高分辨率熔解曲线技术用于结核分枝杆菌临床分离株异烟肼耐药性的快速检测

目的评价高分辨率熔解曲线分析技术(high-resolution melting curve,HRM)检测结核分枝杆菌异烟肼耐药性的应用价值。方法 1)通过传统比例法药敏实验对本实验室保存的49株结核分枝杆菌进行异烟肼耐药性分析。2)进一步对该结核分枝杆菌进行异烟肼耐药相关基因KatG基因和inhA基因进行异烟肼耐药决定区测序分析,筛查突变位点。3)根据筛查到的突变位点设计高分辨率熔解曲线分析所用的特异性引物,对异烟肼耐药基因耐药决定区进行高分辨率熔解曲线分析检测DNA突变,评估用高分辨率熔解曲线分析技术对结核分枝杆菌异烟肼耐药性检测的效率。结果 1)比例法药敏结果显示,49株实验菌株中20株为异烟肼耐药株,29株为异烟肼敏感株。2)测序分析结果显示:(1)KatG基因出现了4种突变形式,分别是234单位点突变;234、315双位点突变;234、463双位点突变;234、315、463三位点联合突变。(2)inhA基因检测到3种突变,即-8位、-15位、-152位。3)(1)对耐药株的基因突变进行分析发现:20株异烟肼耐药株中11株存在KatG基因第315位密码子的突变、占异烟肼耐药株的55%;6株存在inhA基因-15(4株)位碱基、-8(1株)位碱基、-152(1株)位碱基的突变,共占异烟肼耐药株的30%;2株同时存在基因KatG315密码子和inhA-15位碱基的突变,占异烟肼耐药株的10%;1株均未检测到KatG基因和inhA基因的突变,占异烟肼耐药株的5%。通过基因突变检测结核分枝杆菌异烟肼耐药性的敏感性为95%、特异性为100%。(2)用高分辨率溶解曲线检测实验菌株耐药基因突变的结果显示,18株存在基因突变,24株不存在基因突变,检测的灵敏度为94.7%、特异性为80%。(3)以高分辨率熔解曲线检测到突变为耐药的判断标准,检出19株为耐药株,24株为敏感株。以比例法药敏结果为参照,检测的灵敏度为95%、特异性为82.76%。结论高分辨率溶解曲线用于结核分枝杆菌对异烟肼耐药性的检测具有较好的灵敏度,耗时短,在异烟肼耐药结核病的快速诊断方面具有一定的应用价值。     

表达荧光蛋白卡介苗菌株的构建与应用及其qPCR定量方法的建立北大核心CSCD

目的构建稳定表达红、绿色荧光蛋白的卡介苗(Bacille Calmette-Guérin,BCG)菌株,并建立快速定量BCG细菌数的qPCR方法。方法电转化构建稳定表达红、绿色荧光蛋白的BCG菌株,比较其与野生菌株的生长曲线。将此荧光蛋白标记的BCG感染人源单核巨噬细胞系THP1细胞,用共聚焦显微镜观察感染吞噬效果。基于BCG 16SrRNA序列设计特异性引物,应用qPCR定量检测BCG细菌基因组DNA,根据细菌平板计数菌落数与qPCR循环数绘制标准曲线,建立qPCR定量BCG细菌数的方法。结果构建的荧光蛋白标记BCG菌株荧光信号强,生长曲线与野生菌株基本一致,共聚焦显微镜观察细菌感染细胞后呈现良好荧光效果。建立的qPCR检测方法能定量检测BCG细菌数量,重复试验中组内和组间的变异系数均小于3%。结论构建的卡介苗菌株稳定表达荧光蛋白。建立的qPCR方法重复性好,可用于对BCG菌株的快速计数。     

ASAP1基因影响结核易感性的研究进展

近年来,通过全基因组关联分析筛选结核病易感基因取得了丰硕成果,其中ASAP1作为新发现的结核易感基因引起了国内外广泛的关注。同时,关于ASAP1基因多态性影响人类结核易感性的生物学机制得到了初步的科学实验验证,为进一步高效精准地预防、控制和治疗人类结核病提供了可能。本文对ASAP1基因的功能和其多态性与结核病的相关性研究进行综述,初步总结ASAP1蛋白影响结核遗传易感的机制,为今后启发研究者充分考虑病原体、宿主、环境多因素及他们的相互作用来科学研究结核病易感性奠定基础。     

谈手足推拿按摩

1手足并行：只按摩脚，是不够的；手足并行，效果三倍人类的手部与足部同属末梢神经，功能与作用类似，同样都是脏腑的反射区，手部与脚部的病理按摩，同样具有保健与治疗的效果。依据西医的生理解剖，手部有非常密集的末梢神经，人的手部约有150万余的末梢神经，尤胜于脸部；而脚部分布的血管多于手部许多，是身体血管分布最密集之处，因此在神经反射的疗效上，手部尤胜于脚部。由中国易经观点来看，手段〕配合，以易经的阴阳来分析，“阳”主功能，主神经，主气；而“阴”主脏腑、主器质、主血液。手在上届阳，主气；脚在下属阴，主血。因…     

常见的美容推拿简介

爱美是人的天性 ,所谓“美容”也就是指美容主体通过容体的改造和自身的努力 ,使人体美的表现形态更趋于完美。推拿作为一种传统的医疗手法 ,属于当代自然美容的一个重要内容。通过各种行之有效的推拿手法 ,作用于体表 ,可通达肌里 ,促进体内气血的运行 ,改善人体的新陈代谢 ,增强脏腑功能 ,从而使人体表里一致 ,肌肤显示自然而健康的弹性和光泽 ,这就是当今人们所追求的健康美容。１护发推拿１．１指揉五经用两拇指端或食、中、无名指并拢 ,按照头顶部的督脉、膀胱经和胆经五条经 ,从前额、两颞部由前向后揉动至后枕部 ,可往返３～５遍。１…     

常见健美推拿介绍

1　乳房健美推拿胸乳的丰满圆耸是女性曲线美的重要标志之一。如每天自我按揉乳房 ,坚持数月 ,可使乳房保持良好弹性 ,既可促进其正常发育 ,又可预防和避免其松弛下垂。1.1　扩胸按大椎　先将双手指间交叉置于项后 ,双上肢同时作向右扩展 5～ 10次 ,再将手指并拢 ,分别按压大椎穴两侧 2 0次 ,头稍后仰 ,按压部有酸胀为宜。1.2　横推对擦乳房上下　用一手放在乳房上方 ,另一手放在乳房下方 ,进行横行对擦 30次 ,再换手交替操作。乳部上下可均匀涂上荷尔蒙油脂膏。1.3　直推乳房上下　用一手掌面在乳房上方向下直推乳房至乳根部 ,再沿原路线向…     

基于分枝杆菌感染免疫相关实验的微生物学毕业设计带教体会

毕业设计是大学教育过程中重要的实践教学环节。通过带教与分枝杆菌感染免疫相关的微生物学毕业设计,针对如何充分发挥学生主动性,从课题设计、实践操作、论文写作等多方面进行了心得探讨,以期提高学生的科研创新能力,激发科研兴趣,培养创新型科研人才。