生长分化因子15蛋白在宫颈上皮内瘤变和鳞癌中的表达及意义

目的:探讨生长分化因子-15(growth differentiation factor-15,GDF-15)蛋白在宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)和鳞癌中的表达及其在宫颈鳞癌发生和发展中的意义。方法 :采用免疫组织化学法分别检测45例宫颈癌(宫颈癌组),90例CIN(CIN1、CIN2、CIN3各30例),30例正常宫颈组织(对照组)的GDF-15的表达情况。结果 :GDF-15在对照组、CIN组、宫颈癌组的阳性率分别为10.0%(3/30)、45.6%(41/90)和80.0%(36/45),CIN组中,阳性率CIN1组为26.7%(8/30),CIN2组为53.3%(16/30),CIN3组为56.7%(17/30)。统计发现GDF-15在CIN组中阳性表达率明显高于对照组中的表达(Z=870.0,P=0.000),CIN2和CIN3的阳性表达率均明显高于CIN1(分别Z=330.0,P=0.037;Z=315.0,P=0.019),宫颈癌组中的阳性率明显高于CIN3组(Z=-2.16,P=0.031)。结论:GDF-15蛋白在正常宫颈组织、CIN、宫颈鳞癌中随着宫颈病变的进展其阳性表达率呈明显上升趋势,检测GDF-15表达可能有助于预测宫颈高度病变的转归。     

miR-205对黑色素瘤A375细胞增殖、黏附和迁移的影响及机制探讨

目的探讨miR-205对人皮肤恶性黑色素瘤细胞系A375增殖、黏附和迁移的影响及其可能机制。方法将miR-205 mimics用阳离子脂质体LipofectamineTM2000转染A375细胞,CCK-8法测细胞增殖变化;细胞黏附实验和划痕实验检测细胞黏附和迁移能力变化。Western blot检测PTEN、总AKT和磷酸化AKT蛋白表达变化。结果上调miR-205表达后实验组的细胞增殖、黏附和迁移能力均比空白对照组和阴性对照组减低(P均<0.05);Western blot结果显示上调miR-205表达能增加PTEN蛋白表达,减低磷酸化AKT蛋白水平,但对非AKT蛋白表达无影响。结论 miR-205可能通过调控PTEN/AKT通路抑制黑色素瘤细胞的增殖、黏附和迁移能力。     

低氧微环境增强MACC1调控PI3K/AKT信号通路促进结直肠癌肿瘤干细胞样特性

目的探讨低氧微环境和结肠癌转移相关基因1(MACC1)对结直肠癌(CRC)肿瘤干细胞(CSC)样特性生物学行为的影响及机制。 方法将空载体(LV-ctrl组)、MACC1过表达载体(LV-MACC1)转染结肠癌细胞HCT116,同时在低氧微环境条件下培养LV-MACC1细胞(LV-MACC1+hypoxia组)。分别应用CCK-8法及免疫细胞化学法、划痕实验、Transwell侵袭实验、肿瘤球形成实验检测细胞增殖、迁移能力、侵袭能力及体外肿瘤形成能力。免疫印迹法检测MACC1、CD133、CD44、AKT和p-AKT蛋白的表达,740 Y-P验证PI3K/AKT在MACC1诱导的肿瘤干细胞样特性中的作用。 结果与LV-ctrl组比较,LV-MACC1组的细胞增殖、迁移和侵袭能力均增强,肿瘤球形成增多,CD44、CD133和p-AKT蛋白的表达水平增高(P＜0.05)。与LV-MACC1组比较,LV-MACC1+hypoxia组的细胞增殖、迁移和侵袭能力增强,肿瘤球形成增多(P＜0.05)；CD44、CD133和p-AKT蛋白的表达水平增高(P＜0.05)。与对照组比较,740 Y-P增加了细胞CD133和CD44蛋白表达水平(P＜0.05)。 结论低氧微环境增强MACC1调控PI3K/AKT信号通路促进结直肠癌细胞出现肿瘤干细胞样特性。     

