皮素转换酶核酸与12-烷基化壳聚糖纳米粒按质量比为1∶2,4,8的比例混合;为检测不同质量比时12-烷基化壳聚糖纳米粒对DNA结合力的影响,在pH=6时,反义内皮素转换酶核酸与12-烷基化壳聚糖纳米粒按质量比为1∶0.5,1,2,4,8,16,32的比例混合;反义内皮素转换酶核酸的浓度恒定为1g/100L,10g/L琼脂糖凝胶电泳60V电泳1h。④包裹反义内皮素转换酶核酸的12-烷基化壳聚糖纳米粒治疗组(纳米粒治疗组)、卵清蛋白致敏激发组、卵清蛋白致敏激发并给予裸DNA组(裸DNA组)于第0天与第14天每只小鼠分别腹腔注射卵清蛋白致敏液0.2mL,生理盐水对照组注射等体积的生理盐水;前3组于第24,25,26天,以10g/L卵清蛋白溶液8mL雾化吸入。生理盐水对照组用等体积生理盐水雾化作为对照。纳米粒治疗组、卵清蛋白致敏激发组和裸DNA组于激发前24h分别给予气道灌注包裹反义内皮素转换酶核酸的12-烷基化壳聚糖纳米粒75μL、生理盐水75μL和反义内皮素转换酶核酸5μg加生理盐水(总量75μL),生理盐水对照组灌注生理盐水75μL。⑤末次激发后24h进行支气管肺泡灌洗,计算支气管肺泡灌洗液中细胞总数、分类计数。肺组织病理切片,苏木精-伊红染色,观察各组小鼠肺组织的病理变化。ELISA法检测肺组织匀浆上清白细胞介素4、白细胞介素5、干扰素-γ和内皮素1水平。结果:小鼠40只小鼠全部进入结果分析。①凝胶阻滞实验结果:12-烷基化壳聚糖纳米粒在pH7以下均能很好地与反义内皮素转换酶核酸结合,但是在pH为8时,显示结合不完全;在12-烷基化壳聚糖纳米粒与反义内皮素转换酶核酸质量比为1∶1时,全部反义内皮素转换酶核酸被结合。②各组小鼠支气管肺泡灌洗液细胞学检查结果:与生理盐水对照组小鼠相比,卵清蛋白致敏激发组、裸DNA组和纳米粒治疗组细胞总数、Eos百分比与Eos绝对计数均升高(P<0.01)。纳米粒治疗组上述3种指标均显著低于卵清蛋白致敏激发组和裸DNA组小鼠(P<0.01或P<0.05)。③各组小鼠肺组织病理改变:纳米粒治疗组肺部炎症改变较卵清蛋白致敏激发组和裸DNA组有所减轻,但较生理盐水对照组还是有所加重。④各组小鼠肺匀浆上清细胞因子检测结果:生理盐水对照组内皮素1、白细胞介素4,5水平均明显低于纳米粒治疗组、卵清蛋白致敏激发组和裸DNA组(P<0.05或P<0.01),而纳米粒治疗组以上各细胞因子水平则明显低于卵清蛋白致敏激发组和裸DNA组[白细胞介素4各组依次为:(70.7±17.9),(107.7±20.6),(108.66±19.0)ng/L,白细胞介素5各组依次为:(55.4±7.0),(64.3±8.5),(66.4±6.9)ng/L,内皮素各组依次为:(18.5±1.4),(28.9±2.3),(27.1±1.6)ng/L,P<0.05或P<0.01]。结论:①12-烷基化壳聚糖纳米粒包裹的反义内皮素转换酶核酸能够成功在小鼠气道表达,通过RNAi干扰内皮素转换酶生成,阻滞大内皮素转换为活性内皮素,减少内皮素的合成,减轻变应性气道炎症。②而卵清蛋白致敏激发并给予裸DNA组与卵清蛋白致敏激发组比较差异无显著性,表明裸DNA难以通过气道内注入在活体动物气道表达。     

Clinical Observation and Mechanism Study on Treatment of Senile Dementia with Naohuandan(脑还丹)

