噬菌体生物扩增法、DNA序列分析及单链构象多态性分析检测结核分枝杆菌耐药性

目的　探讨和评价噬菌体生物扩增技术 (phageamplifiedbiologicallyassay,PhaB)用于检测结核分枝杆菌耐药性的应用价值。方法　本研究共选取了 91株利福平 (RFP)耐药株 (其中 82株为耐多药结核分枝杆菌 )、4 2株RFP敏感株、75株氧氟沙星 (OFLX)耐药株、4 0株OFLX敏感株 ,应用PhaB、DNA序列分析法和聚合酶链反应 单链构象多态性分析 (PCR SSCP) 3种检测方法 ,同时对同一菌株应用该 3种方法进行耐药性检测 ,以资分析与评价PhaB法的临床应用价值。结果　以绝对浓度法药敏试验结果为标准 ,检测RFP的药物敏感性 ,PhaB法的准确性为 93% ,敏感性为 92 % ,特异性为95 % ;DNA序列分析法的准确性为 93% ,敏感性为 90 % ,特异性为 10 0 % ;PCR SSCP法的准确性为90 % ,敏感性为 86 % ,特异性为 10 0 %。检测OFLX(OFLX)的药物敏感性 ,PhaB的准确性为 95 % ,敏感性为 95 % ,特异性为 95 % ;DNA序列分析法的准确性为 80 % ,敏感性为 71% ,特异性为 98% ;而PCR SSCP法的准确性为 75 % ,敏感性为 6 3% ,特异性为 98%。结论　PhaB法是一种操作简便、快速、敏感、与绝对浓度法符合率高的结核分枝杆菌耐药性检测方法 ,在 4 8～ 96h内可获得试验结果 ,具有良好的临床应用前景。     

抗原刺激后外周血单个核细胞γ干扰素释放反应在结核分枝杆菌感染和结核病诊断中的意义

目的 探讨3种结核分枝杆菌抗原刺激后外周血单个核细胞（PBMC）γ干扰素（IFN-γ）释放反应对结核性感染和结核病的诊断意义。方法 获取活动性结核病患者（结核组，57例）、肺癌患者（肺癌组，29例）和健康人（健康对照组，27名）外周血单个核细胞。分别将结核分枝杆菌纯蛋白衍生物（PPD）、结核分枝杆菌早期分泌抗原靶6000蛋白（ESAT6）和38000抗原与PBMC共培养5d，采用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测培养上清液中IFN-γ浓度。比较3种抗原PBMC IFN-γ释放水平和PPD皮试（TST）结果。结果 （1）健康对照组：TST反应与BCG接种史及排菌患者接触密切程度经Logistic回归分析显示均呈正相关（P=0．047和P=0．041）；以ESAT6为抗原的PBMC IFN-γ释放水平与结核病患者接触密切程度相关（P=0．005），而与BCG接种史无明显相关性。（2）3组间TST结果差异无显著性。（3）以38000抗原刺激后IFN-1释放水平为观察指标，经受试者操作特性（ROC）曲线分析获得最佳域值为1000pg／ml，以此判断38000抗原刺激后IFN-γ释放水平诊断结核病敏感性为64．9％，特异性为89．3％，准确性为77．0％，阳性预测值为86．0％，阴性预测值为71．0％。结论 ESAT6抗原的IFN-γ释放反应对结核分枝杆菌感染的诊断意义优于TST，38000抗原刺激后IFN-γ释放反应对结核病的临床诊断有辅助意义。     

肺癌患者血清氧化/抗氧化状态的初步研究

目的 通过对141例原发性肺癌患者血清中抗氧化酶和氧化代谢产物的测定,观察肺癌患者氧化/抗氧化状态的特点,为补充或完善肺癌发生和发展机制提供依据.方法 用比色法测定患者的氧化/抗氧化酶的活性、含量,包括总抗氧化能力、总超氧化物歧化酶(包括锰超氧化物歧化酶和铜锌超氧化物歧化酶)、谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢、丙二醛.结果 与正常组相比,肺癌患者血清中总抗氧化能力、锰超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶明显降低(P＜0.01),铜锌超氧化物歧化酶、过氧化氢、丙二醛明显增高(P＜0.01).肺腺癌、小细胞癌组血清过氧化氢高于肺鳞状细胞癌组(P＜0.05);不同分化程度组间差异无统计学意义;Ⅳ期总超氧化物歧化酶较Ⅰ期患者增高(P＜0.01).结论 肺癌患者存在氧化/抗氧化失衡,其特点为血清中除铜锌超氧化物歧化酶外,抗氧化酶活性降低,氧化代谢产物增高.不同组织学类型及TNM分期对肺癌患者氧化/抗氧化失衡有一定的作用.