血卟啉衍生物对人食管癌细胞体外光动力疗法效应影响的实验研究

目的：探讨血卟啉衍生物（hematoporphyrin derivative，HPD）孵育浓度和孵育时间对人食管癌细胞Eca-109体外光动力疗法（photodynamic therapy，PDT）效应的影响。方法：以不同浓度HPD孵育Eca-109细胞，并给予不同孵育时间（2、4、12、24h），在30J／cm^2（光源采用DIOMED630PDT系统）饱和光能量密度下行PDT，24h后通过MTT法检测细胞生存率。结果：除孵育时间为2h外，其余3个孵育时间（4、12、24h）不同孵育浓度间的细胞生存率差异有统计学意义（P〈0．05）。对于同一孵育浓度下不同孵育时间的细胞生存率，当孵育浓度〉0．75μg／mL时，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：特定光源和饱和光能量密度下，HPD的孵育浓度和孵育时间对人食管癌细胞依外PDT教应影响显著．     

索拉非尼对耐药肝癌细胞株BEL-7402／FU逆转作用的研究

目的:研究索拉非尼对肝癌耐药细胞系BEL-7402/FU多药耐药性的逆转作用及可能机制.方法:采用流式细胞术检测罗丹明123(Rho123)的表达,免疫组化法观察细胞膜上P-gp的表达,荧光定量PCR法检测多药耐药基因mdr1 mRNA水平的变化,Western blot法检测mdr1基因蛋白产物P-gp表达水平的变化.结果:经4 μmol/L索拉非尼处理后,增加了BEL-7402/FU对Rho123的蓄积并减缓其外排作用,使细胞表面P-gp的表达明显下降,mdr1 mRNA较用药前下降了35.4%,并可明显抑制mdr1基因蛋白产物P-gp的表达水平,比BEL-7402/FU细胞减少14.3%.结论:索拉非尼可以抑制mdr1基因蛋白产物P-gp的表达,增加细胞内化疗药物的浓度,从而逆转了肝癌细胞的多药耐药性.     

PTEN 与 p53在鼻咽癌中的表达及意义

目的：探讨PTEN基因缺失和p53基因突变在鼻咽癌中的表达及临床意义。方法：本实验以50例鼻咽癌标本作为病例组,以50例正常子鼻咽部组织作为对照组,应用免疫组织化学技术检测二组中PTEN和p53的表达,分析其不同临床病理特征中的意义及对预后的判断价值。结果：病例组PTEN阴性24例,对照组阴性0例,两组比较差异有显著的统计学意义（P＜0．01）,Ⅲ期和Ⅳ期以及有淋巴结转移的患者PTEN 阴性比例明显高于PTEN 阳性患者,差异有有显著的统计学意义（ P＜0．01）,病例组PTEN阳性38例,对照组阳性22例,两组比较差异有显著的统计学意义（P＜0．01）,有淋巴结转移的患者p53阳性比例明显高于p53阴性患者,差异有有显著的统计学意义（ P＜0．01）。结论：PTEN基因缺失和p53基因突变与鼻咽癌发生和发展密切相关。     

人树突状细胞SOCS1基因RNA干扰慢病毒载体的构建及鉴定

目的构建人树突状细胞（hDCs）信号传导通路抑制因子1（SOCS1）基因RNA干扰（RNAi）慢病毒载体。方法根据人树突状细胞SOCS1基因（NM-0037）,筛选出一个靶序列,设计并合成包含正反义靶序列的互补单链寡核苷酸,与经BamH和Xho酶切后的慢病毒载体质粒pRNA-Lenti-增强型绿色荧光蛋白（EGFP）（含U6启动子和EGFP）连接产生pRNA-Lenti-SOCS1-EGFP慢病毒重组质粒,与慢病毒包装混合物共转染293T细胞,包装产生慢病毒,收集病毒上清,采取系列稀释法测定慢病毒滴度。然后转染hDCs,通过荧光显微镜观察细胞转染情况,利用荧光实时定量PCR和Westernblot检测干扰组、阴性对照组、空白对照组SOCS1的表达情况。结果将目的序列成功连接到载体上,并经测序分析证实载体构建成功。荧光实时定量PCR及Westernblot检测显示慢病毒重组质粒感染hDCs后,与空白对照组及阴性对照组比较,siRNA组mRNA和SOCS1蛋白的表达量显著降低,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论构建的pRNA-Lenti-SOCS1-EGFP慢病毒载体可有效地抑制hDCs的SOCS1的表达,为进一步研究DCs增强抗肿瘤免疫应答效应奠定基础。     

广东地区汉族人MBL基因启动子区SNP的研究

目的 研究广东汉族人群甘露聚糖结合凝集素(MBL)基因启动子单核苷酸多态性(SNP)。方法 抽提人外周血白细胞基因组DNA，建立SSP-PCR及分子灯塔实时荧光PCR技术，检测MBL基因启动子区SNP位点-550(G／C，称H／L等位基因)、-220(G／C，X／Y等位基因)和 4(C/T，P／Q等位基因)，分析其单倍型及基因型频率。结果 从167人中检出等位基因型LYP／LYP10例(5．9％)、HYP／LYQ7例(4．2％)、LYP／LYQ94例(56．3％)、LXP／LXP6例(3．6％)、LYQ／LYQ4例(2．4％)、LXP／LYQ29例(17．4％)、HYP／LYP3例(1．8％)、HYP／LXP2例(1．2％)、HYP／HYP12例(7．2％)。结论 广东地区汉族人群MBL基因启动子区SNP等位基因型以LYP／LYQ和LXP／LYQ为主。     

