淋病奈瑟菌隐蔽性质粒的克隆及PCR的建立与应用

用分生物学方法自淋病奈瑟菌标准分离株中克隆４．２ｋｂ的隐蔽性质粒，并根据该质粒ＤＮＡ序列，设计引物，建立淋病奈瑟菌ＰＣＲ检测方法。该方法标处理简单、反应程序优化，可在２．５小时内完成一次检测。     

淋巴结K19 mRNA检测在诊断乳腺癌微转移灶中的应用

探讨 K19m RNA表达与乳腺癌病人淋巴结微转移的关系。应用 RT- PCR方法检测 2 0例乳腺癌组织及其 6 8枚腋下淋巴结和 4份正常乳腺组织、4枚正常淋巴结、5枚良性肿瘤患者腋下淋巴结中 K19m RNA,并与传统病理学检查淋巴结癌转移对照。结果显示 :正常乳腺组织及乳腺癌细胞 K19m RNA检测均为阳性 ,对照正常淋巴结、良性肿瘤患者淋巴结 RT- PCR结果阴性 ;组织病理学检查存在转移的 8枚淋巴结其 K19m RNA检测亦阳性 ,组织病理学检测无转移的 6 0枚淋巴结中有 7枚 K19m RNA RT- PCR检测阳性。因此 ,RT- PCR检测 K19m RNA可更敏感地检出淋巴结中的微转移灶 ,对乳腺癌转移的诊断有一定的实用价值。     

用基因探针及PCR技术检测淋球菌

长期以来,对淋病诊断一直努力寻找临床标本的直接检测方法,以省去繁琐的细菌培养和鉴定。自1991年以来,我们应用自己研制的磺化标记基因探针和分子杂交技术,通过检查标本中病原菌的遗传物质检出病原菌并研究其特性。研究证实98％的淋球菌均带有隐蔽性质粒。我们在复旦大学遗传所的帮助下,收集淋球菌菌株进行大量培养,提取隐蔽性质粒,酶切克隆全质粒DNA,并用于制备非同位素磺化标记DNA探针,经与淋球菌质粒DNA杂交,出现了阳性信号,显示了极好的特异性和敏感性。     

恶性疟原虫FCC1／HN株特异基因片段的克隆及部分序列分析

本研究通过分离、培养恶性疟原虫ＦＣＣ１／ＨＮ分离株，提取、纯化其基因组ＤＮＡ，用ＢａｍＨ１部分酶切，并克隆ｐＵＣ１８载体，转化受体菌株大肠杆菌ＪＭ１０３，用基因组ＤＮＡ探针筛选转化子，对杂交信号最强的克隆片段ｐＨＦ１作部分序列分析，在国内首次明确恶性疟原虫ＦＣＣ１／ＨＮ特异ＤＮＡ部分序列。ｐＨＦ１克隆片段约１．２ｋｂ，两端分别测定了３２８和２７１个碱基。Ｇ＋Ｃ含量为２６．８％，并有较多的酶切位点，便于作亚克隆，该序列还可用作ＤＮＡ探针或ＰＣＲ扩增模板有较大实用价值。     

病理诊断与基因检测淋巴结转移的对比性研究

目的 探讨逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）扩增角蛋白19（K19）检测淋巴结转移并与传统病理诊断相比较。方法 对6例良性疾病、4例乳腺癌、5例胃癌及12例结直肠癌共194枚区域淋巴结进行传统病理诊断和K19mRNA的RT－PCR扩增检测,并进行对比。结果 良性疾病共34枚淋巴结病理和基因诊断均为阴性。病理检查发现有转移的恶性肿瘤区域淋巴结28,其基因诊断均为阳性。病理检测未发现转移的132枚恶性肿瘤区域淋巴结中经基因检测有11枚存在微转移。结论 基因检测淋巴结微转移较传统病理检测有更高敏感性,具有诊断意义,值得进一步研究。     

原发性肝癌患者红细胞CR1数量基因型及活性的检测

目的：探讨红细胞免疫功能与原发性肝癌发病之间的关系。方法：应用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ方法检测９４例肝癌、４９例肝硬化、４６例乙型肝炎患者及８０例正常人红细胞ＣＲ１活性，并进行比较。结果：原发性肝癌、肝硬化患者红细胞ＣＲ１数量基因型与正常人比较相差显著（Ｐ〈０．０５），其红细胞免疫粘附（ＲＣＩＡ）活性明显低于正常人（Ｐ〈０．０１，〈０．０５）；乙肝、肝硬化、肝癌患者红细胞免疫复合物（ＩＣ）高于正常人（Ｐ〉     

肺癌C-myc基因扩增的临床意义

目的与方法:应用聚合酶链反应(PCR)技术对56例肺癌石蜡包埋标本进行C-myc基因的研究.结果:C-myc基因扩增与组织学类型、临床病理分期及淋巴结转移有密切关系(P<0.05),C-myc基因扩增者,分化程度较低,临床病理分期较晚,淋巴结转移多.同时还发现C-myc基因扩增与预后有明显关系(P<0.05),C-myc基因扩增者预后较差.结论:提示C-myc基因可以作为判断肺癌预后的检测指标之一.     

肝病患者红细胞CR1密度多态性分析

为探讨红细胞ＣＲ１密度多态性及活性在乙肝到肝癌的演变过程中可能的作用机制，采用ＰＣＲ ＲＦＬＰ和肿瘤细胞花环法，分别检测了４６例乙型肝炎、４９例乙型肝炎后肝硬变、９４例肝癌患者和８０例正常人红细胞ＣＲ１密度多态性及活性。结果红细胞ＣＲ１基因型，ＨＨ型正常人为８０％，与乙肝患者的７３９％无显著差别，但显著高于乙型肝炎后肝硬变和肝癌患者的６３３％和５６４％（Ｐ＜００５）；ＨＬ型正常人为２０％，分别低于乙型肝炎、乙型肝炎后肝硬变和肝癌患者的２６１％、３０６％和３１９％；ＬＬ型正常人与乙型肝炎患者为０，乙型肝炎后肝硬变和肝癌患者分别为６１％与１１７％。ＣＲ１活性肿瘤红细胞花环率，正常人为３１９±７５％，分别显著高于乙型肝炎、乙型肝炎后肝硬变和肝癌患者的２９４±６９１％（Ｐ＜００５）、２４２±６９１％和２２２±７６６％（Ｐ＜００１）。     

红细胞CR1基因组密度多型性红细胞CR1基因组密度多型性

目的:研究不同人群中红细胞CR1基因组密度多型性与红细胞免疫粘附肿瘤细胞能力的相关性。方法:采用PCR加HindⅢ酶切技术测定红细胞CR1基因组密度多型性(HH型、HL型、LL型),采用肿瘤红细胞花环试验测定红细胞免疫粘附肿瘤细胞的能力。结果:在不同人群中,HH型红细胞免疫粘附肿瘤细胞的能力明显大于HL型红细胞,而HL型红细胞免疫粘附肿瘤细胞的能力明显大于LL型红细胞。结论:红细胞免疫粘附肿瘤细胞的能力与CR1基因组密度多型性有关。