Seniledementia(SD),namely,Alzhei mer sdisease(AD)isakindofdegenera tioninthenervesystemthatoftenoccursinmid oldagedpersons,beingoneofthecom monestdiseasethatinducesdementia,andmainlycharacterizedbyintegralfunctionaldisorderofcognition,especiallythememorydisorder,changesinbehaviorandpersonali ty,aswellasaffectationofdailylivingca pacity(1).Alongwiththedevelopmentoftheagingpopulationintheworld,anincreasingtrendwasshownintheoccurrenceofAD.Becauseofitsunclearpathogenesis,theWesternmedicalapproa…     

灯盏细辛注射液治疗慢性肺原性心脏病急性加重期的临床研究

目的观察灯盏细辛注射液对慢性肺原性心脏病急性加重期患者的血气分析及血液流变学的影响。方法将90例患者随机分为两组，对照组45倒按西药常规治疗，治疗组在常规治疗的基础上加用灯盏细辛注射液（1次／d，40mL／次，15d为1个疗程），并于治疗前后进行血气分析和血液流变学检查。结果治疗后动脉血氧分压、二氧化碳分压，与治疗前相比两组均有显著性差异（P〈0．01）．组间比较也有显著性差异（P〈0．01或P〈0．05）；治疗后全血黏度、血浆黏度和血细胞比容，与治疗前相比两组均有显著性差异（P〈0．01）．组间比较也有显著性差异（P〈0．01或P〈0．05）。结论灯盏细辛注射液能够改善慢性肺原性心脏病急性加重期患者血气分析及血液流变学的各项指标，能改善临床症状。提高生活质量。     

反义内皮素转换酶核酸纳米粒对变应性气道炎症的作用

目的 观察气管给予12-烷基化壳聚糖纳米粒(12-ACSs)包裹的反义内皮素转换酶(ECE)核酸表达质粒对小鼠变应性气道炎症的影响.方法 将40只健康雌性Balb/c小鼠按完全随机设计原则分为4组,每组10只,分为健康对照(N)组、OVA致敏激发并给予包裹反义ECE核酸的12-ACSs(NM)组、OVA致敏激发气道炎症模型(As)组及OVA致敏激发并给予裸反义ECE核酸(DNA)组.NM组、As组、DNA组在致敏后于首次激发前24 h分别通过气管灌注包裹反义ECE核酸的12-ACSs 100μl生理盐水100μl和反义ECE核酸5μg加生理盐水(总量100μl),N组用等体积生理盐水处理.末次激发后24 h收集BALF,计算BALF中细胞总数、分类计数.HE染色观察各组小鼠肺组织的病理变化.ELISA法检测肺组织匀浆、脾细胞培养卜清液白细胞介素(IL)-4、5、10、13、干扰素-γ(IFN-γ)和内皮素-1(ET-1)水平.流式细胞仪分别检测分泌IL-4、IFN-γ和IL-10脾细胞比例.对各组数据进行正态检验和单因素方差齐性检验,采用LSD法进行两两比较.结果 NM组小鼠BALF中细胞总数为(5.4±0.6)×105/ml、嗜酸性粒细胞为(1.8±0.4)×105/ml,均明显低于As组[分别为(8.5±0.9)×105/ml、(3.8±0.6)×105/ml]和DNA组[分别为(8.3±1.1)×105/ml、(3.8±0.5)×105/m1],均P<0.01;NM组小鼠肺组织的病理损害明显轻于As组和DNA组.肺匀浆N组ET-1水平为(11.7±1.7)ng/L,明显低于NM组的(18.5±1.4)ng/L、As组的(28.9±2.3)ng/L和DNA组的(27.1±1.6)ng/L,均P<0.01,而NM组ET-1水平则明显低于As组和DNA组(均P<0.01),As组和DNA组差异无统计学意义.N组IL-5水平均明显低于NM组、As组和DNA组(均P<0.01),而NM组IL-5水平则明显低于As组和DNA组(均P<0.05),Ag组和DNA组差异无统计学意义.IL-4、IL-13结果与IL-5、ET-1相似.各组IFN-γ的水平差异无统计学意义.NM组IL-10水平高于As组和DNA组(均P<0.01),与N组比较差异无统计学意义,脾细胞培养上清液细胞因子检测结果与肺匀浆结果相似.4组中CD4、IL-4表达均为阳性的细胞表达率分别为N组3.1%、NM组3.3%、As组5.9%、DNA组6.6%;表达IFN-γ、CD4阳性的细胞表达率分别为N组1.2%、NM组1.6%、As组1.7%、DNA组1.6%;表达IL-10、CD4、CD25阳性的细胞分别为N组1.9%、NM组4.3%、As组3.4%、DNA组3.1%.结论 气管内给予包裹反义ECE核酸表达质粒的12-ACSs纳米粒,可减少ET-1、IL-4、IL-5、IL-13的合成,增加IL-10的分泌,减轻变应性气道炎症.     