脐血来源NK细胞对肝肿瘤生长抑制作用

目的 培养脐血来源NK细胞,通过细胞和动物水平验证其用于肝癌治疗的安全性和有效性。方法 NK细胞体外诱导培养,观察培养过程细胞形态、细胞总数、增殖倍数,流式检测其中CD3^-CD56⁺细胞的比例,细胞毒性检测验证NK细胞对癌细胞的杀伤活性;建立肝癌裸鼠皮下荷瘤模型,采用瘤内与静脉方式注射NK细胞,密切观察不同时间段实验组和对照组裸鼠移植瘤大小、体积、质量以及裸鼠存活状态。荷瘤40天后取肿瘤组织进行分析。通过流式分析、HE染色和免疫荧光检测NK细胞移植在裸鼠体内第37天含量,分析NK细胞在裸鼠体内残留情况。结果 脐血分离单个核细胞经体外诱导培养的NK细胞能保持典型的NK细胞表型特征,细胞活性好、增殖能力强、纯度高,对多种癌细胞系均具有良好的杀伤作用。与对照组相比,NK细胞注射组均能抑制肝肿瘤生长。NK细胞移植35天后,尾静脉组肿瘤大小显著下降(P<0.05)。同时NK细胞在体内无明显残留,表明NK细胞小鼠体内移植无致瘤性。结论 本研究制备的脐血NK细胞符合临床研究需求,可作为肝癌患者临床治疗的替代方案,为下一步开展临床研究提供前期基础。     

光卟啉对Eca-109细胞的体外光动力效应

目的探讨光卟啉不同孵育浓度和不同孵育时间对人食管癌细胞Eca-109体外光动力治疗(pho-todynamic therapy,PDT)效应的影响。方法以不同浓度光卟啉孵育Eca-109细胞,并给予不同孵育时间(4,6,12,24h)(光源采用DIOMED630PDT系统)后于饱和光能量密度20J/cm2下行PDT,24h后通过MTT法检测细胞生存率。结果光卟啉4种不同孵育时间和不同孵育浓度间生存率差异均有显著性(均P<0.01)。同一孵育时间下不同浓度间的生存率差异均有显著性(均P<0.01),而同一浓度下不同孵育时间之间的生存率,则除了浓度为0μg/ml和0.1μg/ml外差异均有显著性(均P<0.05)。结论特定光源下,光卟啉的孵育浓度和孵育时间对人食管癌细胞Eca-109体外PDT效应影响显著。     

肿瘤骨转移前微环境形成机制研究进展

肿瘤转移前微环境的形成,是转移病灶形成的重要基础,机制复杂,为预防及治疗肿瘤转移增加了困难。肿瘤发生骨转移较为常见,在骨组织中亦存在预转移前微环境,其中主要包括原发肿瘤来源成分、肿瘤细胞动员的骨髓细胞及骨基质等。本文就肿瘤发生骨转移前微环境形成的机制及过程做一综述,为肿瘤的预防和治疗提供参考。     

中国白族、佤族和拉祜族人群MBL基因启动子区SNP的研究

目的:研究中国白族、佤族和拉祜族人群甘露聚糖结合凝集素(MBL)基因启动子区单核苷酸多态性(SNP)。方法:抽提人外周血白细胞基因组DNA,建立SSP-PCR及PCR-分子灯塔实时分析技术,检测MBL基因启动子区SNP位点-550(G/C,称H/L等位基因)、-220(G/C,X/Y等位基因)和 4 4(C/T,P/Q等位基因),分析其单倍型及基因型频率。结果:从 71例白族、73例佤族和 94例拉祜族人中,分别检出等位基因型LYP/LYP4例(5.6% )、4例(5. 5% )和 2例(2. 1% );HYP/LYQ6例 (8. 5% )、11例(15. 1% )和 12例 (12. 8% );LYP/LYQ21例 (29. 6% )、14例 (19.2% )和 51例 (54. 3% );LXP/LXP1例 (1. 4% )、2例 (2. 7% )和 0例;LYQ/LYQ10例(14. 1% )、14例 (19. 2% )、7例 (7. 4% );LXP/LYQ10例(14. 1% )、13例 (17. 8% )和 15例 (16. 0% );HYP/LYP4例(5. 6% )、3例(4. 1% )和 4例(4. 3% );HYP/LXP3例(4. 2% )、1例(1. 4% )和 0例;HYP/HYP12例(16. 9% )、11例(15. 1% )和 3例(3. 2% )。结论:中国白族、佤族、拉祜族普通人群之间,MBL基因启动子区等位基因L/H的分布存在差异(P<0. 01),X/Y和P/Q无统计学意义的差异(P>0. 05);各单倍型和各基因型的分布存在差异(P<0. 01);基因型LYP/LYQ和LXP/LYQ在 3个民族均有较高的分布,其总体频率分别达 36. 1%及 16.