寄生虫重组双歧杆菌疫苗研究进展

寄生虫病是严重威胁人类和动物健康的传染病之一,研制疫苗防治该病是当前研究的热点领域之一.随着寄生虫病和寄生虫学研究的深入,该领域取得很多进展,重组双歧杆菌疫苗以其独特的优点成为一种可行的新型疫苗,该文就寄生虫病重组双歧杆菌疫苗的研究进展进行了综述.     

日本血吸虫重组Bb(pGEX-Sj26GST-Sj32)疫苗的构建及鉴定

目的构建并鉴定日本血吸虫重组双歧杆菌属两歧双歧杆菌(Bb)(pGEX-Sj26GST-Sj32)疫苗。方法从本室保存的BL21(DE3)(pET28α-Sj26GST-Sj32)重组菌中抽提质粒pET28α-Sj26GST-Sj32,PCR扩增Sj26GST-Sj32融合基因,将该融合基因定向克隆到大肠埃希菌-双歧杆菌穿梭表达载体pGEX-1λT中,构建重组质粒pGEX-Sj26GST-Sj32。将此重组质粒转化至大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞中,抽提质粒并进行BamHⅠ及EcoRⅠ双酶切,鉴定载体片段及目的基因片段长度。用电穿孔法将重组质粒pGEX-Sj26GST-Sj32转化至Bb,构建重组Bb(pGEX-Sj26GST-Sj32),抽提质粒,进行PCR鉴定。结果 PCR成功扩增出长度为1 991bp的Sj26GST-Sj32融合基因;双酶切证实Sj26GST-Sj32融合基因成功插入质粒pGEX-1λT中;PCR证实从重组Bb(pGEX-Sj26GST-Sj32)疫苗中扩增出1991bp的Sj26GST-Sj32融合基因。结论成功构建重组Bb(pGEX-Sj26GST-Sj32)疫苗。     

日本血吸虫重组Bb(pGEX-Sj14-3-3)疫苗免疫小鼠脾细胞因子的动态观察

目的探讨日本血吸虫重组双歧杆菌属两歧双歧杆菌(Bifidobacterium bifidum,Bb)(pGEX-Sj14-3-3)疫苗免疫Balb/c小鼠后脾细胞因子的动态变化。方法重组疫苗分别经口服灌胃及鼻腔粘膜接种小鼠;在免疫后0、2、4、6、8、10、12、14、16、18、20和22周各剖杀4只小鼠,取脾及分离脾细胞;脾细胞分别经未刺激、SjAWA和ConA刺激培养;收集培养的上清液,双抗体夹心ELISA法测定培养上清液的细胞因子水平。结果口服组小鼠脾细胞IFN-γ、IL-12、TNF-α和IL-10水平分别在免疫后2~12、6~8、2~12和2~8周显著升高,分别在免疫后8、8、6和4周达最高水平;鼻腔黏膜接种组小鼠脾细胞IFN-γ、IL-12、TNF-α和IL-10水平分别在免疫后2~20、2~10、2~16和2~16周显著升高,分别在免疫后2、2、4和4周达最高水平。结论重组Bb(pGEX-Sj14-3-3)疫苗能够诱导免疫小鼠产生有效的免疫应答。     

日本血吸虫重组Bb(pGEX-Sj14-3-3)疫苗免疫BALB/c小鼠诱导免疫应答的动态检测

目的 研究日本血吸虫重组双歧杆菌属两歧双歧杆菌(Bb) (pGEX-Sjl4-3-3)疫苗免疫小鼠后其免疫应答的动态变化.方法 将重组疫苗分别采用口服灌胃和鼻内接种免疫BALB/c小鼠,分别于免疫后2、4、6、8、10、12、14、16、18、20和22周ELISA法测小鼠血清中IgG及其亚类、IgE和IgA及脾细胞培养液中IFN-γ、IL-12、TNF-α和IL-10水平;MTT法测定脾细胞增殖;流式细胞仪检测脾细胞凋亡率及CD4+和CD8+T细胞亚群百分率.结果 口服组血清IgG、IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3、IgE和IgA水平分别在免疫后8、6、6、4、8、10和6周达峰值.脾淋巴细胞增殖和凋亡水平均在免疫后4周达峰值;CD4+T细胞于8周达峰值,CD8+T细胞于14周达峰值.IFN-γ、IL-12、TNF-α和IL-10水平分别于8、8、6和4周达峰值.鼻内接种组血清IgG、IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3、IgE和IgA分别于4、6、4、4、8、10和8周达峰值.脾淋巴细胞增殖及凋亡水平也均在4周达峰值;CD4+T细胞于8周达峰值,CD8+T细胞于4周达峰值.IFN-γ、IL-12、TNF-α和IL-10水平分别于2、2、4和4周达峰值.口服及鼻腔内接种是两种较好的免疫途径,且后者优于前者.结论 该疫苗可诱导小鼠产生有效的免疫应答.     

日本血吸虫重组两歧双歧杆菌(pGEX-Sj26GST)疫苗的构建及鉴定

目的 构建日本血吸虫重组两歧双歧杆菌（pGEX-Sj26GST）疫苗,并对其进行鉴定.方法 采用RNeasy Mini试剂盒提取日本血吸虫成虫总RNA,采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法获得Sj26GST抗原编码基因;将该编码基因与pGEX-1λT载体进行连接,得到重组质粒pGEX-Sj26GST,并对其进行双酶切鉴定;将重组质粒电转化入两歧双歧杆菌中,构建重组两歧双歧杆菌（pGEX-Sj26GST）疫苗,PCR鉴定疫苗.结果 RT-PCR扩增出的日本血吸虫成虫Sj26GST基因片段长度为676 bp;双酶切证实Sj26GST抗原编码基因成功插入pGEX-1λT载体中;PCR证实从重组两歧双歧杆菌疫苗中扩增出长度为676 bp 的Sj26GST基因片段.结论 成功构建了日本血吸虫重组两歧双歧杆菌（pGEX-Sj26GST）疫苗.     

进展期胃癌患者血清circ＿CPA4水平与一线化疗敏感性及预后的相关性分析

目的 分析血清circ＿CPA4水平与进展期胃癌（AGC）患者一线化疗敏感性及预后的相关性。方法选取2018年7月1日至2020年5月31日重庆市大足区人民医院接受一线化疗的无法行切除术的AGC患者病历。采用实时荧光定量聚合酶链反应测定血清circ＿CPA4水平。根据治疗疗效,将AGC患者分为临床获益组和非临床获益组,并随访记录患者的总生存期（OS）。结果 共纳入AGC患者86例,其中50例（58.14%）患者纳入临床获益组,36例（41.86%）患者纳入非临床获益组。根据AGC患者血清circ＿CPA4水平中位值（1.81）,将血清circ＿CPA4水平≤1.81的患者纳入低水平组（n=43）,>1.81的患者纳入高水平组（n=43）。高水平组患者临床获益率显著低于低水平组（34.00%比66.00%,P<0.05）,中位OS更短[10.1(2.2～35.1)个月比24.7(2.4～46.1)个月,P<0.05）。血清circ＿CPA4水平用于预测AGC患者一线化疗临床获益的灵敏度和特异性分别为63.90%和80.00%。多因素Cox回归分析结果显示,神经侵犯、糖类...