支气管哮喘和慢性阻塞性肺病患者血清ICAM-1、IL-8水平的变化及吸入皮质激素作用的对比研究

目的：探讨细胞间粘附分子1（ICAM－1）、白细胞介素－8（IL－8）在支气管哮喘（哮喘）、慢性阻塞性肺病（COPD）发病机制中的作用和吸入皮质激素对哮喘、COPD患者的影响。方法：60例COPD急性发作期患者随机分为一般治疗组30例（COPD I组）和加用吸入激素组30例（COPDⅡ组），哮喘急性发作期15例及健康对照组30例。各病例组分别于入院时及治疗2周后取静脉血4ml，同时测峰值呼气流速（PEF）。IL－8采用放免法、ICAM－1采用ELISA法测定。结果：3组治疗前后ICAM－1、IL－8水平均显著高于对照组（P＜0．01或Ｐ＜0．05），其PEF显著低于对照组（P＜0．01）；治疗后ICAM－1、IL－8水平显著低于急性发作期（P＜0．01或P＜0．05），其PEF有明显改善（P＜0．01）；哮喘治疗前后ICAM－1、IL－8水平显著低于COPDⅠ、Ⅱ组治疗前后（P＜0．01或P＜0．05），其PEF显著高于COPDⅠ、Ⅱ组；COPD I组治疗前后与COPDⅡ 组治疗前后比较ICAM－1、IL－8水平差异无显著性（P＞0．05），但COPDⅡ组治疗后PEF改善显著优于COPDⅠ组（P＜0．01）。结论：ICAM－1、IL－8在哮喘、慢性阻塞性肺病气道炎症的形成中起着重要作用，哮喘急性发作期短期吸入皮质激素可抑制ICAM－1、IL－8表达, 而在COPD急性发作期患者短期吸入皮质激素并不能抑制ICAM－1、IL－8的表达，但可以明显改善PEF。     

表皮生长因子受体对支气管哮喘大鼠气道炎症的影响

目的 探讨表皮生长因子受体(EGFR)在支气管哮喘(简称哮喘)大鼠急慢性气道炎症的作用以及阻断EGFR的激活对气道炎症的影响.方法 将45只sD大鼠按随机数字表法分为对照组(A1、A2、A4组)、哮喘组(B1±、B2、B4组)和治疗组(C1、C2、C4组),每组5只,其中1、2和4分别表示激发1、2和4周.治疗组在每次卵清白蛋白激发前1 h给予酪氨酸激酶抑制剂(TKI)金雀异黄素(genistein)20 mg/kg腹腔注射.末次激发后收集BALF行细胞总数及分类计数.肺组织HE染色并行气道黏膜下炎症评分.免疫组织化学及免疫荧光染色观察气道上皮EGFR表达及其酪氨酸磷酸化(活化的ECFR)程度.两组数据间的比较采用单因索方差分析,多组间比较采用g检验.结果 (1)B组各时段BALF中细胞总数及各类细胞绝对计数均高于A组相应时段组(均P<0.05),嗜酸粒细胞在2周末达高峰;C组各时段BALF中细胞总数[分别为(48±6)、(51±9)和(57±12)×105]及嗜酸粒细胞计数[分别为(2.5±0.5)、(2.7±0.6)和(2.6±0.5)×105]均低于相应B时段组[细胞总数分别为(70±10)、(88±8)和(72±10)×105>,嗜酸粒细胞数分别为(5.6±0.8)×105、(6.6±0.6)×105和(4.3±0.4)×105],差异有统计学意义(均P<0.05);C组各时段BALF中中性粒细胞及淋巴细胞计数与相应时段B组比较差异无统计学意义;C1组BALF中上皮细胞数[(2.5±0.5)×105]低于B1组[(4.9±0.7)×103](q=4.671,P<0.05),C4组BALF中上皮细胞数[(5.7±1.2)×105]高于B4组[(4.3±0.4)×105](q=4.012,P<0.05).(2)C4组气道黏膜下炎症评分(3.6±0.6)低于B4组(5.1±0.6)(q=4.923,P<0.05).(3)B组各时段各级气道EGFR蛋白表达均高于相应时段A组(均P<0.01);气道上皮EGFR活化程度A组分别为(1.84±0.26)、(1.43±0.29)和(1.67±0.32),B组分别为(3.69±0.43)、(3.57±0.29)和(4.46±0.47),C组分别为(3.12±0.24)、(3.00±0.28)和(2.69±0.54),B组各时段气道上皮EGFR活化程度均高于相应时段A组(均P<0.05);C组各时段气道上皮EGFR活化程度均弱于相应时段B组(均P<0.05).(4)相关分析显示气道上皮EGFR表达及其活化程度均与BALF中细胞总数、嗜酸粒细胞、中性粒细胞及淋巴细胞绝对计数,以及气道炎症评分呈明显正相关.结论 哮喘大鼠气道上皮EGFR参与气道炎症,TKI金雀异黄素有一定抑制哮喘大鼠急慢性气道炎症的作用.     

