饮食限制联合维生素D对Beclin1表达的诱导作用

目的探讨维生素D联合饮食限制诱导细胞自噬的发生以及对自噬相关蛋白Beclin1表达的影响。方法将18月老龄大鼠随机分为对照组、维生素D组、饮食限制组、维生素D联合饮食限食组,喂养6个月后,透视电镜观察大鼠肝脏细胞中的自噬体,免疫组化检测大鼠肾皮质细胞中自噬相关蛋白Beclin1的表达情况。结果电镜下维生素D组、饮食限制组、维生素D联合饮食限制组均出现自噬细胞形态学改变。免疫组化显示,与对照组相比,维生素D组、饮食限制组、维生素D联合饮食限制组Beclin1蛋白表达的比值均明显提高(P0.01),且维生素D联合饮食限制组Beclin1蛋白的表达高于维生素D组、饮食限制组(P0.01)。结论两种不同的检测细胞自噬方法证实,维生素D以及维生素D联合饮食限制均可增强细胞发生自体吞噬,且维生素D联合饮食限制比单独维生素D或者单独饮食限制引起自噬的程度更高,提示维生素D与饮食限制可能通过不同的信号转导途径来诱导细胞自噬的发生。     

维生素D与细胞自噬的相关性及自噬相关基因PTEN的蛋白表达

目的比较维生素D(VD)作用下的老龄大鼠和正常饮食组老龄大鼠肝脏细胞发生自噬的程度,以探索VD与自噬的关系,同时比较两组大鼠肾脏组织中自噬相关因子PTEN的蛋白表达。方法将40只24个月老龄雄性SD大鼠随机分为实验组和对照组,每组各20只,实验组大鼠每天经灌胃给予最佳剂量的VD(预实验得到最佳浓度3.704μg/kg),对照组正常饮食。6个月后,活体状态下取1mm3肝脏组织4℃保存,100 g肝组织-70℃冻存,用透射电镜观察各组肝脏细胞自噬泡的数量;用免疫组化检测PTEN蛋白表达。结果电镜下实验组细胞均出现典型自噬细胞形态学改变。与正常组相比,VD作用下的大鼠肝脏细胞自噬泡占细胞质总面积的比值均明显提高(P<0.01),免疫组化方法示实验组细胞PTEN表达较正常组显著升高(P<0.01)。结论透射电镜检测细胞自噬方法证实VD可增强细胞发生自体吞噬,同时细胞的PTEN蛋白表达量也相应提高,推测VD引起自噬过程中可能与PTEN有关。     

急性呼吸窘迫综合征患者血清Clara细胞分泌蛋白16及单核细胞趋化蛋白1水平与病情严重程度和预后的关系

目的观察急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)患者血清Clara细胞分泌蛋白16(clara cell protein-16,CC-16)、单核细胞趋化蛋白1(monocyte chemotaxis protein-1,MCP-1)水平的变化,并探讨其与病情严重程度和预后的关系。方法选取长治市人民医院2017年1月至2018年3月收治的ARDS患者114例作为此次研究对象,按照ARDS轻重程度分为轻度组(37例)、中度组(41例)和重度组(36例),并选择60名门诊体检健康者为对照组,记录4周内患者的生存情况,并根据生存情况将患者分为生存组(65例)和病死组(49例)。分析各组年龄、性别、体质量指数(body mass index,BMI)、吸烟史、急性生理学及慢性健康状况评分Ⅱ(acute physiology and chronic health evaluationⅡ,APACHEⅡ)、序贯器官衰竭评估(sequential organ failure assessment,SOFA)评分、血清CC-16及MCP-1水平的差异,分析血清CC-16、MCP-1水平与ARDS患者病情和预后的关系。结果随着疾病严重程度上升,ARDS患者APACHEⅡ评分、SOFA评分以及血清CC-16、MCP-1水平均明显上升,差异均有统计学意义(F值分别为1 216.886、1 339.247、290.879、417.262,P值均为0.000),吸烟史亦有统计学意义(χ^2=19.106,P=0.000)。病死组患者APACHEⅡ评分、SOFA评分以及血清CC-16、MCP-1水平分别为(22.13±2.47)分、(15.09±1.97)分、(23.85±4.27)μg/L、(36.64±5.21)ng/L,均明显高于生存组的(18.25±2.35)分、(13.23±2.03)分、(17.34±4.13)μg/L、(27.93±4.88)ng/L,差异均有统计学意义(t值分别为8.538、4.905、8.211、9.146,P值均为0.000)。Pearson相关性分析显示,ARDS患者血清CC-16水平与MCP-1水平呈正相关(r=0.589,P=0.000),同时CC-16、MCP-1均与APACHEⅡ评分、SOFA评分以及病死率呈正相关关系(CC-16:r值分别为0.504、0.549、0.472,P值分别为0.000、0.000、0.012;MCP-1:r值分别为0.493、0.528、0.435,P值分别为0.006、0.000、0.025)。Logistic回归分析亦显示:APACHEⅡ评分(OR=3.083,95%CI:0.025~1.364,P<0.05)、CC-16(OR=5.403,95%CI:0.011~6.561,P<0.05)、MCP-1(OR=2.892,95%CI:0.034~1.619,P<0.05)与ARDS死亡密切关联。CC-16单独检测、MCP-1单独检测、两者联合检测预测ARDS患者4周内病死的曲线下面积、灵敏度、特异度分别为0.830、82.35%、72.16%;0.719、79.25%、72.19%;0.866、85.06%、80.72%。结论CC-16、MCP-1在ARDS患者血清中异常升高,且其水平与ARDS患者病情的严重程度及预后密切相关。CC-16联合MCP-1检测对于ARDS患者具有较高的诊断价值,可作为判断ARDS患者病情和预后的有效指标。     

维生素D对细胞自噬及相关因子P62/SQSTM1、VDR表达的影响

目的 探讨活性维生素D在老龄大鼠体内诱导细胞发生自噬及相关因子P62/SQSTM1,VDR表达的变化.方法 21只18月龄雄性SD大鼠随机分为三组：对照组;低剂量组[VD,0.025 μg/（kg·d）];高剂量组[VD,0.1μg/（k·d）].对照组给予正常饮食,定时加水;其余两组也给予正常饮食,并分别用相应剂量的VD每日给大鼠灌胃.干预180 d后,处死大鼠,电镜观察肝脏细胞自噬程度,Western blot检测P62/SQSTM1、VDR蛋白表达.结果 1.电镜下可见对照组自噬泡占胞浆面积比小于其余两组（P＜0.05）,低剂量组和高剂量组自噬泡占胞浆面积比无明显差异（P＞ 0.05）;2.Western blot检测分析,对照组P62表达量高于其余两组（P＜0.05）,低和高两剂量组之间无明显差异（P＞ 0.05）;3.Western blot检测分析,高剂量组VDR蛋白表达稍高于对照组和低剂量组,但差异无统计学意义（P＞0.05）,同时对照、低和高剂量组三组间VDR表达量也无明显差异（P＞0.05）.结论 1.通过电镜观察,说明在老龄大鼠肝脏内VD可以诱导细胞自噬现象发生;2.使用VD干预老龄大鼠,可使P62蛋白量下降;3.VD诱导自噬和VD的受体VDR之间的关系尚不明确,需进一步研究.