MACC1在大肠癌中的表达及其与淋巴结转移的关系

目的探讨结肠癌转移相关基因-1(MACC1)在大肠癌患者癌组织、癌旁正常黏膜组织以及不同转移潜能大肠癌细胞系中的表达情况,探讨MACC1表达与大肠癌侵袭转移的关系。方法采用免疫组织化学法检测77例大肠癌患者癌组织及其癌旁正常黏膜组织中的MACC1的表达情况,分析大肠癌患者癌组织的MACC1表达与淋巴结转移、神经侵犯和临床分期等的关系;采用免疫细胞化学法检测不同转移潜能大肠癌细胞株中的MACC1的表达情况。结果大肠癌患者癌组织的MACC1阳性表达率显著高于癌旁正常黏膜组织,差异有统计学意义(P 0. 05)。发生淋巴结转移的大肠癌患者其癌组织的MACC1阳性表达率(97. 3%)显著高于无淋巴结转移患者(55. 0%),有神经侵犯的患者其癌组织的MACC1的阳性表达率(100. 0%)显著高于无神经侵犯的患者(60. 4%),Ⅲ期患者其癌组织的MACC1的阳性表达率(90. 0%)显著高于Ⅰ、Ⅱ期患者(60. 0%,50. 0%),差异均有统计学意义(P 0. 05)。患者癌组织MACC1的表达与其性别、年龄、肿瘤大小、组织学分级、浸润深度无关(P 0. 05)。MACC1在高侵袭转移潜能SW620细胞中的表达明显强于在低侵袭转移潜能SW480细胞中的表达(P 0. 05)。结论大肠癌患者癌组织MACC1高表达,发生淋巴结转移、神经侵犯和高级别临床分期患者癌组织MACC1高表达,MACC1在高侵袭转移潜能SW620细胞中的表达较强,MACC1的表达情况与癌细胞的侵袭和转移能力密切相关。     

二甲双胍对高葡萄糖环境下结肠癌细胞增殖和侵袭的影响

目的观察二甲双胍在高葡萄糖环境下对人结肠癌细胞系SW480增殖和侵袭的影响,并探讨其可能的机制。 方法通过Western blot方法检测SW480细胞在高葡萄糖及不同浓度二甲双胍干预后E-cadherin和Vimentin的表达水平,并应用CCK-8法及Transwell侵袭实验检测细胞增殖及侵袭能力的变化。 结果高葡萄糖作用不同时间后均能促进结肠癌细胞增殖,二甲双胍能抑制结肠癌细胞的增殖,并呈时间——剂量依赖性。20 mmol/L浓度二甲双胍干预48 h后,Transwell侵袭实验结果显示细胞穿膜数为（40.18±2.22）%,明显低于高糖组和对照组（F=49.403,P<0.001）;Western blot结果显示E-cadherin表达明显增强,Vimentin表达明显减弱。 结论高葡萄糖环境能促进结肠癌细胞生长,二甲双胍能明显抑制有或无高葡萄糖环境下结肠癌的增殖和侵袭能力,其机制可能与调节上皮——间质转化（EMT）过程有关。     

结直肠癌与其淋巴结转移癌及结直肠癌细胞上皮-间质转化的对比研究

背景与目的:对上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的研究虽有大量文献报道,但研究数据仍有争议.本研究旨在探讨淋巴结转移的结直肠癌与结直肠癌细胞系SW480、SW620的EMT特征差异.方法:Real-time RT-PCR检测结直肠癌细胞系SW480和SW620 E-cadherin和vimentin的mRNA表达:免疫组织化学法检测30例配对结直肠癌及其转移淋巴结的石蜡组织标本中E-cadherin和vimentin的表达,HE染色观察30例配对结直肠癌及其淋巴结转移癌组织形态以及SW480和SW620的细胞形态.结果:SW480与SW620中E-cadherin和vimentin的mRNA表达差异有统计学意义(P=0.037),均以后者为高;E-cadherin和vimentin在结直肠癌与其淋巴结转移癌组织中的表达差异无统计学意义(P=0.108;P=0.660).部分淋巴结转移癌中E-cadherin的表达高于结直肠癌(4/30),且vimentin表达比结直肠癌弱,甚至表达缺失(6/30);结直肠癌与其淋巴结转移癌组织具有相似的形态学特征;SW480和SW620两者形态类似.结论:结直肠癌对比其淋巴结转移癌、SW480对比SW620发现EMT特征无显著差异,推测是由于淋巴结转移癌和SW620发生TEMT.     

MSCT对髋关节撞击综合征的影像学研究

目的探讨利用多排螺旋CT平扫及后处理重建方法,了解髋关节撞击综合征(femoroacetabular impingement,FAI)解剖学及骨质异常,并对FAI病例进行α角及EE角的测量,探讨α角及EE角(Equatorial-edge angle)在髋关节撞击综合征中的应用价值。方法选取行多排螺旋CT平扫的59例临床诊断FAI患者和20例因非股骨近端病变、无髋关节撞击综合征症状而接受下腹或双髋CT扫描的成年患者的CT体积数据作为对照组,分析解剖学、骨质异常情况及α角的意义。结果 FAI分为凸轮型、钳型、混合型,每型均存在不同程度解剖学异常及骨性异常征象;对照组α角为41.826°±1.862°,FAI组为66.548°±9.169°,差异具有统计学意义(t=-11.926,P=0.000);多重比较显示FAI组中以凸轮型的α角最大(71.851°±5.696°),钳型的α角最小(48.889°±3.364°;全部P<0.05)。多重比较分析EE角显示除混合型FAI(16.729°±3.068°)和钳型FAI(16.386°±1.211°)间、FAI凸轮型(21.550°±2.096°)与对照组(21.845°±2.814°)间EE角差异不具有统计学意义外(分别P=0.3234,P=0.,7326),其余两两间EE角比较差异均具有显著统计学意义(全部P<0.05)。结论α角是反映股骨头颈联合处凹陷程度与FAI关系的一个客观指标,对诊断凸轮型FAI有重要意义;EE角是评价髋臼后倾的一个客观指标,同时也可以评估髋臼对股骨头覆盖程度,可以为诊断钳型及混合型FAI提供参考。多排螺旋CT平扫及三维重建可以全面清晰显示股骨和髋臼解剖学异常及骨质异常,能对FAI准确诊断及分型,对治疗方案的制定及手术方式的选择有重要参考价值。     