2011年成都某综合医院呼吸内科门诊疾病谱调查

目的通过调查我院呼吸内科门诊疾病构成,初步预测成都市综合医院呼吸内科门诊疾病谱。方法随机收集四川省人民医院2011年1月1日至2011年12月31日呼吸内科门诊电子病历,根据人民卫生出版社《内科学》第七版并结合初诊医生的初步诊断,获得各种疾病的构成。结果共收集呼吸内科门诊患者14900例,平均年龄（46.3±17.2）岁,男女性患者比例基本相当,23～48岁及53～68岁为呼吸内科门诊就诊的高峰年龄段。呼吸内科门诊最常见的十大病因依次为：急性气管-支气管炎、胸痛、慢支炎、COPD、亚急性咳嗽、慢性咳嗽、上呼吸道感染、肺炎、各种胸闷气紧、支气管哮喘及咯血。部分疾病存在季节性波动。结论本研究首次预测成都市综合医院呼吸内科门诊疾病谱,具有一定代表性,亦提示我们应当警惕和重视的疾病和人群,这也为呼吸系统疾病的防治提供了理论依据。     

参麦注射液对慢性阻塞性肺病急性发作患者免疫功能的影响

目的探讨参麦注射液配合常规疗法治疗慢性阻塞性肺病（COPD）急性发作的疗效及其对免疫功能的影响。方法将80例COPD急性发作期患者随机分为常规疗法组（对照组）和联用参麦治疗组（治疗组）,治疗组在常规疗法的基础上联用参麦注射液治疗。观察两组免疫功能的变化。结果治疗组治疗后CD3、CD4、IgA、IgG较对照组升高明显（P〈0．01）。结论在常规疗法的基础上联用参麦注射液治疗COPD急性发作能改善免疫功能。     

老年慢性阻塞性肺疾病急性发作短程抗菌治疗可行性研究

目的探讨老年慢性阻塞性肺疾病急性加重(AECOPD)短程抗菌治疗的可行性。方法选取2009年9月～2011年9月我院住院的老年AECOPD患者80例,随机分为短程抗菌治疗组和长程抗菌治疗组各40例,均予莫西沙星静脉滴注0.4 g/d,短程治疗组疗程为7d,长程治疗组疗程为14d。观察两组患者的临床有效率、细菌清除率、住院病死率、不良反应发生率、二重感染率以及半年随访期间AECOPD发生率。结果两组患者在临床有效率、细菌清除率、住院病死率及半年随访期间AECOPD发生率方面差异无统计学意义(P>0.05);短程治疗组的不良反应发生率、二重感染率低于长程治疗组(P<0.05)。结论老年AECOPD患者行短程抗菌治疗是可行的,莫西沙星短程疗法对老年AECOPD具有良好的治疗效果和安全性,并可减少抗生素使用量及不良反应,降低二重感染率。