Apelin促进人诱导性多能干细胞心肌定向分化的研究

目的探讨Apelin对人诱导性多能干细胞(hiPSC)的心肌定向分化作用。方法 hiPSC经悬浮法诱导形成拟胚体,分为Apelin处理组(Apelin组)和对照组。Apelin组在高糖DMEM培养液中加入10μmol/ml Apelin,分别于第3、7、11、15、21天采用RT-PCR、Western blot法检测及免疫荧光染色,观察干细胞全能性标记物Oct4、心肌祖细胞标记物Nkx 2.5、心肌特异性肌钙蛋白I(cTnI)的表达变化。结果 Apelin组iPSC在诱导分化后第3天Oct4和Nanog基因表达水平明显降低,分别为同期对照组的(63.2±10.1)%和(51.7±1.6)%(P<0.01);诱导分化后第7天Nkx 2.5和cTnI基因表达水平明显升高,分别为同期对照组的(162.4±22.5)%和(250.6±22.3)%(P<0.05,P<0.01);诱导分化后第15天时,cTnI表达为同期对照组的(156.2±6.4)%(P<0.05);免疫荧光染色显示,cTnI阳性细胞明显多于对照组。结论 Apelin可明显促进hiPSC的心肌定向分化。     

心肌营养素-1诱导小鼠诱导性多能干细胞心肌细胞定向分化的实验研究

目的:观察心肌营养素-1(CT-1)对小鼠诱导性多能干细胞(miPSCs)心肌细胞定向分化的诱导作用。方法:实验分为对照组与CT-1处理组。miPSCs经悬滴法诱导形成拟胚体,第3天培养基中加入1μmol/ml CT-1(CT-1组),对照组采用普通培养基。于第4、7、10和14天,收取细胞样本,采用实时PCR检测心脏特异标志物基因的表达。用免疫荧光染色及流式细胞术检测干细胞标志物Oct4和心肌特异性分化标志物肌钙蛋白I(cTnI)的表达。用透射电镜观察心肌样细胞的超微结构。结果:CT-1组第10天,样本中心肌特异性肌钙蛋白T(cTnT)基因表达的水平为同期对照组的1.75倍,有显著性差异(P<0.05)。免疫荧光染色法检测显示,两组均有cTnI表达。流式细胞术鉴定的结果显示,对照组与CT-1组cTnI的阳性率分别为28.5%和56.4%,有显著性差异(P<0.05)。电镜观察显示,CT-1组肌原纤维及胞内线粒体明显增多,肌纤维排列规则,可见细胞间桥粒连接和缝隙连接。结论:CT-1可显著提高miPSC向心肌细胞定向分化的效率。     

LINC00854对急性髓系白血病白细胞细胞系增殖和周期及凋亡的影响

目的 研究长链非编码RNA LINC00854对急性髓系白血病（AML）白细胞细胞系的增殖、周期和凋亡的影响。方法 利用在线GEPIA数据库数据分析LINC00854在正常人（n=70）和AML患者（n=173）中的表达情况;RTqPCR检测LINC00854在人骨髓间充质干细胞（hMSC细胞）和AML白细胞细胞系L99-15、CCRF-CEM、HL-60和THP-1中的表达水平。将AML细胞分为空白组、转染对照序列（si-NC）组、转染LINC00854干扰序列（si-LINC00854）组,四唑化合物（MTS）实验和流式细胞实验分别检测干扰LINC00854表达对HL-60和THP-1细胞增殖、周期和凋亡的影响。结果 LINC00854在AML中的表达水平显著高于正常人,差异有统计学意义（P<0.05）。AML白细胞系L99-15、CCRF-CEM、HL-60和THP-1中LINC00854表达水平均高于hMSC细胞,差异有统计学意义（P<0.001）;但在HL-60和THP-1细胞中LINC00854表达上调更显著,因此,选择这2株细胞进行后续实验。MTS实验结果表明...