VEGF诱导对翼状胬肉成纤维细胞血管生成拟态影响的研究

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)诱导对人翼状胬肉成纤维细胞血管生成拟态(VM)的影响。方法收集在广州市增城区人民医院行翼状胬肉手术的6例新鲜的初发性人翼状胬肉标本(年龄41~58岁)。将人翼状胬肉新鲜组织剪碎后进行体外贴壁细胞常规培养,并采用波形蛋白(Vimentin)免疫细胞化学染色和广谱细胞角蛋白(CK)染色对人翼状胬肉成纤维细胞进行鉴定。分别设置对照组和不同浓度的VEGF(1 ng/ml、10 ng/ml及100 ng/ml)组,取生长良好的3~5代翼状胬肉成纤维细胞进行分组培养。采用细胞计数试剂盒-8法检测各组成纤维细胞的增殖能力。应用细胞三维培养技术和糖原染色法观察各组VM的进展情况,采用蛋白质印迹法检测各组细胞的基质金属蛋白酶(MMP)-2和低氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白的表达。各组吸光度(OD值)、MMP-2及HIF-1α的描述均采用均数±标准差(x珋±s)表示,对照组与不同浓度VEGF组的比较采用单向方差分析,当差异有统计学意义时,进一步两两比较。双变量相关性分析采用Spearman's等级相关分析。结果人翼状胬肉成纤维细胞鉴定结果显示,细胞爬片经苏木精-伊红染色后,在显示镜下细胞呈长梭形、三角形、扇形或不规则状。细胞免疫化学染色结果显示,细胞的胞浆呈Vimentin阳性表达,广谱CK阴性表达。细胞计数试剂盒-8法检测细胞增殖结果显示,对照组、1 ng/ml组、10 ng/ml组及100 ng/ml组细胞的OD值分别为0.57±0.023、0.59±0.012、0.77±0.024及1.014±0.035。对照组和1 ng/ml组比较差异无统计学意义(t=1.21,P>0.05);10 ng/ml组和100 ng/ml组的OD值均明显高于对照组和1 ng/ml组(t=14.78,12.34;P<0.05);100 ng/ml组的OD值最高,与对照组、1 ng/ml组及10 ng/ml组比较,差异有统计学意义(t=20.12,19.45,13.41;P<0.05)。细胞三维培养及糖染色显示,10 ng/ml组和100 ng/ml组均出现VM结构,而对照组和1 ng/ml组未发现VM结构。10 ng/ml组和100 ng/ml组VM结构的密度分别为4.40±1.14和12.40±2.07,差异有统计学意义(t=-7.899,P<0.05)。对照组、1 ng/ml组、10 ng/ml组及100 ng/ml组细胞的MMP-2值分别为0.26±0.038、0.29±0.013、0.39±0.013及0.73±0.014;对照组、1 ng/ml组、10 ng/ml组及100 ng/ml组细胞的HIF-1α值分别为0.087±0.0086、0.087±0.0031、0.15±0.0016及0.37±0.026。对照组和1 ng/ml组中MMP-2和HIF-1α灰度值的差异均无统计学意义(t=1.21,0.01;P>0.05);10 ng/ml组中MMP-2和HIF-1α灰度值均显著高于对照组和1 ng/ml组(t=7.92,6.85,17.64,17.82;P<0.05);100 ng/ml组的中MMP-2和HIF-1α灰度值均显著高于其他3组(t=28.48,26.45,18.72,25.31,24.78,15.45;P<0.05)。翼状胬肉成纤维细胞的血管生成拟态密度与MMP-2和HIF-1α表达呈显著正相关(r=0.509,0.503;P<0.05)。结论 VEGF能够增强人翼状胬肉成纤维细胞的增殖能力、促进VM出现及促使MMP-2和HIF-1α表达增高。提示VEGF因素可能是翼状胬肉出现VM的分子机制,并协同增强MMP-2和HIF-1α表达一起影响翼状胬肉的进展。